HiActi™ Цитокины, подтвержденные в культивируемых органоидах

В 2021 году органоиды будут включены в список ключевых проектов национального плана ключевых исследований и разработок «14-й пятилетний план». Органоиды настолько популярны, что способ их получения также оказался в центре внимания. Разные органоиды требуют разных цитокинов во время культивирования. Добавляя цитокины, которые стимулируют или ингибируют определенные сигнальные пути, можно заставить стволовые клетки дифференцироваться в желаемые органоиды. Самым классическим протоколом культивирования цитокинов в культуре органоидов является WNER (соответственно: Wnt-3a, Noggin, EGF и R-Spondins), и увеличение или уменьшение комбинации этих 4 факторов может применяться практически ко всем экспериментам по культивированию органоидов.

Цитокины, обычно используемые в органоидной культуре

Р-Сподин 1

Функция: R-Spodin 1 принадлежит к семейству регуляторов Wnt Rspo, включающему 4 члена, а именно Rspo1-4. Это семейство является микроэкологическим фактором, который поддерживает взрослые стволовые клетки во многих органах. RSPO1 является секретируемым активаторным белком. Rspo-1 экспрессируется в определенных областях развивающейся центральной нервной системы, а также обнаруживается в надпочечниках, яичниках, яичках, щитовидной железе и трахее.

Как активатор сигнального пути Wnt, Rspo1 играет роль во многих аспектах, усиливая сигнализацию Wnt. Это широко используемая среда роста для эпителиальных органоидов желудка, тонкого кишечника и толстой кишки, печени, простаты, поджелудочной железы и груди. фактор.

Wnt-3a

Функция: Wnt-3a принадлежит к семейству сигнальных белков Wnt и играет важную роль в поддержании целостности эмбриональных и взрослых тканей. Семейство Wnt высококонсервативно и богато цистеином. Wnt опосредуют сигнальный путь Wnt, связываясь с рецепторами клеточной мембраны и/или связываясь с соседними рецепторами клеточной мембраны. Сигнальный путь Wnt можно разделить на канонический путь и неканонический путь, один участвует в каноническом сигнальном пути, опосредованном β-катенином, включая Wnt1, Wnt2, Wnt2b, Wnt3, Wnt3a, Wnt7a, Wnt8, Wnt8b и Wnt10a; другой не участвует Неканонические сигнальные пути, зависящие от β-катенина, включая Wnt4, Wnt5a, Wnt6 и Wnt11. Будучи наиболее представительным сигнальным белком семейства Wnt, Wnt3a широко распространен и играет ключевую роль в регуляции плейотропных клеточных функций, включая самообновление, пролиферацию, дифференцировку и подвижность.

ЭФР

Функция: EGF является мощным фактором роста, который стимулирует множественное развитие эпителия, ангиогенез, ингибирование секреции желудочной кислоты, пролиферацию фибробластов и образование колоний эпидермальных клеток в культуре. EGF является одним из основателей семейства EGF, которое также включает TGF-α, два регуляторных белка (AR), белок β-клеток (BTC), эпидермальный белок (EPR), гепарин-связывающий фактор роста, подобный EGF (HB-EGF), эпипротеины и нейрегулины (NRG1-6). Физиологически EGF существует в различных жидкостях организма, включая кровь, молоко, мочу, слюну, сперму, панкреатический сок, спинномозговую жидкость и амниотическую жидкость. EGF является высокоаффинным лигандом для рецептора EGF (ErbB). EGF связывается и индуцирует димеризацию рецептора EGF, что приводит к активации сигнального пути тирозинкиназы белка, тем самым передавая сигнал семейства EGF.

Ноггин

Функция: Ноггин может ингибировать лиганды семейства TGF-β и предотвращать их связывание с соответствующими рецепторами.Noggin был первоначально обнаружен как антагонист BMP-4, а затем было показано, что он модулирует активность других BMP (BMP-2, 7, 13 и 14). Noggin высококонсервативен среди позвоночных. Секретируемые белки Noggin регулируют активность костных морфогенетических белков во время развития. Роль антагониста сигнализации BMP Noggin в развитии остеолитических метастазов в костях при раке простаты.

бФГФ/ФГФ-2

Функция: bFGF, член суперсемейства митогенных белков FGF. Это высокоспецифичный хемотаксический и митогенный фактор для многих типов клеток и, по-видимому, участвует в ремоделировании поврежденных тканей, таких как заживление язв, восстановление сосудов, травматическое повреждение мозга. bFGF является важным компонентом среды культивирования эмбриональных стволовых клеток человека. Кроме того, белок bFGF является гепарин-связывающим катионным белком, участвующим в различных патологических состояниях, включая ангиогенез и рост солидных опухолей. Поэтому bFGF считается мишенью для химиопрофилактики рака и терапевтических стратегий. bFGF часто используется в качестве важного компонента среды культивирования клеток, такой как среда культивирования эмбриональных стволовых клеток человека, бессывороточная система культивирования.

ФГФ-10

Функция: Фактор роста фибробластов 10 (FGF-10) — это гепарин-связывающий фактор роста, принадлежащий к семейству FGF. Белки этого семейства играют центральную роль в пренатальном развитии, постнатальном росте и регенерации различных тканей, способствуя пролиферации и дифференцировке клеток. FGF-10 секретируется мезенхимальными клетками и связывается с внеклеточным FGF-BP, FGF-10 преимущественно связывается и активирует эпителиальный FGF R2 (IIIb) и слабо взаимодействует с FGF R1 (IIIb).

Всистема управления качеством из HiActi™ цитокин

Система управления качеством

• Цитокины, сертифицированные по стандарту ISO 13485:2016, производятся в ходе полностью закрытого сверхчистого производственного процесса, что гарантирует чистоту и стабильность белков.
• Соблюдать систему «Надлежащей производственной практики для лекарственных средств»
• Иметь сертификат качества (COA)
• Асептическая технология и вторичная стерилизующая фильтрация
• База производства сырья для фармацевтической продукции

Управление обеспечением качества

• За систему обучения управленческого персонала отвечает специальное лицо.
• Установить процедуры обслуживания и калибровки оборудования
• Система управления сырьем и поставщиками
• Полные записи о серийном производстве, записи о проверке партий, записи об упаковке и т. д.
• Записи документов по качеству были проверены и проверены отделом контроля качества.
• Полные записи о серийном производстве и проверках
• Валидация аналитических методов

Система контроля качества

• Соблюдать третье общее правило Фармакопеи Китайской Народной Республики издания 2020 года: контроль качества сырья и вспомогательных веществ для производства биологического продукта.

Валидация органоидной культуры

Йесен Цитокины были проверены на органоидах опухолей человека, таких как рак легких, рак шейки матки, рак яичников, рак поджелудочной железы и рак кишечника, а также на нормальных органоидах, таких как органоиды тонкого кишечника человека и мыши.

Сопутствующая информация о продукте