В последние годы разработка и применение технологии мРНК продолжают привлекать внимание. Препараты мРНК включают введение мРНК, кодирующей антигенные белки, в организм человека. Используя генетический материал внутри клеток человека, они экспрессируют и синтезируют антигенные белки. Этот процесс индуцирует и активирует иммунную систему организма через антигенные белки, стремясь предотвращать и лечить заболевания. Препараты мРНК имеют такие преимущества, как безопасность, эффективность и короткий цикл. Они могут одновременно индуцировать гуморальный и клеточный иммунитет и применяются при различных показаниях, включая опухоли, инфекционные заболевания, редкие заболевания, сердечно-сосудистые заболевания и многое другое.
Весь процесс разработки мРНК-препаратов можно условно разделить на несколько этапов:
Определение и проектирование последовательности — транскрипция мРНК in vitro — подготовка к инкапсуляции
The общепринятый Этапы транскрипции мРНК in vitro (IVT) включают:
Извлечение и линеаризация плазмидной ДНК—Очистка плазмидной ДНК—Транскрипция in vitro (котранскрипционное кэпирование) —Очистка —Маточный раствор мРНК
The onepot Процесс транскрипции мРНК in vitro (IVT) включает:
Извлечение и линеаризация плазмидной ДНК—Транскрипция in vitro (котранскрипционное кэпирование) — Очистка — исходный раствор мРНК
В настоящее время большинство существующих процессов включают один этап очистки плазмидной ДНК после ферментативного расщепления перед этапом IVT. Yeasen Biotechlogy, на основе центра разработки приложений зрелой мРНК, разработала процесс «Onepot mRNA Transcription». В этом процессе кольцевая плазмидная ДНК не очищается после ферментативного расщепления; вместо этого она напрямую используется для транскрипции in vitro, что приводит к высококачественному исходному раствору мРНК. Весь этот процесс, гарантируя качество продукта и процесса, сокращает продолжительность существующего процесса.
Преимущества процесса:
- Оптимизация процесса, сокращение этапов IVT для упрощения эксплуатации.
- Снижение затрат на материалы, устранение необходимости в очистке после расщепления и контроле качества.
- Поддержание качества и выхода мРНК.
Данные:
1. Урожайность и Честность:
Используя Из 1 мкг линеаризованных плазмид 2K, 4K и 9K в ходе однореакторного процесса можно получить 150–200 мкг мРНК.
| Длина | Урожайность | Честность |
| 2К | 200 мкг | 94.00 % |
| 4К | 185 мкг | 92.20 % |
| 9К | 150 мкг | 87.50 % |
Тестирование целостности проводилось с использованием капиллярного электрофореза (КЭ) для оценки целостности фрагментов длиной 2К, 4К и 9К. Целостность фрагментов 2К и 4К составила >92%, а целостность фрагментов 9К составила >87%.
2. Определение эффективности кэпирования мРНК
Для оценки эффективности кэпирования последовательности 2К использовался метод ЖХ-МС, который показал эффективность кэпирования 99,5%.
Верхнее изображение: УФ-хроматограмма ВЭЖХ
Нижнее изображение: деконволюционный спектр молекулярной массы.
3. Определение эффективности полиаденилирования мРНК
Для определения эффективности полиаденилирования образцов использовался метод ЖХ-МС, который показал нормальное распределение результатов.
Верхнее изображение: хроматограмма TIC жидкостной хроматографии
Нижнее изображение: деконволюционный спектр молекулярной массы.
4.Экспрессия мРНК Анализ
Трансфекция клеток 293T продуктами мРНК, синтезированными с использованием как общепринятый процесс (Слева, линеаризованные плазмиды жс очищением) и однореакторный процесс (справа, линеаризованные плазмиды без очистки) не показал никакой разницы в экспрессии флуоресцентного белка после 24 часов культивирования.
Информация о заказе