1. Как предотвратить деградацию РНК?

2. Что такое ингибиторы РНКазы?

3. Что делает ингибитор РНКазы?

4. Каковы особенности ингибитора мышиной РНКазы?

5. Сопутствующие товары и производительность

6. Сопутствующие товары

7. Часто задаваемые вопросы

1. Как предотвратить деградацию РНК?

РНКаза играет важную роль в метаболизме нуклеиновых кислот и может быть обнаружена практически у любого типа прокариот и эукариот. РНКаза секретируется в жидкостях организма, таких как слезы, слюна и пот, для защиты от вторжения микроорганизмов, а также РНКаза присутствует в кожных отложениях. Однако основным источником РНКазы в большинстве сред являются микроорганизмы, а именно бактерии и грибки. РН-азу чрезвычайно трудно инактивировать, она проявляет высокую стабильность, термостойкость, кислотостойкость и щелочестойкость. После термической денатурации она может быстро восстановить свою первоначальную структуру. РН-аза обычно очень активна и широко распространена как в эукариотических, так и в прокариотических клетках и тканях. РНК в образце может полностью деградировать даже при незначительном количестве загрязнения РН-азой. Загрязнение РН-азой в исследованиях может происходить как из внутренних, так и из внешних источников. РН-аза в клетках является в первую очередь эндогенным источником загрязнения, в то время как экзогенные источники включают экспериментальные принадлежности, лабораторную среду и самих экспериментаторов. РНКазы, особенно члены семейства РНКазы А, представляют собой небольшие компактные белки, содержащие несколько остатков цистеина, способные образовывать множество внутримолекулярных дисульфидных связей. После возвращения к комнатной температуре, в отсутствие денатурирующего агента, денатурированная РНКаза восстановит свою естественную структуру и некоторые функции. Поэтому РНКазы сохраняют значительную активность после повторных циклов замораживания-оттаивания, даже после автоклавирования. Стабильная природа этих ферментов делает их устойчивыми ко многим методам дезактивации, которые обычно требуют агрессивных химических методов для устранения РНКаз с поверхностей и растворов.

Чтобы избежать деградации уязвимой РНК, необходимо соблюдать особые меры предосторожности при работе с РНК. Для контроля экзогенной РНКазы оператору необходимо надевать перчатки во время эксперимента и менять перчатки после прикосновения к коже, дверным ручкам и поверхности обычных предметов. Оператору необходимо использовать специальный пистолет-пипетку для работы с РНК, а также использовать свободные от РНКазы наконечники для стенок, центрифужные пробирки, соединения и реагенты. Держитесь подальше или закрывайте вентиляционные отверстия и открытые окна и используйте менее посещаемые области в качестве областей, свободных от РНКазы. А во время извлечения и анализа РНК не проводите другие эксперименты, которые могут вызвать загрязнение РНКазой.
Метод ингибирования активности эндогенной РНКазы заключается в первую очередь в сохранении образца. После взятия образца ткани РНК не следует извлекать напрямую. Вместо этого ее следует быстро заморозить и хранить в среде -80°C с жидким азотом по времени, а эксперимент следует проводить как можно скорее, чтобы минимизировать деградацию РНК.Ингибиторы РНКазы добавляются в клеточный лизат для одновременного разрушения клеток и инактивации РНКазы, сводя к минимуму активность РНКазы, высвобождаемой при разрушении клеток. Все реагенты и оборудование перед использованием должны быть специально обработаны для инактивации РНКаз.

Кроме того, ингибиторы РНК могут использоваться для подавления активности РНКазы и предотвращения деградации РНК РНКазой. Существует несколько типов ингибиторов РНК:

• Диэтилпирокарбонат (DEPC): Это сильный, но не полный ингибитор РНКазы. Он денатурирует белок посредством соединения имидазольного кольца гистидина в активной генной группе РНКазы, тем самым подавляя активность фермента.
• Гуанидинизотиоцианат: в настоящее время считается наиболее эффективным ингибитором РНКазы, он также может инактивировать РНКазу при лизисе ткани, что может разрушить структуру клетки и диссоциировать нуклеиновую кислоту от нуклеопротеина, а также оказывает определенное воздействие на РНКазу. Сильный денатурирующий эффект.
• Комплекс ванадилрибонуклеозида: комплекс, образованный ионами оксида ванадия и нуклеозидами, который может соединяться с РНКазой, образуя переходный аналог, почти полностью ингибирующий активность РНКазы.
• Белковый ингибитор РНКазы (РНКазин): кислый гликопротеин, выделенный из печени крысы или бластодиска человека. РНКазин является неконкурентным ингибитором РНКазы, который может связываться с различными РНКазами, инактивируя их.
• Другие: SDS, мочевина, диатомовая земля и т. д. также оказывают определенное ингибирующее действие на РНКазу.

2. Что такое ингибиторы РНКазы?

Ингибиторы РНКазы — это класс веществ, которые могут ингибировать активность РНКазы. Обычные ингибиторы РНКазы включают диэтилпирокарбонат (DEPC), гуанидинизотиоцианат, рибонуклеозидванадилатные комплексы (RVC) и белковые ингибиторы РНКазы (RNasin). Среди них DEPC и гуанидинизотиоцианат обладают определенной токсичностью, а RVC оказывает ингибирующее действие на полимеразу ПЦР, что не способствует последующим экспериментам. RNasin нетоксичен и является неконкурентным ингибитором РНКазы, который может связываться с различными РНКазами, чтобы инактивировать их.

3. Что делает ингибитор РНКазы?

