Что такое вторичное антитело?
Вторичное антитело — это антитело, которое может связываться с первичным антителом. В основном оно используется для обнаружения присутствия первичного антитела. Первичное антитело специфически связывается с антигеном, а вторичное антитело специфически связывается с первичным антителом. Другими словами, Fc-область или Fab-фрагмент первичного антитела может действовать как антиген, стимулируя организм вырабатывать антитела. То есть первичное антитело в основном представляет собой иммуноглобулины класса IgG, поэтому вторичное антитело представляет собой антитело против IgG.
Роль вторичных антител
Первичное антитело специфически связывается с целевым белком, и первичное антитело должно быть помечено люминесцентным веществом или хромогенной группой. Невооруженным глазом невозможно увидеть, является ли первичное антитело связывать белок. Однако первичное антитело относительно специфично, и каждое из них маркируется с высокой стоимостью. Обычно используют маркированное вторичное антитело, которое может связываться с первичным антителом и имеет обнаруживаемую метку (например, флуоресцентную, радиоактивную, хемилюминесцентную или хромогенную группу). Таким образом, в текущей конструкции обычно есть вторичное антитело с обнаруживаемой меткой для обнаружения первичного антитела, в то время как первичное антитело распознает субстрат. Таким образом, когда первичное антитело связывается с субстратом, его можно обнаружить с помощью вторичного антитела.
Например, принцип люминесценции ECL: в подложке ECL имеются H2О2 и люминол (и его производные), которые испускают флуоресценцию под действием HRP (пероксидазы хрена).
Ключевые моменты использования вторичных антител
Вторичное антитело — это антитело, вырабатываемое путем иммунизации млекопитающих (обычно иммунизации коз, лошадей, ослов, мулов, морских свинок и т. д.) иммуноглобулином IgG определенного подтипа вида первичного антитела (например, кроликов, мышей), поэтому вторичное антитело связывается только с определенным видом и подтипом первичного антитела. Например, овечье антимышиное (вторичное антитело) будет специфически связываться с мышиным моноклональным (первичным антителом) и не будет связываться с кроличьим поликлональным или крысиным моноклональным.
Метки связывания вторичных антител
Различные экспериментальные методы приведут к различным группам связывания для вторичных антител, которые в основном представляют собой ферменты (пероксидаза хрена/HRP и щелочная фосфатаза/AP), флуоресцентные группы (FITC, родамин, PE, Dylight, Alexa Fluor, cy3 и т. д.), биотин, частицы золота и т. д. Обычно вторичные антитела, меченные HRP, рекомендуются для таких экспериментов, как WB, ELISA, IHC, а вторичные антитела, меченные биотином, рекомендуются для IHC, в то время как флуоресцентные метки, такие как Alexa Fluor 488, FITC, PE, используются для IF, FC и т. д.
Как правильно выбрать вторичное антитело
а. Иммуноблоттинг (WB)
Выберите вторичное антитело, меченное пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой, для традиционного вестерн-блоттинга; выберите вторичное антитело, меченное соответствующим флуорофором, для флуоресцентного вестерн-блоттинга.
б.Иммуногистохимия (ИГХ/ИГХ)
Б. Для ИХХ (иммуноцитохимии) выберите вторичное антитело, меченное биотином.
C. Иммунофлюоресценция (ИФЛ/ИКФ)
Иммунопреципитация часто позволяет выбирать между использованием вторичного антитела, специфичного либо к Fc, либо к Fab. Такие вторичные антитела могут избежать помех со стороны тяжелой цепи (молекулярная масса 55 кДа) или легкой цепи (молекулярная масса 25 кДа).
