Предыстория – Что такое ROS
Активные формы кислорода (АФК) являются нормальным продуктом клеточного метаболизма — кислородсодержащей биоактивной молекулой, включая пероксид, супероксид, гидроксильный радикал, синглетный кислород и α-кислород и т. д., которые играют важную регуляторную роль в сигнальных путях клеток и транскрипции, таких как апоптоз, аутофагия, старение, рак и т. д.
Влияние концентрации АФК на клетки — зачем определять АФК?
При низких уровнях активных форм кислорода ROS участвуют во внутриклеточной сигнализации и регуляции в качестве «редокс-мессенджеров». Однако при стрессах окружающей среды (например, ионизирующее излучение, тепловое воздействие, ультрафиолетовые лучи, гипоксия и т. д.) уровни ROS резко возрастают, что может вызвать повреждение ДНК, подавить экспрессию генов, привести к неправильному сворачиванию белка и даже повлиять на синтез белка, вызывая серьезные повреждения клеточных структур, что известно как окислительный стресс.
Как только уровень активных форм кислорода (ROS) превышает возможности эндогенной антиоксидантной защиты, окислительно-восстановительный баланс нарушается, что приводит к структурным или конформационным изменениям ДНК, липидов, белков и в конечном итоге к гибели клетки.
Уровень ROS является важным сигналом повреждения клеток, вызванного нормальными физиологическими функциями и факторами окружающей среды, а определение внутриклеточного уровня ROS имеет большое значение для понимания сигнальных путей и потенциальных механизмов действия некоторых лекарственных средств. Поэтому выбор соответствующих зондов для обнаружения ROS играет важную роль в исследовании механизмов заболеваний и скрининге лекарственных средств.
Как работает обнаружение ROS?
The Набор для анализа активных форм кислорода (CAT# 50101ES01) — наиболее часто используемый метод количественной оценки внутриклеточных уровней активных форм кислорода, основанный на изменениях интенсивности флуоресценции флуоресцентного красителя DCFH-DA (2,7-дихлордигидрофлуоресцеин диацетат).
Сам DCFH-DA не имеет флуоресценции и может свободно проходить через клеточную мембрану, а после попадания в клетку может гидролизоваться внутриклеточными эстеразами с образованием DCFH. Однако DCFH не может проникать через клеточную мембрану, что позволяет зонду легко маркироваться и агрегироваться внутри клетки. Внутриклеточные активные формы кислорода способны окислять нефлуоресцентный DCFH с образованием флуоресцентного DCF. Интенсивность зеленой флуоресценции DCF прямо пропорциональна уровню внутриклеточных активных форм кислорода, а уровень внутриклеточных активных форм кислорода можно узнать, обнаружив флуоресценцию DCF.
В условиях длины волны возбуждения 488 нм и длины волны испускания 525 нм флуоресценция DCF была обнаружена с помощью флуоресцентного микроскопа, лазерного конфокального микроскопа, флуоресцентного спектрофотометра, флуоресцентного микропланшетного ридера, проточного цитометра и т. д., чтобы определить уровень внутриклеточных активных форм кислорода.
Литература, опубликованная клиентами, использующими этот продукт (некоторые примеры)
По состоянию на сентябрь 2022 года в наборе для определения активных форм кислорода ROS (50101ES01) опубликовано 164 статьи с общим импакт-фактором 913,72.
Влияние продукции ROS на поляризацию макрофагов и уничтожение опухолевых клеток (PMID: 35665496; PMID: 35301299; PMCID: PMC8931093PMCID: PMC9353410.
Часто задаваемые вопросы
В1: Какие образцы подходят для тестирования на ROS?
A1: Обычно он используется для обнаружения клеток млекопитающих и подходит только для обнаружения активных форм кислорода в живых клетках или in vivo.
В2: Подходит ли набор для тестирования ROS для обнаружения в сыворотке или плазме?
A2: Не подходит для обнаружения ROS в сыворотке или гомогенате тканей. Можно попробовать суспензии отдельных клеток, приготовленные из свежей ткани.
В3: Можно ли обнаружить растения или бактерии?
A3: Он подходит только для обнаружения активных форм кислорода в живых клетках или in vivo, поскольку период полураспада гидроксильных радикалов и супероксидных радикалов кислорода очень короткий, и он подходит только для обнаружения живых клеток. Растения или бактерии, которые могут быть использованы для обнаружения после подготовки протопластов, этот набор не может обнаружить ROS in vivo.
В4: Как избежать чрезмерного флуоресцентного фона?
