Введение
Наборы для анализа гена-репортера люциферазы, как незаменимый основной инструмент в разработке лекарств, играют решающую роль в ключевых процессах, таких как высокопроизводительный скрининг, оценка эффективности и валидация целей, благодаря своей способности контролировать экспрессию генов и передачу сигнала в режиме реального времени. Применение этой технологии значительно повысило эффективность скрининга и оценки лекарств, ускорив открытие и разработку новых лекарств.
Принцип обнаружения гена-репортера люциферазы
Технология обнаружения гена-репортера люциферазы позволяет проводить количественный анализ активности люциферазы светлячков, катализируя окисление люциферина в оксилюциферин и генерируя биолюминесценцию. Эта технология имеет значительную прикладную ценность в областях проверки целевого гена miRNA и регуляции транскрипционной активности промотора. Вставляя регуляторные элементы целевого гена выше и ниже гена люциферазы для построения плазмиды-репортера люциферазы, клетки можно трансфицировать и подвергать соответствующей стимуляции или обработке. Впоследствии, путем лизирования клеток и измерения активности люциферазы, можно оценить изменения активности регуляторных элементов при различных условиях стимуляции, тем самым получая более глубокое понимание регуляторных механизмов гена выражение.
Различия между приложениями для обнаружения одинарной и двойной люциферазы
Анализы генов-репортеров в первую очередь делятся на анализы генов-репортеров с одной люциферазой и анализы генов-репортеров с двумя люциферазами. В конкретных приложениях, как можно определить, использует ли эксперимент систему обнаружения с одной люциферазой или с двумя люциферазами? Давайте рассмотрим различия.
Система анализа одиночного репортера люциферазы
Количество репортерных генов: Один ген-репортер люциферазы светлячка;
Тип трансфекции: Плазмида с одним репортерным геном после трансфекции и отбора лекарственных средств используется для создания стабильной линии клеток с репортерным геном, экспрессирующей люциферазу;
Процесс обнаружения: Необходимо обнаружить только сигнал люциферазы светлячка, простота эксплуатации, короткий период обнаружения, подходит для высокопроизводительного скрининга лекарственных препаратов;
Анализ сценария применения: Обычно это происходит посредством создания стабильной сверхэкспрессирующей моноклональной клеточной линии, поскольку уровень экспрессии этих клеточных линий относительно стабилен и однороден, без влияния экспериментальных изменений из-за эффективности трансфекции и жизнеспособности клеток. Операция проста, и поскольку обнаруживается только сигнал люциферазы светлячка, анализ данных более удобен. В сочетании с преимуществами короткого времени обнаружения, это особенно подходит для высокопроизводительного скрининга лекарств и отвечает потребностям крупномасштабного обнаружения образцов.
Система обнаружения гена-репортера с двойной люциферазой
Сообщенное количество генов: Двойные репортерные гены люциферазы светлячков и люциферазы Renilla;
Тип трансфекции: Котрансфекция двух плазмид репортерных генов, в основном посредством временной трансфекции;
Процесс обнаружения: Сначала необходимо обнаружить сигнал светлячка, а затем сигнал Рениллы, и соотношение этих двух сигналов (Светлячок/Ренилла) используется для окончательного расчета данных;
Анализ сценария применения: Обычно это происходит посредством транзиентной трансфекции с котрансфекцией плазмиды, содержащей ген люциферазы Renilla в качестве внутреннего эталона, что обеспечивает эталон для эксперимента, тем самым уменьшая вмешательство внешних факторов, таких как жизнеспособность клеток и эффективность трансфекции. С помощью расчета соотношения можно скорректировать изменения в количестве клеток, эффективности трансфекции и активности клеток, повышая точность экспериментальных результатов. Это важный инструмент в областях регуляции экспрессии генов, путей передачи сигнала и скрининга лекарственных средств.
серия продуктов
Йесен Серия продуктов Luciferase Reporter Gene Detection обеспечивает удобное и эффективное решение для количественного обнаружения. Однокомпонентная конструкция упрощает процесс использования, а идеальное сочетание высокой чувствительности с очень длительным периодом полураспада сигнала в 5 часов отвечает потребностям обнаружения крупномасштабного скрининга наркотиков. Мы предлагаем три продукта: Bio-One Step, Steady-One Step и Bright-One Step, чтобы адаптироваться к различным требованиям чувствительности и стабильности.
