В процессе культивирования клеток часто требуется переваривание клеток, поэтому трипсин, используемый для переваривания клеток, будет незаменим для культивирования клеток, а также он очень важен, поскольку влияет на состояние роста клеток.

Трипсин можно разделить на два типа: рекомбинантный трипсин и нерекомбинантный трипсин.

• Нерекомбинантный трипсин получают путем экстракции животных, он имеет животное происхождение и является традиционным применением трипсина, который обычно встречается в пищеварительной системе животных и извлекается непосредственно из ткани поджелудочной железы крупного рогатого скота или свиней.
• Рекомбинантный трипсин производится с использованием генетической рекомбинантной технологии и не имеет животного происхождения.

Введение и применение продукта

Нерекомбинантный трипсин (животного происхождения)

Характеристики продукта：

Нерекомбинантный трипсин (также известный как трипсин) — сериновый протеолитический фермент, выделенный из поджелудочной железы крупного рогатого скота, овец и свиней, который способен специфически расщеплять карбоксильный конец положительно заряженного лизина и аргинина, очищенный методом многократной кристаллизации и дополнительно подготовленный с помощью технологий хроматографии и ультрафильтрации, имеющий животное происхождение.

Поскольку ферменты поджелудочной железы могут воздействовать на трансмембранные белки и белки внеклеточного матрикса, такие как кадгерин, интегрин и т. д., в настоящее время они широко используются для диссоциации тканей и монослоевых клеток. Хотя трипсин может гидролизовать протеолиз между клетками до дискретных клеток, реакция различных тканей или клеток на трипсин различна, и активность диспергированных клеток также связана с концентрацией трипсина, температурой и временем реакции, а способность трипсина диспергировать клетки наиболее сильна в условиях pH 7-9 и температуры 37 °C. Добавление ЭДТА к раствору трипсина в качестве хелатирующего агента связывает кальций и магний в шестизубчатую структуру, что может ослабить адгезию клеток и усилить захват трипсином гидролизованных целевых пептидных связей.

Основным применением трипсина на ранних этапах биофармацевтической деятельности было производство инсулина, а вскоре его стали использовать и в других областях клеточных культур. Ферменты поджелудочной железы животных обычно используются в сывороточной культуре, а состав и концентрация трипсина, добавляемого к разным клеткам, различаются.

Приложения

1. производство инсулина и инактивированных вакцин;
2. Выделение и культивирование клеток тканей;
3. Клиническое и хирургическое применение;
4. Технологические добавки в пищевой промышленности;

Рекомбинантный трипсин (неживотного происхождения)

Характеристики продукта

Рекомбинантный трипсин — это фермент, полученный с использованием технологии генной инженерии, который имеет преимущества хорошей стабильности, высокой чистоты и не животного происхождения. В процессе производства современных биофармацевтических препаратов использование сырья, содержащего животное происхождение, может привнести в продукт потенциальные источники вирусов, вызывающих зоонозные заболевания, такие как BSE коровьего бешенства, вирус ящура и т. д. Для того, чтобы уменьшить источник загрязнения, трипсин синтезируется с помощью технологии генной инженерии, которая решает риск заражения вирусами, который может быть привнесен традиционным свиным или бычьим трипсином.

Рекомбинантный трипсин в основном рекомбинантный, экспрессируемый рекомбинантной E. coli или дрожжевой системой и очищенный многоступенчатой ​​хроматографией, без гетерозимного загрязнения, такого как химотрипсин. Рекомбинантный трипсин имеет те же свойства, что и естественно извлеченный трипсин, с аминокислотной последовательностью, гомологичной последовательности свиного трипсина, которая специфически расщепляет карбоксильные группы в остатках лизина и аргинина в полипептидной цепи.Благодаря своему неживотному происхождению и высокой чистоте он находит широкое применение в фармацевтических разработках, биохимических исследованиях, протеомике и других областях.

Основной рекомбинантный трипсин на рынке — это рекомбинантный свиной трипсин, экспрессируемый в Escherichia coli или дрожжах с использованием технологии рекомбинантной ДНК, и его аминокислотная последовательность полностью соответствует свиному трипсину, с той же активностью и специфичностью, что и у природного трипсина. Он состоит из 223 аминокислот и содержит 6 пар дисульфидных связей. Фермент содержит две активные формы трипсина: α-трипсин и β-трипсин. Его активность ингибируется ингибиторами сериновой протеазы, такими как PMSF и TLCK, хелаторами ионов металлов, такими как EDTA и т. д. Рекомбинантный трипсин используется в бессывороточной культуре, и, как и в случае с трипсином, в разные клетки добавляют разные компоненты и концентрации трипсина.

Приложения

1. производство вакцин и рекомбинантного инсулина;
2. Подготовка образцов тканей для клеточного анализа;
3. Иммуноклеточная терапия;
4. Биофармацевтическое производство;
5. Исследование последовательности, структуры и омики белков