A4: После инкубации зонда обязательно смойте все оставшиеся зонды, которые не попали в клетку.
В5: Можно ли определить количество АФК в нормальных клетках?
A5: Содержание активных форм кислорода в нормальных клетках очень низкое, и эффект обнаружения может быть не очень хорошим.
В6: Отрицательные и положительные значения флуоресценции одинаковы. Что происходит?
A6: Это может быть вызвано слишком большой концентрацией добавленного зонда, рекомендуется уменьшить концентрацию зонда на 5–7,5 мкМ, а время инкубации: 15–20 мин.
В7: Флуоресценция положительного контроля слабая. Что происходит?
A7: Положительный контроль Rosup обычно концентрировался на уровне 100 мкМ, и значительное увеличение активных форм кислорода наблюдалось через 30 мин - 4 ч после стимуляции. Эффект положительного контроля активных форм кислорода может значительно различаться между разными клетками. Если увеличение ROS не наблюдается в течение 30 минут после стимуляции, время индукции можно продлить или концентрацию Rosup можно соответствующим образом увеличить.
A8: Тот же зонд, не разделенный, первые 5 раз эффект очень хороший, на этот раз он не окрашен, в чем дело?
Q8: 1. Состояние клеток неудовлетворительное, что приводит к низкой эффективности окрашивания; 2. Время индукции положительного препарата слишком короткое, и уровень активных форм кислорода может быть значительно увеличен путем инкубации при 37 °C в темноте в течение 30 мин - 4 ч; 3. Зонд был заморожен и разморожен более 4 раз, эффективность окрашивания снижена, а сигнал флуоресценции нестабилен (иногда сильный, иногда слабый и легко гаснущий). Рекомендуется аликвотировать зонды и хранить в морозильной камере при температуре -20 °C, защищенной от света, чтобы избежать повторных циклов замораживания-размораживания.
В9: Какие инструменты можно использовать для тестирования?
A9: Значения флуоресценции можно определить с помощью флуоресцентного микроскопа, лазерного конфокального микроскопа, флуоресцентного спектрофотометра, флуоресцентного микропланшетного ридера, проточного цитометра и т. д.
Научно-исследовательские публикации, опубликованные клиентами, использующими этот продукт (частично)
[1] Zhong D, Jin K, Wang R, Chen B, Zhang J, Ren C, Chen X, Lu J, Zhou M. Гидрогель на основе микроводорослей для лечения воспалительных заболеваний кишечника и связанных с ними тревожности и депрессии. Adv Mater. 2024 26 января: e2312275. doi: 10.1002/adma.202312275. Epub перед печатью. PMID: 38277492. ЕСЛИ: 29.4
[2] Чжан М. и др. Призыв иммунных клеток с помощью активируемой светом экзосомы, полученной из NK-клеток (LASNEO), для синергического уничтожения опухолей. Adv Sci (Weinh). 2022 авг.;9(22): e2201135. doi: 10.1002/advs.202201135. Epub 2022 июн. 4. ЕСЛИ: 16.806
[3] Чжан Д. и др. Пероральные микроносители на основе микроводорослей для гомеостаза микробиоты кишечника и защиты кишечника при раке радиотерапия. Nat Commun. 2022 17 марта;13(1):1413. doi: 10.1038/s41467-022-28744-4. PMID: 35301299. ЕСЛИ: 14.919
[4] Цзяо Д. и др.Биосовместимые BMSC, стимулированные восстановленным оксидом графена, вызывают ускорение ремоделирования костей и ортодонтического перемещения зубов посредством стимуляции остеокластогенеза и ангиогенеза. Bioact Mater. 6 февраля 2022 г.; 15:409-425. doi: 10.1016/j.bioactmat.2022.01.021. PMID: 35386350; PMCID: PMC8958387. ЕСЛИ: 14.593
[5] Guo G, et al. Пространственно-селективная хемодинамическая терапия нанокубами CuFe5O8 для инфекций, связанных с имплантатами. ACS Nano. 27 октября 2020 г.;14(10):13391-13405. doi: 10.1021/acsnano.0c05255. Epub 22 сентября 2020 г. PMID: 32931252. ЕСЛИ: 14.588
[6] Yang C и др. Фотодинамическая и фототермическая терапия почечно-клеточного рака с использованием наностержней TiO2, декорированных красным фосфором. Small. 2021 июль; 17(30): e2101837. doi: 10.1002/smll.202101837. Epub 2021 июнь 19. PMID: 34145768. ЕСЛИ：13.281