Рекомендуемая информация о продукте
| Группа этикеток | Номер продукта | Название продукта |
| Немаркированный | 34850ES | Козий антикроличий IgG(H+L) |
| 34851ES | Козий антимышиный lgG(H+L) | |
| 34847ES | Ослиные античеловеческие IgG(H+L) | |
| ПХП | 33101ES | Пероксидаза AffiniPure Козий антикроличий IgG (H+L) |
| 33201ES | Пероксидаза AffiniPure козий антимышиный IgG (H+L) | |
| 33301ES | Пероксидаза AffiniPure Козий антикрысиный IgG (H+L) | |
| 33401ES | Пероксидаза AffiniPure козий антитело к морской свинке IgG(H+L) | |
| 33501ES | Пероксидаза хрена, козий античеловеческий IgG (H+L) | |
| 33701ES | Пероксидаза AffiniPure Кролик Анти-Козий IgG (H+L) | |
| 33801ES | Пероксидаза AffiniPure Кролик Анти-Овечий IgG (H+L) | |
| 34201ES | Пероксидаза AffiniPure Ослиный антикроличий IgG (H+L) | |
| 34101ES | Пероксидаза AffiniPure Ослиный антимышиный IgG (H+L) | |
| 34301ES | Пероксидаза AffiniPure Ослиный анти-козий IgG (H+L) | |
| 33101ES | Пероксидаза AffiniPure Козий антикроличий IgG (H+L) | |
| Зелёная флуоресценция | 33106ES | YSFluor™ 488 Козьи антитела к кроличьим IgG (H+L) |
| 33126ES | YSFluor™ 488 Козьи антитела к человеческому IgG (H+L) | |
| 33206ES | YSFluor™488 Козьи антитела к мышиным IgG (H+L) | |
| 33306ES | YSFluor™ 488 Козьи антитела к бычьим IgG (H+L) | |
| 33406ES | YSFluor™ 488 IgG козы против морской свинки (H+L) | |
| 33706ES | YSFluor™488 Кроличьи анти-козьи IgG (H+L) | |
| 33906ES | YSFluor™ 488 Кроличьи антимышиные IgG (H+L) | |
| 34906ES | YSFluor™488 Ослиные антитела к овечьим IgG (H+L) | |
| 34106ES | YSFluor™488 Ослиные антитела к мышиным IgG (H+L) | |
| 34206ES | YSFluor™488 Ослиные антикроличьи IgG (H+L) | |
| 34306ES | YSFluor™ 488 Ослиные антитела к козьим IgG (H+L) | |
| 34406ES | YSFluor™ 488 Ослиные антитела к крысиным IgG (H+L) | |
| 34506ES | YSFluor™488 Осел Антитела IgG морской свинки (H+L) | |
| 34606ES | YSFluor™488 Осел Анти-куриный IgG (H+L) | |
| 34706ES | YSFluor™488 Кроличий анти-куриный IgY(H+L) | |
| 34806ES | YSFluor™488 Ослиные антитела к человеческому IgG (H+L) | |
| 34856ES | FITC AffiniPure Козий античеловеческий IgG(H+L) | |
| 33107ES | FITC-AffiniPure козьи антитела к кроличьим IgG (H+L) | |
| 33207ES | FITC-AffiniPure козьи антитела к мышиным IgG (H+L) | |
| 33307ES | FITC-AffiniPure козий антикрысиный IgG (H+L) | |
| 33707ES | FITC-AffiniPure Кроличьи анти-козьи IgG (H+L) | |
| 33807ES | FITC-AffiniPure Кроличьи анти-овечьи IgG (H+L) | |
| Родамин | 33109ES | Родамин (TRITC) Козий антикроличий IgG (H+L) |
| 33209ES | Родамин (TRITC) Козий антимышиный IgG (H+L) | |
| 33709ES | Родамин (TRITC) AffiniPure Кроличий анти-козий IgG (H+L) | |
| 33210ES | Родамин красный-X (RRX) Козий антимышиный IgG (H+L) | |
| Оранжевая флуоресценция | 33112ES | YSFluor™594 AffiniPure Козьи антикроличьи IgG (H+L) |
| 33212ES | YSFluor™ 594 Козьи антитела к мышиным IgG (H+L) | |
| 33222ES | YSFluor™ 594 Козьи антитела к человеческому IgG (H+L) | |
| 33412ES | YSFluor™594 IgG козы против морской свинки (H+L) | |
| 33312ES | YSFluor™ 594 Козьи антитела к бычьим IgG (H+L) | |
| 33712ES | YSFluor™594 Кроличьи анти-козьи IgG (H+L) | |
| 33812ES | YSFluor™ 594 Кроличьи анти-овечьи IgG (H+L) | |
| 33912ES | YSFluor™594 Кроличьи антимышиные IgG (H+L) | |
| 34712ES | YSFluor™594 Кроличий анти-куриный IgY (H+L) | |
| 34112ES | YSFluor™ 594 Ослиные антитела к мышиным IgG (H+L) | |
| 34212ES | YSFluor™594 Ослиные антикроличьи IgG (H+L) | |
| 34312ES | YSFluor™ 594 Ослиные антитела к козьим IgG (H+L) | |
| 34412ES | YSFluor™ 594 Ослиные антитела к крысиным IgG (H+L) | |
| 34512ES | YSFluor™594 Осел Антитела IgG морской свинки (H+L) | |
