Обратная транскриптаза, также известная как РНК-зависимая ДНК-полимераза, представляет собой фермент ДНК-полимеразу, который транскрибирует одноцепочечную РНК в ДНК. Эффективность обратной транскриптазы напрямую влияет на конечную эффективность молекулярных диагностических реагентов. В ответ на болевые точки производителей молекулярных диагностических реагентов Yeasen осуществил направленное преобразование обратной транскриптазы. Обратная транскриптаза имеет превосходную эффективность и хорошо принята клиентами!

1. Какова функция обратной транскриптазы?
2. Как выбрать обратную транскриптазу?
3. Почему стоит выбрать обратную транскриптазу Йесена?
4. Сопутствующие товары и производительность
5. Сопутствующие товары

1. Какова функция обратной транскриптазы?

Обратная транскриптаза — это РНК-зависимая ДНК-полимераза. Она может транскрибировать шаблонную РНК и образовывать комплементарную ДНК (кДНК). Одноцепочечная кДНК преобразуется в двухцепочечную ДНК с помощью ДНК-полимеразы. Поэтому обратные транскриптазы обычно используются для количественной оценки уровня синтеза мРНК в сочетании с методом полимеразной цепной реакции, называемым ОТ-ПЦР. Количественные анализы ОТ-ПЦР обычно используются при диагностике заболеваний. Поэтому обратная транскриптаза играет важную роль в научных исследованиях и практическом применении.

2. Как выбрать обратную транскриптазу?

Распространенными обратными транскриптазами являются M-MLV и AMV, среди которых M-MLV лучше, чем AMV. Но обычные ферменты ОТ имеют два активных центра, один из которых выполняет полимеразную активность, а другой — рибонуклеазную активность H. РНаза H — это эндонуклеаза, способная расщеплять РНК-фрагмент семейства гибридов ДНК–РНК. Поэтому обратная транскриптаза, лишенная активности РНазы H, полезна для синтеза кДНК. Кроме того, использование термостабильной версии ОТ полезно для снижения неспецифической амплификации нуклеиновых кислот и минимизации влияния сложных вторичных структур.

3. Почему стоит выбрать обратную транскриптазу Йесена?

Йесен осуществил направленную модификацию обратной транскриптазы, которая устраняет активность РНКазы H, тем самым улучшая способность синтеза кДНК. Использование технологии белковой эволюции для улучшения термостабильности обратной транскрипции.

Обратная транскриптаза Yeasen имеет не только сильную способность синтеза, но и сильную способность переносимости. Кроме того, Yeasen предъявляет строгие требования к качеству. Это лучший выбор для обратной транскриптазы.

4. Сопутствующие товары и производительность

4.1 Устойчив к высокой температуре 65°C

Используя 500 нг общей РНК клеток 293T в качестве шаблона, обратную транскрипцию проводили при температуре 42°C-65°C с использованием обратной транскриптазы Hifair™ Ⅲ. Возьмите 1 мкл кДНК в качестве шаблона для амплификации гена TFRC (4,4kb).

Рисунок 1. Проведение обратной транскрипции при температуре 42°C-65℃

4.2 Совместимость со сложными шаблонами

Температура реакции 55°C может удовлетворить потребности обратной транскрипции обычных шаблонов и шаблонов вторичной структуры, а температура реакции шаблонов с высоким содержанием GC может быть соответствующим образом увеличена до 65°C.

Рисунок 2.Подходит для шаблонов с высоким содержанием GC и шаблонов вторичной структуры

4.3 Отличная производительность расширения

Используя 500 нг общей РНК клеток 293T в качестве матрицы и Oligo(dT) в качестве праймера, синтезировали кДНК с помощью обратной транскриптазы Hifair™ Ⅲ. Возьмите 1 мкл кДНК в качестве матрицы для амплификации 500 пн 5' гена DY1C1N1 (19,9 кб). Результаты показали, что обратная транскриптаза Hifair™ Ⅲ может синтезировать кДНК размером до 19,8 кб.

Рисунок 3. Можно синтезировать до 19,8 кб кДНК

4.4 Быстрый синтез

Используя РНК клеток 293T в качестве шаблона, обратная транскрипция была проведена в соответствии со стандартной процедурой в руководстве, а время обратной транскрипции было установлено в соответствии с 5, 10, 15, 30, 45 и 60 минутами соответственно. Обратная транскриптаза Hifair™ III может синтезировать 6kb cDNA в течение 5 минут, а ее специфичность и выход превосходят таковые у марки V.

Рисунок 4. 6 кб кДНК можно синтезировать за 5 минут

4.5 Широкий линейный диапазон

Используя 5 пг-5 мкг общей РНК клеток 293T в качестве матрицы, кДНК была синтезирована с помощью обратной транскриптазы Hifair™ III. 1 мкл кДНК использовался в качестве матрицы, и была проведена qPCR на четырех генах, и результаты показали, что эффективность амплификации составила от 98% до 100,10%. Это показывает, что кДНК может быть эффективно синтезирована в широком линейном диапазоне матриц.

Рисунок 5. кДНК может быть эффективно синтезирована в широком диапазоне шаблонов

4.6 Строгий контроль качества

Для обеспечения стабильной работы обратного фермента Yeasen, Yeasen строго выполняет требования в производственном процессе для стабилизации производственного процесса и обеспечения стабильности партии. В то же время усиливается контроль качества для обнаружения остатков, включая экзонуклеазу, никазу, РНКазу и т. д., чтобы убедитесь, что не осталось никаких остатков, чтобы не повлиять на последующие эксперименты.

Рисунок 6. Обнаружение остатков

5. Сопутствующие товары

Компания Yeasen предлагает следующую продукцию.

Таблица 1. Сопутствующие товары

Относительно чтения

Руководство по выбору обратной транскриптазы

ЙЕСЕН УДГ: «Эксперт по борьбе с обрастанием» в реакциях ПЦР