Введение в продукт

Коллагеназа — это класс эндонуклеаз, которые могут специфически распознавать последовательность Pro-X-Gly-Pro (которая часто встречается в коллагене и редко встречается в других белках) и расщеплять пептидную связь между нейтральной аминокислотой (X) и глицином (Gly) в этой последовательности, а также могут гидролизовать коллаген в соединительной ткани.

Многие протеазы способны гидролизовать одноцепочечные и денатурированные коллагеновые пептиды, но коллагеназа является единственной протеазой, способной разрушать естественные коллагеновые волокна с трехцепочечной суперспиральной структурой, и широко распространена в соединительных тканях, наиболее мощной из которых является «грубая» коллагеназа, секретируемая анаэробной бактерией Clostridium histolyticum.

Коллагеназа Yeasen получена из Clostridium histolyticum, которая представляет собой ферментный «грубый» экстракт, содержащий не только коллагеназу, способную разрушать природный коллаген и ретикулярные волокна, но и некоторые другие протеазы, такие как полисахаридазы, липазы и т. д., которые могут эффективно гидролизовать другие белки, полисахариды и липиды во внеклеточном матриксе соединительной ткани и эпителиальной ткани, поэтому она больше подходит для переваривания тканей.

В настоящее время бактериальная коллагеназа, представленная на рынке, в основном делится на пять типов в зависимости от разницы в активности коллагеназы: коллагеназа типа I, типа II, типа III, типа IV и типа V.

Выбор коллагеназы

Название продукта	Появление	Активность ферментов	Область применения
Тип I Коллагеназа）	Коричневый или желтовато-коричневый кристаллический порошок	≥250 ед/мг твердого вещества	Содержит (коллагеназную, казеиназную, клостридиальную и трипсиновую) активность для изоляции клеток эпителия, легочной, жировой и надпочечниковой ткани.
Тип II Коллагеназа）	Коричневый или желтовато-коричневый кристаллический порошок	≥125 ед/мг твердого вещества	Содержит больше клостридазной активности и подходит для выделения клеток тканей печени, костей, щитовидной железы, сердца и слюнных желез.
Тип III Коллагеназа）	Коричневый или желтовато-коричневый кристаллический порошок	≥100 ед/мг твердого вещества	Он обладает низкой протеолитической активностью, что эффективно для соединительной части пищеварительной ткани и часто используется для диссоциации клеток тканей млекопитающих.
Тип IV Коллагеназа）	Коричневый или желтовато-коричневый кристаллический порошок	≥125 КДУ/мг твердого вещества*	Содержит низкую активность трипсина и обычно используется при подготовке клеток для обеспечения целостности островков и рецепторов.
Тип V Коллагеназа）	Коричневый или желтовато-коричневый кристаллический порошок	≥125 КДУ/мг твердого вещества*	Содержит не менее 7 протеазных компонентов, которые могут быть использованы для выделения ткани островков поджелудочной железы и разделения соединительной ткани на отдельные клетки.

*CDU = единицы переваривания коллагена

Характеристики продукта

Высокая эффективность пищеварения: сырой ферментный экстракт Clostridium histolyticum обладает высокой эффективностью пищеварения для тканей.
Зависимость от активаторов: коллагеназа нуждается в активности активирующих ферментов, таких как двухвалентные катионы, такие как Ca²⁺и Zn²⁺.
Подвержены влиянию ингибиторов: к ингибиторам коллагеназы относятся ЭДТА, ЭГТА и др.; ко вторым — ионы тяжелых металлов (Hg²⁺, Pb²⁺, Кд²⁺); Существуют также некоторые химические агенты, такие как цистеин, гистидин, ДТТ, 2-меркаптоэтанол, о-фенантролин и т. д., которые также оказывают ингибирующее действие на коллагеназу.
Высокая устойчивость к помехам: коллаген не подвержен влиянию сыворотки, используемой для культивирования клеток.

Меры предосторожности при использовании

Применение: Растворить в растворе Хэнкса, Эрла или других сбалансированных солевых растворах, рекомендуемая рабочая концентрация составляет 0,05% ~0,5% (мас./об.)
Температура хранения: 2-8°C
Предложения по использованию:

(1) Для изучения структуры и биосинтеза коллагена часто используют препараты коллагеназы более высокой чистоты, и никакие другие протеолитические активности не используются.

(2) Для диссоциации тканей часто используют грубые препараты коллагеназы, такие как эластаза, трипсин или папаин.

Часто задаваемые вопросы

Плохое пищеварение во время эксперимента

(1) Если это вызвано слабой активностью фермента или недостаточным количеством ионов кальция, коллагеназу следует хранить при низкой температуре и в сухих условиях, а раствор коллагеназы следует заморозить после аликвотирования.

(2) Если это вызвано недостатком ионов кальция, концентрация ионов кальция в растворе коллагеназы должна составлять 5 мМ.

Во время использования происходит гибель клеток

(1) Если имеется избыток протеазы, следует сократить время контакта протеазы или добавить альбумин или инактивированную сыворотку.

(2) Если pH изменяется, следует использовать буфер (например, HBSS); регулярно проверяйте и корректируйте pH.

(3) Если кислорода слишком мало, пищеварительный раствор следует проветрить стерильным воздухом.

Клетки были повреждены во время эксперимента

Если это вызвано слишком большим количеством протеазы, следует уменьшить количество протеазы или добавить альбумин или инактивированную сыворотку.

Заказ

Номер по каталогу	Название продукта	Размер
40507ES60	Коллагеназа I	100 мг, 1 г
40508ES60	Коллагеназа II	100 мг, 1 г
40509ES60	Коллагеназа III	100 мг
40510ES60	Коллагеназа IV	100 мг, 1 г
40511ES60	Коллагеназа V	100 мг

Номер по каталогу	Название продукта	Размер
40123ES60	PerfCel™l Трипсин-ЭДТА (0,25%), Феноловый красный	100 мл
40124ES60	PerfCell™ Трипсин-без ЭДТА (0.25%), без фенолового красного	100 мл
40126ES60	PerfCell™ Трипсин (0,25%), феноловый красный	100 мл
40127ES60	PerfCell™ Трипсин-ЭДТА (0,25%), Феноловый красный	100 мл
40101ES25	Трипсин 1:250(порошок)	25 г
40512ES10/60	Рекомбинантный трипсин PerfCell™ (порошок)	10 мг/100 мг
20416ES60	Рекомбинантный трипсин (MS-SAFE)	100 мкг
40134ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 мл
40135ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 мл
40506ES60	АККУТАЗЕ	100 мл
40104ES60/80	Диспаза II	100 мг/1 г

Коллагеназа ---- пищеварительный инструмент для тканей животных