Человеческий WNT3A, экспрессируемый в клетках HEK293, демонстрирует высокую активность, способствуя выращиванию органоидов

Органоиды — это трехмерные модели, созданные in vitro, очень похожие на естественные ткани или органы, и они имеют важное значение в областях моделирования заболеваний, омоложения органов и индивидуального медицинского ухода. Выращивание этих органоидов требует тщательного управления разнообразным набором цитокинов, причем Wnt3a выделяется как часто используемый фактор, который играет ключевую роль в выращивании органоидов, полученных из широкого спектра тканей.

Что такое Wnt-3a?

Wnt-3a принадлежит к семейству Wnt, группе секретируемых белков, включающей 19 человеческих вариантов, включая Wnt1, Wnt2, Wnt2b (Wnt13), Wnt3, Wnt3a, Wnt4, Wnt5a, Wnt5b, Wnt6, Wnt7a, Wnt7b, Wnt8a, Wnt8b, Wnt9a (также известный как Wnt14), Wnt9b (Wnt14b), Wnt10a, Wnt10b, Wnt11 и Wnt16. Это семейство характеризуется консервативным и богатым цистеином составом. Белки Wnt облегчают сигнальный путь Wnt, связываясь с рецепторами клеточной мембраны или соседними рецепторами клеточной мембраны. Этот путь можно разделить на канонический путь, опосредованный β-катенином, который включает Wnt1, Wnt2, Wnt2b, Wnt3, Wnt3a, Wnt7a, Wnt8, Wnt8b и Wnt10a, и неканонический путь, независимый от β-катенина, который охватывает Wnt4, Wnt5a, Wnt6 и Wnt11. Wnt3a, как квинтэссенция семейства Wnt, распространен повсеместно и играет ключевую роль в управлении различными клеточными функциями, такими как самообновление, пролиферация, дифференцировка и подвижность.

Механизм передачи сигнала Wnt-3a

Сигнальный путь Wnt представляет собой многогранную сеть белковых взаимодействий, в первую очередь связанных с эмбриональным развитием и раком. Однако он также играет роль в нормальных физиологических процессах во взрослых организмах. Wnt3a связывается со своим рецептором, белком Frizzled (Fz), вместе с корецепторным белком, связанным с рецептором липопротеина (LRP5/6), впоследствии активируя белок каркаса Disheveled (Dvl). Эта активация приводит к разборке «комплекса разрушения», который состоит из казеинкиназы 1 (CK1), гликогенсинтазы киназы-3β (GSK-3β) и белков каркаса аденоматозного полипоза кишечной палочки (APC), Axin1 и Axin2. Растворение этого комплекса стабилизирует свободный белок β-катенин в цитоплазме. Накопленный в цитоплазме β-катенин затем транслоцируется в ядро, где он связывается с факторами транскрипции семейства TCF/LEF, в конечном итоге активируя нижестоящие целевые гены, такие как c-myc и Cyclin D1. Этот каскад вызывает последующие клеточные ответы. Подводя итог, сигнальный путь Wnt можно упростить следующим образом: Wnt3a→FZD→DVL→растворение комплекса→β-катенин попадает в ядро→TCF/LEF→транскрипция нижестоящего гена. Без Wnt3a β-катенин обычно разрушается в цитоплазме «комплексом разрушения», который нацеливает его на убиквитинирование и последующую деградацию в протеасоме. В результате он не может проникнуть в ядро, чтобы инициировать транскрипцию нижестоящих генов. Сигнальный путь Wnt/β-катенин в высокой степени консервативен на протяжении всей эволюции и играет фундаментальную роль в эмбриональном развитии, росте клеток, дифференцировке, формировании полярности, развитии нервной системы и канцерогенезе.

Wnt3a и органоиды

Wnt3a занимает центральное положение как один из наиболее часто используемых факторов культивирования для генерации органоидов. Его высокая активность, постоянство между партиями, отсутствие загрязнения и бессывороточная подготовка являются ключевыми факторами, способствующими успеху экспериментов с органоидами.Wnt3a нашел широкое применение в органоидных культурах различных тканей, включая кишечник, желудок, поджелудочную железу, печень, щитовидную железу, пищевод и нервную систему. В целях оказания помощи научным исследователям и фармацевтическим компаниям в их исследованиях клинического применения Wnt3a в формировании органоидов и исследовании опухолей YEASEN представила высокоактивный белковый продукт Wnt3a (каталог: 92276ES), предназначенный для облегчения органоидной культуры.

Рисунок 3. Измеряется по его способности индуцировать активность репортера Topflash в эмбриональных клетках почек человека HEK293T. ED50 для этого эффекта составляет 25 нг/мл.

Валидация органоидной культуры

Йесен Цитокины были проверены на органоидах опухолей человека, таких как рак легких, рак шейки матки, рак яичников, рак поджелудочной железы и рак кишечника, а также на нормальных органоидах, таких как органоиды тонкого кишечника человека и мыши.

Связанные цитокины информация