1 Механизм действия бластицидина S
Бластицидин S — нуклеозидный антибиотик, выделенный из Streptomyces griseochromogenes, который специфически подавляет синтез белка в прокариотических и эукариотических клетках, препятствуя образованию пептидных связей в рибосоме. Механизм его действия включает блокирование гидролиза пептидил-тРНК, вызванного факторами высвобождения, и усиление связывания тРНК с большой субъединицей рибосомы, тем самым в определенной степени подавляя образование пептидных связей.
Бластицидин S обладает быстрым и мощным механизмом действия, и очень низкие концентрации антибиотика могут привести к быстрой гибели клеток. Он не только значительно подавляет синтез белка у бактерий и эукариот, но и активен против грибков, нематод и опухолевых клеток. Плтоцидин S часто используется для скрининга трансфицированных клеток, несущих гены bsr или BSD.
2 Применение Бластицидина S
2.1 Культура клеток и скрининг
- Клетки млекопитающих: blast S часто используется для скрининга трансфицированных клеток, несущих гены bsr или BSD. Эти гены резистентности, соответственно от B. cereus и Aspergillus, смогли преобразовать муранцидин в авирулентные производные, тем самым обеспечив избирательное уничтожение клеток, не несущих гены резистентности, с рабочими концентрациями бластицидина S в клетках млекопитающих в диапазоне от 1 до 50 мкг/мл.
| Сэлл | Гenus | Оорганизация | Ссреда для культивирования | Концентрация бластицидина S (мкг/мл) |
| HeLa | Человек | Матка | ДМЭМ | 3-10 |
| НЕК293 | Человек | Почка | ДМЭМ | 3-10 |
| В16 | Мышь | Меланома | РПМИ | 3-10 |
| ПК1.0 | хомяк | Аденокарцинома | РПМИ | 10-30 |
| ЧО | хомяк | Яичник | ДМЭМ | 5-15 |
- Бактериальная селекция: В бактериальной культуре рекомендуемая концентрация 25–100 мкг/мл может быстро вызвать гибель клеток без генов резистентности.
E.coli немного менее чувствительна к бластицидину S, но трансформанты толерантны к бластицидину S и могут быть проверены с использованием низкосолевой среды LB (pH 8) в диапазоне концентраций 50–100 мкг/мл бластицидина S, а высокий pH повышает активность бластицидина S.
- Растительные клетки: также применимы к экспериментам по переносу генов в растительных клетках, bsr и BSD обычно используются в качестве скрининговых маркеров.
2.2 Исследования синтеза белка
- Бластицидин SWA использовался для изучения процесса синтеза белка на уровне образования пептидных связей, особенно в клетках HEK293-T и клетках HEK-D5 конструкций TLR-2.
2.3 противогрибковых свойства
- Он также обладает определенной противогрибковой активностью, которая может быть использована для профилактики и лечения пирикуляриоза риса. Его бактерицидное действие в основном направлено на воздействие на синтез белка и может подавлять прорастание спор, развитие гиф и образование спор.
2.4 Другие приложения
- Бластицидин Ш также использовался для изучения ингибирующего действия на опухолевые клетки.
- Он также действует как селекционный агент для трансформированных клеток, содержащих ген устойчивости bls, bsr или BSD.
3 Экспериментальные процедуры, связанные с бластицидином S (скрининг стабильных трансфектантов млекопитающих)
1) Бластицидин S обычно используется в концентрации 10 мкг/мл. Клетки трансфицируются плазмидами, несущими ген bsr или BSD, и инкубируются в нормальной среде роста, содержащей бластицидин S, для отбора стабильных трансфектантов.
2) Через 48 часов после трансфекции перенесите клетки в свежую среду, содержащую соответствующую концентрацию бластицидина S (Примечание: антибиотики работают лучше всего, когда клетки находятся в активной фазе деления. Эффективность антибиотиков снижается, если плотность клеток слишком высока. При разделении клеток слияние не должно превышать 25%).
3) Каждые 3–4 дня удаляйте использованную среду и добавляйте свежую среду, содержащую антибиотик.