Подробное сравнение продуктов

продукты	Нерекомбинантный трипсин (животного происхождения)	Рекомбинантный трипсин (неживотного происхождения)
Элемент	40123ES（феноловый красный(-),ЭДТА(+)） 40124ES（феноловый красный(-),ЭДТА(-)） 40126ES（феноловый красный(+),ЭДТА(-)） 40127ES（феноловый красный(+),ЭДТА(+)）	40512ES 20416ES (MS-БЕЗОПАСНОСТЬ)
Источник	Получено из поджелудочной железы крупного рогатого скота, свиней и овец.	кишечная палочка (40512ES) Pichia pastoris (20416ES)
Безопасность	Загрязнение потенциальными патогенами	Отсутствие экзогенного вирусного заражения
Чистота	Более 90% раствора трипсина 1:250 составляют примеси.	Высокая чистота (β-трипсин≥ 70%, α-трипсин≤20%）
Тип пищеварительной клетки	Наиболее смежные сильно адгезивные клеточные линии	Наиболее смежные сильно адгезивные клеточные линии
Предел химотрипсина	Не более 50 единиц химотрипсина на 2500 единиц трипсина.	Отсутствие загрязнения мирозиназой и другими примесными ферментами
Специфическая деятельность	≥2500 Единицы USP/мг белка	≥3800 Единицы USP/мг белка
Пищеварительный эффект	нестабильность	Сильное пищеварение и низкое количество ферментов
Скорость самонарезания	Легко саморежущийся и образующий саморежущиеся фрагменты, что влияет на результаты масс-спектрометрического анализа.	Легко саморежущийся и образующий саморежущиеся фрагменты, что влияет на результаты масс-спектрометрического анализа.
Растворенная жидкость	Раствор HBSS с или без Ca2+, Mg2+	Раствор HBSS с Ca2+ и Mg2+ или без них (40512ES); 1 мМ HCL（20416ES）
Выживаемость клеток	Нормальный	Нормальный
Требуется ли замораживание-оттаивание	Да	Да

Помимо наиболее распространенного трипсина, используемого в клеточном пищеварении, существует множество других типов пищеварительных ферментных продуктов, которые также могут быть использованы, например, следующие.

Об области применения коллагеназы

Коллагеназа — это пептидаза-эндонуклеаза, которая может специфически распознавать последовательность Pro-X-Gly-Pro и расщеплять пептидную связь между нейтральной аминокислотой (X) и глицином (Gly) в последовательности. Коллагеназа — единственная протеаза, которая может расщеплять естественные коллагеновые фибриллы с трехцепочечной суперспиральной структурой и может эффективно гидролизовать другие белки, полисахариды и липиды во внеклеточном матриксе соединительной ткани и эпителиальной ткани, что делает этот продукт очень подходящим для переваривания тканей.

1. Коллагеназа I., обычно используемая в качестве препарата эпителиальных клеток, клеток печени, легких, жировой ткани и надпочечников;
2. Коллагеназа II, которая используется для подготовки клеток тканей, таких как сердце, кости, мышцы, печень, щитовидная железа и хрящ;
3. Коллагеназа III, обычно используемая при подготовке клеток молочной железы;
4. Коллагеназа IV, которая обычно используется для подготовки островковых клеток поджелудочной железы или для экспериментов по подготовке клеток, где необходимо сохранить целостность рецепторов.
5. Коллагеназа V., подходит для выделения островковых клеток поджелудочной железы и клеток соединительной ткани.

Об области применения соединения трипсина

Accutase — это клеточный гидролизат, который содержит протеолитическую и коллагеназную активность и является идеальной заменой гидролизата трипсина-ЭДТА для гидролиза клеток из обычных сосудов для культивирования тканей и адгезивных сосудов для культивирования. Accutase подходит для диссоциации тканей и выделения клеток, поскольку изолированные клетки сохраняют интактные поверхностные антигены и не содержат никаких компонентов животного или бактериального происхождения, что может соответствовать требованиям последующих экспериментов, таких как маркировка поверхности клеток, анализ роста вирусов, проточная цитометрия и анализы, связанные с биореактором.

Области применения заменителей панкреатических ферментов

Ферментные продукты PerfCell Tryzyme™ Express отличаются высокой чистотой, мало повреждают клетки, мягко перевариваются и могут стабильно храниться при комнатной температуре, что делает их идеальными пищеварительными ферментами для различных культур клеточных линий. Этот тип продукта не требует использования ингибиторов трипсина для инактивации и не содержит животного происхождения, что более благоприятно для некоторых экспериментов по росту адгезивных клеток без сыворотки.

Об области применения диспаза

Диспаза II Диспаза II, неспецифическая металлопротеиназа, обычно используется в клеточной биологии для выделения отдельных клеток из различных тканей или органов, а также используется в последующих клеточных культурах, таких как выделение первичных клеток, пассирование клеток и т. д., а также может использоваться для устранения агрегации клеток, которая происходит во время суспензионной клеточной культуры. По сравнению с другими протеазами, обычно используемыми в клеточной биологии (например, трипсином, коллагеназой, проназой и т. д.), этот фермент имеет следующие преимущества:

1. Быстрые, эффективные и щадящие ферменты клеточного пищеварения, наносящие минимальный вред клеткам и способные поддерживать целостность клеточных мембран;
2. Получен из бактерий, без заражения микоплазмой или другими вирусами животных;
3. Высокая стабильность, не зависящая от температуры, pH и компонентов сыворотки;
4. Его можно использовать для изоляции различных типов тканей и клеток.

Рекомендации по сопутствующим продуктам

Номер по каталогу	Название продукта	Размер
40123ES60	PerfCel™l Трипсин-ЭДТА (0,25%), Феноловый красный	100 мл
40124ES60	PerfCell™ Trypsin — без ЭДТА (0,25%), без фенолового красного	100 мл
40126ES60	PerfCell™ Трипсин (0,25%), феноловый красный	100 мл
40127ES60	PerfCell™ Трипсин-ЭДТА (0,25%), Феноловый красный	100 мл
40101ES25	Трипсин 1:250(порошок)	25 г
40512ES10/60	Рекомбинантный трипсин PerfCell™ (порошок)	10 мг/100 мг
20416ES60	Рекомбинантный трипсин (MS-SAFE)	100 мкг
40134ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 мл
40135ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 мл
40506ES60	АККУТАЗЕ	100 мл
40104ES60/80	Диспаза II	100 мг/1 г