| 34612ES | YSFluor™594 Осел Анти-куриный IgG (H+L) | |
| 34812ES | YSFluor™594 Ослиные антитела к человеческому IgG (H+L) | |
| 34912ES | YSFluor™594 Ослиные антитела к овечьим IgG (H+L) | |
| 33208ES | Cy3-AffiniPure Козий антимышиный IgG (H+L) | |
| 33308ES | Cy3-AffiniPure Козий антикрысиный IgG (H+L) | |
| 33708ES | Cy3-AffiniPure Кроличьи анти-козьи IgG (H+L) | |
| 33808ES | Cy3-AffiniPure Кроличьи анти-овечьи IgG (H+L) | |
| 34855ES | Cy3-AffiniPure Ослиные анти-козьи IgG(H+L) | |
| Красная флуоресценция | 33113ES | YSFluor™647 Козьи антикроличьи IgG (H+L) |
| 33213ES | YSFluor™ 647 Козьи антитела к мышиным IgG (H+L) | |
| 33223ES | YSFluor™647 Козьи антитела к человеческому IgG (H+L) | |
| 33313ES | YSFluor™ 647 Козьи антитела к бычьим IgG (H+L) | |
| 33413ES | YSFluor™ 647 IgG козы против морской свинки (H+L) | |
| 33713ES | YSFluor™ 647 Кроличьи анти-козьи IgG (H+L) | |
| 33813ES | YSFluor™647 Кроличьи анти-овечьи IgG (H+L) | |
| 33913ES | YSFluor™ 647 Кроличьи антимышиные IgG (H+L) | |
| 34713ES | YSFluor™647 Кроличий анти-куриный IgY (H+L) | |
| 34113ES | YSFluor™ 647 Ослиные антитела к мышиным IgG (H+L) | |
| 34213ES | YSFluor™ 647 Ослиные антитела к кроличьим IgG (H+L) | |
| 34413ES | YSFluor™ 647 Ослиные антитела к крысиным IgG (H+L) | |
| 34813ES | YSFluor™647 Ослиные антитела к человеческому IgG (H+L) | |
| 34913ES | YSFluor™647 Ослиные антитела к овечьим IgG (H+L) |
Ссылки
[1]Чжан Б., Ван Х., Ляо З. и др.Наночастицы, конъюгированные с EGFP–EGF1, для воздействия на неоваскулярные и глиомные клетки при терапии глиомы мозга [J]. Биоматериалы, 2014, 35(13): 4133-4145. IF: 8.387[2]Yu X, Wang J, Liu J и др. Мультимодальный наноагент на основе пептида Пепстатина А для молекулярной визуализации P-гликопротеина в мозге крыс с эпилепсией [J]. Биоматериалы, 2016, 76: 173-186. ЕСЛИ:8.402
[3]Liu J, He Y, Zhang J и др. Функционализированный наноноситель, комбинированный вектор, специфичный для судорог, с модуляционным свойством P-гликопротеина для доставки противоэпилептических препаратов [J]. Биоматериалы, 2016, 74: 64-76. IF:8.402
[4]Ma Y, Ji Y, You M и др. Маркировка и долгосрочное отслеживание мезенхимальных стволовых клеток костного мозга in vitro с использованием наночастиц NaYF 4: Yb 3+, Er 3+ с повышающей конверсией [J]. Acta biomaterialia, 2016, 42: 199-208. IF: 6.638
[5]Ван И, Линь И, Цяо С. Л. и др. Полимерные наночастицы позволяют реверсировать макрофаги в микросреде опухоли для иммунотерапии [J]. Биоматериалы, 2017, 112(15): 3e163. IF:8.806
[6] Лю С., Хе Х., Лю В. и др. Биаллельные мутации в гене TTC29 вызывают мужскую субфертильность с Астенотератоспермия у людей и мышей[J]. Американский журнал генетики человека, 2019, 105(6): 1168-1181. 34106ES60 ЕСЛИ:9.924
[7]Xu T, Ding W, Ao X и др. ARC регулирует запрограммированный некроз и ишемию миокарда/реперфузионное повреждение посредством ингибирования открытия mPTP [J]. Redox biology, 2019, 20: 414-426.IF（7.126）（Alexa Fluor 488）
[8] Тан Т., Ван И., Ван Дж. и др. Нацеливание биомиметических липопротеинов, декорированных пептидами, улучшает глубокое проникновение и доступность раковых клеток в солидных опухолях. Acta Pharm Sin B. 2020;10(3):529-545. Alexa Fluor 488 маркированный IgG (H+L)IF: 7.097
[9] Гидрогель Photoclick для улучшенного иммуноблоттинга отдельных клеток [J]. Advanced Functional Materials, 2020, 30.33112ES60 ЕСЛИ: 16.836
[10] Бинчэн И a,b,1, Лэй Юк,1, Хань Танга и др. Покрытие из полидофамина, допированного лизином, улучшает антитромбогенность и эндотелизация электропряденого выровненного фиброзного сосудистого прививка.. Прикладные материалы сегодня,2021. 33207ES60 ЕСЛИ:10.041