4) Через 7 дней проверьте образование колоний клеток. В зависимости от типа клетки-хозяина и эффективности трансфекции/селекции, для образования колоний может потребоваться дополнительная неделя или больше.
5) Перенесите 5-10 резистентных клонов в 35-мм чашки для культивирования клеток и поддерживайте в селективной среде в течение 7 дней. Затем проведите анализы цитотоксичности для тестирования.
4 Рекомендация по продукту
Йесен Биотех Бластицидин S (60218ES) выпускается в двух формах: порошок (1 г) и раствор (10 мг/мл).
| Название продукта | Кот# | Спецификация | Появление |
| Бластицидин S КАС：3513-03-9 | 60218ES10 | 10 мг | Раствор (10 мг/мл) в HEPES Буфер, pH 7,5） |
| 60218ES50 | 5×10 мг | ||
| 60218ES60 | 10×10 мг | ||
| 60218ES80 | 1 г | Порошок (при использовании приготовьте исходный раствор 5-10 мг/мл со стерильной водой или буфером) |
5 Опубликованные статьи с нашими реагентами
[1] Mo J, Tan K, Dong Y, Lu W, Liu F, Mei Y, Huang H, Zhao K, Lv Z, Ye Y, Tang Y. Терапевтическое воздействие на онкогенный драйвер EWSR1::FLI1 при саркоме Юинга посредством ингибирования комплекса FACT. Онкоген. 2023 янв.;42(1):11-25. doi: 10.1038/s41388-022-02533-1. Epub 2022 нояб. 10. PMID: 36357572. (ЕСЛИ:8.0)
[2] Tan K, Mo J, Li M, Dong Y, Han Y, Sun X, Ma Y, Zhu K, Wu W, Lu L, Liu J, Zhao K, Zhang L, Tang Y, Lv Z. Положительная обратная связь SMAD9-MYCN представляет собой уникальную зависимость для нейробластомы, усиленной MYCN. J Exp Clin Cancer Res. 2022 Dec 20;41(1):352. doi: 10.1186/s13046-022-02563-3. PMID: 36539767; PMCID: PMC9764568.(ЕСЛИ:11.3)
6 Сопутствующие товары
| Название продукта | Кот# | Спецификация |
| Ципрофлоксацина гидрохлорид | 60201ES05/25/60 | 5/25/100г |
| Ампициллин, натриевая соль | 60203ES10/60 | 10/100г |
| Доксициклин гиклат | 60204ES03/08/25 | 1/5/25г |
| Хлорамфеникол, класс USP | 60205ES08/25/60 | 5/25/100г |
| Канамицина сульфат | 60206ES10/60 | 10/100г |
| Тетрациклин HCl Тетрациклина гидрохлорид (USP) | 60212ES25/60 | 25/100г |
| Ванкомицина гидрохлорид | 60213ES60/80/90 | 100мг/1г/5г |
| Гентамицина сульфатная соль | 60214ES03/08/25 | 1/5/25г |
| Спектиномицина гидрохлорид | 60215ES08 | 5г |
| Флеомицин (20 мг/мл в растворе) | 60217ES20/60 | 20/5×20мг |
| Бластицидин S (Бластицидин) | 60218ES10/60 | 10/10×10мг |
| Нистатин | 60219ES08 | 5г |
| G418 Сульфат (Генетицин) | 60220ES03/08 | 1/5г |
| Пуромицин (Раствор 10 мг/мл) | 60209ES10/50/60/76 | 1×1 /5 ×1 / 1 0 ×1 /50 ×1 мл |
| Пуромицин дигидрохлорид | 60210ES25/60/72/76/80 | 25/100/250/500 мг/1 г |
| Гигромицин В (50 мг/мл) | 60224ES03 | 1 г (20 мл)/10×1 г (20 мл) |
| Гигромицин В | 60225ES03/10 | 1/10г |
| Эритромицин | 60228ES08/25 | 5/25г |
| Тиментин | 60230ES07/32 | 3.2/10×3.2г |
| Ауреобазидин А (AbA) | 60231ES03/08/10 | 1/5×1/10×1мг |
| Полимиксин В сульфат | 60242ES03/10 | 1/10МЕ |