| название продукта | Био-One Step | Steady-One Step | Яркий-Один Шаг |
| Код продукта | |||
| Сценарии применения и характеристики | Этот комплект обеспечивает относительный баланс между интенсивностью сигнала и стабильностью. Он поддерживает относительно высокую интенсивность сигнала, а также сохраняет интенсивность сигнала относительно стабильной в течение определенного периода времени. | Период полураспада может длиться более 5 часов. Особенно в течение первых 2 часов изменения значений люминесценции минимальны. Подходит для сверхвысокой пропускной способности или анализов на 384-луночных планшетах. | Высокая чувствительность и высокая интенсивность сигнала. Подходит для экспериментов, требующих высокой чувствительности. |
| Период полураспада сигнала | 60 мин. | 5 ч. | 30 мин. |
| Эксплуатационные характеристики | Один шаг | Один шаг | Один шаг |
Преимущества продукта
Длительный период полураспада сигнала: Период полураспада сигнала может достигать 5 часов, что соответствует требованиям высокопроизводительных экспериментов и позволяет избежать различий в сигналах, вызванных разницей во времени между первой и последней лунками из-за большого количества образцов, что обеспечивает более стабильные и надежные результаты.
Сильный сигнал флуоресценции: Значение сигнала может достигать 8 порядков, обеспечивая большое окно обнаружения и надежную поддержку данных для раннего скрининга лекарственных препаратов и оценки их эффективности.
Простота эксплуатации: Одношаговая операция позволяет избежать сложных экспериментальных процедур. Просто добавьте реагент для обнаружения и подождите 5 минут перед запуском машины для обнаружения.
Несколько вариантов выбора: В зависимости от различных сценариев применения доступны 3 различных продукта, которые можно выбрать на основе экспериментальных требований к значению сигнала и стабильности сигнала.
Данные о продукте
01 Сравнение производительности Yeasen Другой репортерный ген Наборы для анализа
Проверка трех типов наборов для анализа было проведено на клеточных линиях, стабильно экспрессирующих люциферазу светлячка, и результаты показали, что продукт Bright-One Step имеет более высокие значения сигнала; продукт Steady-One Step имеет более длительный период полураспада сигнала и более стабильные сигналы; продукт Bio-One Step не только имеет высокие значения сигнала, но и сохраняет более длительный период полураспада сигнала.
Рисунок 1. Сравнение производительности различных наборов для анализа репортерного гена Yeasen
02 Сравнение реагента для обнаружения гена-репортера люциферазы Yeasen Bio-One Step с конкурирующими продуктами
При использовании Yeasen Bio-One Step, конкурента P и конкурента V на клеточной линии, которая стабильно сверхэкспрессирует люциферазу светлячка, результаты показывают, что величина сигнала и период полураспада сигнала Yeasen Bio-One Step в основном соответствуют конкуренту P, а период полураспада сигнала превосходит конкурента V.
Рисунок 2. Сравнение реагента для обнаружения репортерного гена люциферазы Yeasen Bio-One Step с конкурентами
03 Реагент для обнаружения гена-репортера люциферазы Yeasen Bio-One Step Тест на устойчивость к замораживанию-оттаиванию
Реагент для обнаружения гена-репортера люциферазы Yeasen Bio-One Step прошел многократные эксперименты по замораживанию-оттаиванию, и результаты показывают, что даже после 5 циклов замораживания-оттаивания характеристики продукта остаются стабильными без существенных изменений.
Рисунок 3.Повторный тест замораживания-оттаивания реагента для обнаружения гена-репортера люциферазы Yeasen Bio-One Step
Операционная процедура
01 Трансфекция клеток
Добавьте реагент непосредственно в клеточную суспензию, затем пипетируйте вверх и вниз 5 раз, чтобы обеспечить тщательное перемешивание, подождите 5 минут, чтобы обеспечить полный лизис клеток.
02 Загрузка образца
Внесите пипеткой по 100 мкл смеси (реагент для обнаружения + среда для культивирования клеток) в каждую лунку планшета для обнаружения.
03 Обнаружение флуоресценции
Установите параметры на считывателе планшетов. Поместите детекторную пластину в считыватель планшетов, вибрируйте в течение нескольких секунд, а затем приступайте к детекции.
Список продуктов
| Категория продукта
| Название продукта | Код продукта | Технические характеристики продукта |
| Набор для анализа гена-репортера люциферазы | 11411ES60/80/81 | 100Т/10×100Т/1000Т | |
| 11413ES60/80/81 | 100Т/10×100Т/1000Т | ||
| 11412ES60/80/81 | 100Т/10×100Т/1000Т | ||
| Набор для анализа гена-репортера с двойной люциферазой
| 11402ES60/80 | 100Т/1000Т | |
| 11405ES60/80 | 100Т/1000Т |