[7] Сяолу Чен и др. Наночастицы доставки каскадного усиления, инкапсулированные в металл-фенольные сети, преодолевают резистентность к противораковым препаратам с помощью комбинированной голодания/хемодинамической/химиотерапии. Журнал химической инженерии. 2022 август; 442:136221. ЕСЛИ: 13.273
[8] Хао Дин и др. Мезенхимальные стволовые клетки, инкапсулированные в инъекционный гидрогель, поглощающий активные формы кислорода и генерирующий O2, для лечения инфаркта миокарда. Журнал химической инженерии. 2022.133511:1385-8947. ЕСЛИ: 13.273
[9] Ю Х и др. Тройной каскадный нанокатализатор с активируемой лазером подачей O2 и фототермическим усилением для эффективной каталитической терапии гипоксической опухоли. Биоматериалы. Январь 2022 г.; 280:121308. PMID: 34896860. ЕСЛИ: 12.479
[10] Sun D и др. Наноформула на основе циклодекстрина обеспечивает совместную доставку гинзенозида Rg3 и кверцетина для химиоиммунотерапии колоректального рака. Acta Pharm Sin B. 2022 Январь;12(1):378-393. PMID: 35127393. ЕСЛИ: 11.614
[11] Xiong Y и др. Опухолеспецифические активируемые биополимерные наночастицы, стабилизированные пролекарством гидроксиэтилкрахмала для самоусиливающейся кооперативной терапии рака. Theranostics. 2022 1 января;12(2):944-962. PMID: 34976222. ЕСЛИ: 11.556
[12] Gao J, et al. Нацеленная на митохондрии супрамолекулярная «нанолодка», одновременно ингибирующая двойной энергетический метаболизм для селективной и синергической химиолучевой терапии опухолей. Theranostics. 2022 1 января;12(3):1286-1302. PMID: 35154487. ЕСЛИ: 11.556
[13] Чжун Д. и др. Кальций-фосфатные фотосинтетические микроводоросли, созданные для борьбы с гипоксическими опухолями с помощью in situ модулирующей гипоксии и каскадной радиофототерапии. Theranostics. 2021 22 января;11(8):3580-3594. PMID: 33664849. ЕСЛИ: 11.556
[14] Sun J, et al. Цитотоксичность стабилизированной/отвержденной летучей золы от сжигания твердых бытовых отходов. J Hazard Mater. 2022 15 февраля;424(Pt A):127369. doi: 10.1016/j.jhazmat.2021.127369. Epub 2021 29 сентября. PMID: 34879564. ЕСЛИ: 10.588
[15] Чжу Ч. и др. Многофункциональный термочувствительный гидрогель для модуляции микросреды при остеоартрите путем поляризации макрофагов и удаления RONS. J Nanobiotechnology. 2022 7 мая;20(1):221. ЕСЛИ: 10.435
[16] Pan X и др. Наносфера оксида цинка для удаления сероводорода и ферроптоза колоректального рака. J Nanobiotechnology. 2021 27 ноября;19(1):392. doi: 10.1186/s12951-021-01069-y. PMID: 34838036; PMCID: PMC8626909. ЕСЛИ: 10.435
[17] He J, et al. Нанооболочки из золота и серебра способствуют заживлению ран, вызванных бактериями, устойчивыми к лекарственным препаратам, и позволяют проводить мониторинг с помощью визуализации комбинационного рассеяния с улучшенной поверхностью. Биоматериалы. 2020 март; 234:119763. PMID: 31978871. ЕСЛИ: 10.317
[18] Ченг Кью и др. Нанотерапевтические средства вмешиваются в клеточный окислительно-восстановительный гомеостаз, обеспечивая значительное улучшение фотодинамической терапии. Биоматериалы. 2019 декабрь; 224:119500. doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119500. Epub 2019 17 сентября. PMID: 31557591. ЕСЛИ: 10.273
[19] Чжун Д. и др. Агрегированный кубический α-ион, активируемый лазером-Fe2O3@Au nanoкомпозиты для магнитно-резонансной томографии и фототермической/усиленной лучевой синергической терапии. Биоматериалы. 2019 октябрь; 219:119369. PMID: 31351244. ЕСЛИ: 10.273
[20] Sun C и др. Устранение селеноксида манипулирует окислительным стрессом для повышения противоопухолевой эффективности. Биоматериалы. 2019 декабрь; 225:119514. doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119514. Epub 2019 сентябрь 24. PMID: 31569018. ЕСЛИ: 10.273
Рекомендуемые продукты
| Название продукта | Номер по каталогу | Размер |
| 50101ES01 | 1 комплект (1000 тестов) |