Суть количественной оценки библиотеки NGS заключается в количественной оценке нуклеиновых кислот (ДНК или РНК). Точный анализ количественной оценки библиотеки NGS имеет решающее значение для получения высококачественных данных секвенирования. Если количественная концентрация библиотеки NGS высока, выход данных секвенирования может быть низким из-за недостаточной кластеризации. Однако низкая количественная концентрация может вызвать помехи сигнала между кластерами, что приведет к получению некачественных данных и даже к сбою секвенирования. Кроме того, с увеличением потока секвенирования секвенаторов несколько библиотек NGS часто объединяются для секвенирования. В соответствии с требованиями к размеру данных секвенирования библиотеки NGS с соответствующими молярными количествами смешиваются на основе количественных результатов для стабилизации вывода размера данных каждого образца. Поэтому точная количественная оценка библиотеки NGS библиотек имеет решающее значение.

В настоящее время существует два основных метода количественной оценки библиотеки NGS: метод поглощения ультрафиолета и метод флуоресцентного красителя. NanoDrop — это прибор для количественной оценки ДНК, разработанный на основе принципа поглощения ультрафиолета; Qubit — это прибор для количественной оценки ДНК, разработанный на основе принципа флуоресцентного красителя. Количественная точность и стоимость этих двух методов различны. Здесь в основном рекомендуется метод кубита. Так почему же мы рекомендуем вам кубит? Каковы характеристики продукции Qubit, поставляемой Yeasen? Пожалуйста, продолжайте читать...

1. Почему мы рекомендуем вам Qubit?

2. Каковы характеристики продукции Qubit, поставляемой Yeasen?

• Как работает Кубит?
• Популярный продукт, поставляемый Yeasen
• Характеристики продукта

3. Как выбрать Кубит для разных образцов?

1. Почему мы рекомендуем вам Qubit?

Нет сомнений, что Qubit лучше Nanodrop. Так почему же Qubit лучше nanodrop? В чем разница между Qubit и nanodrop? Во-первых, как упоминалось ранее, они различаются по принципу количественной оценки ДНК, NanoDrop разработан на основе поглощения ультрафиолета. Принцип метода поглощения ультрафиолета заключается в том, что в компонентах нуклеиновой кислоты присутствуют пуриновые и пиримидиновые основания, и эти основания имеют сопряженные двойные связи. В УФ-области наблюдается сильное поглощение света при 250–280 нм, а максимальное значение поглощения составляет около 260 нм. Поэтому УФ-поглощение нуклеиновой кислоты можно использовать для количественной оценки концентрации. NanoDrop прост и быстр в работе, но он не может различать ДНК, РНК, деградированные нуклеиновые кислоты, свободные нуклеотиды и другие примеси. Он не подходит для получения точных количественных данных библиотеки. Но количественное определение Qubit является лучшим выбором для точной количественной оценки библиотеки NGS, особенно для количественной оценки ДНК. Итак, каковы особенности квантификации ДНК кубита? Пожалуйста, просмотрите следующую таблицу:

2. Каковы характеристики продукции Qubit, поставляемой Yeasen?

Прежде чем представить характеристики продукции Qubit, поставляемой компанией Yeasen, давайте разберемся, как она работает.

2.1 Как работает Кубит?

Принцип работы Qubit заключается в использовании флуоресцентных красителей для связывания с молекулами ДНК для испускания флуоресценции, а затем измерении интенсивности флуоресценции для получения концентрации нуклеиновой кислоты. Флуоресцентные красители флуоресцируют только после связывания с двойной цепью ДНК, и результирующая флуоресценция пропорциональна концентрации ДНК.

2.2 Популярный продукт, поставляемый Yeasen

The 1×Набор для анализа dsDNA HS для Qubit® (каталожный номер: 12642ES), разработанный на основе Набор для анализа dsDNA HS для набора Qubit® (Cat#: 12640ES) — это готовый к использованию раствор Qubit premix для предварительного разбавления концентрированных красителей в исходном наборе в рабочий раствор. При работе вам нужно только смешать рабочую жидкость с образцом для тестирования, чтобы определить концентрацию образца с помощью флуориметра Qubit®, что более удобно в использовании.

2.3 Характеристики продукта

Простота и удобство эксплуатации: готовая к использованию предварительно смешанная жидкость, нет необходимости готовить рабочую жидкость, простота эксплуатации, количественная экономия времени;

Рисунок 1. Процессы набора для анализа dsDNA HS для Qubit

Сверхвысокая чувствительность: 64-кратное градиентное разбавление, точное количественное определение, 0,2-100 нг dsDNA имеет хорошую линейную зависимость;

Суперспецифичность: специфическое обнаружение двухцепочечной ДНК, отличная устойчивость к некоторым обычным загрязняющим веществам;

Высокая скорость связывания красителя: насыщение достигается в течение 2 мин, поэтому нет необходимости ждать быстрого считывания точных количественных результатов;

Высокая стабильность: сигнал флуоресценции сохранялся в течение 3 часов, а количественная точность не изменилась после 20 дней при комнатной температуре.

Рисунок 1. Тест на стабильность продукта. Результаты показывают, что он остается стабилен после хранения при комнатной температуре в течение 2 недель (отклонение между измеренным значением и теоретическим значением составило <10%)

Примечание: Были выбраны две концентрации двухцепочечной ДНК: Thermo#Q33230, хранившаяся при 4 ℃, Yeasen#12642, хранившаяся при 4 ℃, и Yeasen#12642, хранившаяся при комнатной температуре (около 25 ℃), для определения значений концентрации в разное время, а также была рассчитана скорость отклонения между каждым измерением и первым (обозначенным как 0d).

Рисунок 2. Тест на стабильность продукта. Суперстабильность, высокая релевантность результатов теста в течение срока действия

3. Как выбрать Кубит для разных образцов?

Qubit, быстрая квантификация! Использование Qubit для квантификации библиотеки имеет много преимуществ. Его процесс обнаружения быстрый и эффективный.Результаты секвенирования могут быть получены в течение нескольких секунд для одного образца, а концентрация может быть выведена напрямую, что очень интуитивно понятно. В то же время, он также может быть совместим с большинством инструментов ферментной метки для количественного анализа партии образцов, что является первым выбором для обычного количественного анализа библиотеки и количественного анализа dsDNA.