Ингибиторы РНКазы обычно используются в качестве меры предосторожности при ферментативных манипуляциях с РНК для ингибирования и контроля таких загрязняющих веществ. РНКазин — это кислый гликопротеин, извлеченный из печени крысы или бластодермы человека, который может специфически связываться с РНКазой нековалентным образом, образуя комплекс, вызывая инактивацию РНКазы, тем самым защищая целостность РНК. В настоящее время ингибитор РНКазы помогает предотвратить деградацию РНК в таких приложениях, как синтез кДНК, ОТ-ПЦР, реакции транскрипции/трансляции in vitro или очистка РНК.

4. Каковы особенности ингибитора мышиной РНКазы?

Рекомбинантные ингибиторы мышиной РНКазы не содержат 2 цистеина, чувствительных к окислению, которые содержатся в ингибиторах РНКазы человеческого происхождения. Поэтому ингибитор мышиной РНКазы обладает высокой антиоксидантной активностью и более стабилен для экспериментов с низким DTT. Кроме того, ингибитор мышиной РНКазы Yeasen имеет следующие особенности:
1) Всестороннее ингибирование РНКазы: ингибитор мышиной РНКазы YEASEN специфически ингибирует РНКазу A, РНКазу B, РНКазу C и т. д.
2) Универсальные условия реакции: ингибитор РНКазы активен при pH 5,0–9,0 и температуре 25–55 ℃, что подходит для термостабильной обратной транскриптазы.
3) Возможно проведение множественных экспериментов ниже по течению: при использовании ингибитора РНКазы с ДНК-полимеразой Taq, обратной транскриптазой AMV или M-MuLV или фаговыми РНК-полимеразами (SP6, T7 или T3) ингибирования активности полимеразы не наблюдается.
4) Товары массового производства: единая производственная мощность в 2 млрд единиц продукции способствует управлению затратами, обеспечивая однородность продукции, стабильность поставок и своевременность.
5) Стабильность от партии к партии: платформа для экспрессии и очистки зрелого белка с использованием системы управления качеством ISO13485, тестирование контроля качества в соответствии с требованиями к качеству для обеспечения стабильности продукта между партиями.

5. Сопутствующие товары и производительность

А. Ингибитор РНКазы блокирует активность РНКазы

1 мкг общей РНК клеток HEK, 1 мкл ингибитора РНКазы могут эффективно ингибировать 5 нг РНКазы.

Рисунок 1. Ингибирующий эффект ингибитора мышиной РНКазы.

B. Ингибитор РНКазы превосходит зарубежные продукты в тестировании методом ПЦР

Ингибирующее воздействие ингибиторов РНКазы, полученных от мышей Yeasen и R* Company (МРТ), измерялось с использованием метода ПЦР в идентичных экспериментальных условиях, и ингибитор РНКазы источника YEASEN Murine эффективно ингибировал РНКазу A в системе. Воздействие ингибирования превосходило таковое у конкурентов.

Рисунок 2. Тест ингибирования РНКазы R* МРТ

Примечание: кривые на рисунке слева направо: положительный контроль (только РНК, без РНКазы и МРТ), 40 ЕД МРТ, 30 ЕД МРТ, 20 ЕД МРТ, 10 ЕД МРТ и отрицательный контроль (РНК + РНКаза, без МРТ).

Рисунок 3. Тест ингибирования РНКазы МРТ по Йесену

Примечание: кривые на рисунке слева направо: положительный контроль (только РНК, без РНКазы и МРТ), 80 ЕД МРТ, 60 ЕД МРТ, 40 ЕД МРТ, 30 ЕД МРТ, 20 ЕД МРТ, 10 ЕД МРТ, отрицательный контроль (РНК+РНКаза, без МРТ).

Рисунок 4. Результаты КТ ОТ-ПЦР МРТ Йезена и МРТ R*

6. Сопутствующие товары

Сопутствующие продукты, которые может предоставить Yeasen, показаны в Таблице 1:

Таблица 1.Список продуктов

7. Часто задаваемые вопросы

В1: Будет ли в составе ингибитора мышиной РНКазы содержаться РНКаза?
A: Каждый реагент будет определять активность РНКазы, чтобы гарантировать, что ингибитор мышиной РНКазы не приведет к загрязнению РНКазой.
В2: Окажут ли ингибиторы мышиной РНКазы влияние на последующие эксперименты ПЦР?
A: Это не даст никакого эффекта. Каждая партия ингибитора мышиной РНКазы свободна от геномного загрязнения после проверки качества и может использоваться в исследованиях ОТ-ПЦР и ОТ-кПЦР.
В3: Будет ли инактивирован ингибитор мышиной РНКазы?
A: Ингибиторы инактивируются при температуре выше 65°C, интенсивное перемешивание также приводит к инактивации.
В4: Какие меры предосторожности следует соблюдать при использовании ингибитора мышиной РНКазы для подготовки реакционной системы?
Ответ: При подготовке системы можно сначала добавить ингибитор РНКазы, а затем уже добавлять другие компоненты, которые могут стать источниками загрязнения РНКазой.
В5: Обладает ли ингибитор мышиной РНКазы эндонуклеазной и экзонуклеазной активностью?
Ответ: Эндонуклеазная и экзонуклеазная активность отсутствует, что способствует повышению выхода продукта.

По поводу чтения:

Ингибиторы мышиной РНКазы — успешно устраняют загрязнение РНКазой и сохраняют РНК

Выбор обратной транскриптазы

YEASEN Термолабильный UDG ——Легко контролирует аэрозольное загрязнение

Высококачественное сырье для изотермического усиления — делает RT-LAMP более чувствительным и быстрым!