- ОТ-ПЦР с высокой эффективностью обратного транскриптаза
Обратная транскриптаза (фермент ОТ) — это фермент, способный преобразовывать шаблоны РНК в комплементарную ДНК (кДНК). В молекулярно-биологических исследованиях обратная транскриптаза широко используется, особенно играя незаменимую роль в области молекулярной диагностики. С помощью процесса обратной транскрипции РНК-геном вирусов может быть преобразован в кДНК, которая затем может быть амплифицирована и обнаружена с помощью таких методов, как ПЦР в реальном времени. Эта характеристика позволяет точно диагностировать РНК-вирусы, такие как ВИЧ, грипп А и грипп В.
Рисунок 1. Схематическая диаграмма процесса обратной транскрипции
Стремление к созданию молекулярных диагностических реагентов RT-qPCR, которые быстрее, чувствительнее и проще в использовании, стало основной тенденцией развития в настоящее время. Как один из ключевых исходных материалов в процессе RT-qPCR, обратная транскриптаза должна обладать более высокой скоростью обратной транскрипции, более высоким выходом синтеза и лучшей термостойкостью. Чтобы получить обратную транскриптазу, более подходящую для RT-qPCR, Yeasen разработал HifairТМ серия обратных транскриптаз, полученных путем генетической модификации на основе M-MLV, характеризующихся более низкой активностью РНКазы H, более высокой термостабильностью и более высокой способностью к непрерывному синтезу.
Рисунок 2. Схема действия обратной транскрипции
Хайфайр™Обратные транскриптазы
У Йесена есть множество HifairТМ обратная транскриптаза, и может обеспечить различные формы продукта, включая фермент и премикс, вы можете выбрать в соответствии с фактическими потребностями. В следующей таблице перечислены характеристики и рекомендуемые области применения различных обратных транскриптаз Yeasen.
Таблица 1. Правила отбора из Хифаира™ Обратные транскриптазы| Название продукта (номер продукта) ) | Характеристики продукта | Рекомендуемое применение |
| Термостабильный (до 65°C), подходит для сложных шаблонов | РТ-ЛАМПА | |
| Высокая совместимость, высокая скорость и высокий выход синтеза | Один шаг ОТ-ПЦР/кПЦР |
Примечание: Все упомянутые выше ферменты доступны в высококонцентрированных или не содержащих глицерин формулах.
Теперь мы рассмотрим обратную транскриптазу, используемую в молекулярных диагностических реагентах ОТ-ПЦР: HifairТМ V Обратная транскриптаза. Этот фермент отличается высокой совместимостью, высокой скоростью и высоким выходом синтеза, способен выдерживать температуру реакции до 58°C. Он особенно хорошо подходит для разработки молекулярных диагностических реагентов RT-qPCR.
Демонстрация производительности Hifair™ V обратная транскриптаза
1. Способен выдерживать температуру реакции 58°C, подходит для обратной транскрипции сложных РНК-шаблонов..
Рисунок 3. Обратная транскриптаза HifairТМ V Reverse Transcriptase и бренд T* инкубировали при 55℃ и 58℃ соответственно в течение 30 минут для обнаружения остаточной активности фермента. Результаты показали, что HifairТМ Обратная транскриптаза V все еще могла сохранять 70% активности после инкубации при 58℃ в течение 30 минут, что было намного выше, чем у марки T*.
2. Уровень обнаружения ОТ-ПЦР был лучше, чем у других марок.,и тДиапазон обнаружения составил 1 пг-1 мкг..
Рисунок 4. Используя 1 пг-1 мкг (7 градиентов) общей РНК клеток 293T в качестве матрицы, была проведена обратная транскрипция с помощью Hifair.ТМ V одношаговый RT-gDNA расщепление SuperMix для qPCR(Cat#11142), V*, T*. Полученная кДНК была количественно проанализирована с помощью qPCR. Результаты показали, что чувствительность 11142ES может достигать 1 пг, что лучше, чем у других марок.
Библиотека мутантов обратной транскриптазы Йесена
Йесен продолжает способствовать развитию обратной транскриптазы с его ZymeEditorТМ платформа. На данный момент мы отобрали множество мутантов обратной транскриптазы с превосходной производительностью в различных приложениях, которые могут полностью удовлетворить потребности различных групп клиентов в разнообразных областях применения.Таблица 2. The Руководство по выбору мутанта обратной транскриптазы из Йесен
Рекомендуемые продукты
| Классификация продукции | Название продукта | Номер по каталогу |
| Серия высокоэффективных ферментов ПЦР | 10726ES | |
| 11300ES | ||
| 14455ES | ||
| 10603ES | ||
| 10125ES |