Yeasen Аффинный гель против DYKDDDDK (Flag): точная очистка малораспространенных мембранных белков

В области биомедицинских исследований очистка белков является ключевой технологией для изучения тайн жизни. Однако традиционные методы очистки борются с неэффективностью и высокой стоимостью, особенно для мембранных белков, которые находятся в центре внимания структурных биологических исследований. Эти белки имеют сложную структуру, имеют низкие уровни экспрессии в клеточных мембранах и чувствительны к условиям окружающей среды, что делает их очистку особенно сложной. Теперь, Yeasen Компания Biotech, обладающая выдающимися возможностями в области НИОКР, выпустила модернизированную версию Аффинный гель против DYKDDDDK(Flag) (Кат. № 20584ES), мощный инструмент для эффективной и удобной очистки белков, даже сложных мембранных белков.

Производительность продукта

1. Высокая специфичность и высокая связывающая способность: основные преимущества для захвата целевого белка

Yeasen Аффинный гель против DYKDDDDK(Flag) (Кат. № 20584ES) готовится путем ковалентного связывания высококачественных мышиных моноклональных антител IgG2b с 4% высокосшитым агарозным гелем. Этот уникальный производственный процесс наделяет продукт чрезвычайно высокой специфичностью, позволяя ему точно распознавать и связывать белки слияния с тегом Flag. Является ли это N-концевым белком слияния Flag, модифицированным Met (Мет-флаг-белок), белок слияния N-концевого флага (Флаг-Белок), или белок слияния C-концевого флага (Белок-Флаг), гель с легкостью с ними справится.

При очистке мембранных белков эта специфичность особенно важна, поскольку эти белки структурно сложны и склонны к неспецифическому связыванию с другими белками. Высокая специфичность геля Flag эффективно снижает помехи от неспецифических белков, обеспечивая высокую чистоту очищенных мембранных белков. Кроме того, гель обладает высокой связывающей способностью для белков слияния, помеченных Flag (по крайней мере 1,1 мг белка/мл гель). Это означает, что даже если целевой белок экспрессируется на низком уровне, его все равно можно эффективно захватить и очистить с помощью геля Flag.

2. Высокая чистота и высокая производительность: возможность дальнейшего использования

Yeasen Аффинный гель против DYKDDDDK(Flag) (Кат. № 20584ES) имеет минимальное неспецифическое связывание примесей, что приводит к получению образцов белка высокой чистоты после очистки. Это имеет решающее значение для последующих приложений, таких как анализы биоактивности и структурный анализ. Образцы белка высокой чистоты предоставляют более точные экспериментальные данные, закладывая прочную основу для исследований исследователей.

3. Оптимизированный экспериментальный рабочий процесс: упрощение задач очистки белков

Очистку белков необходимо проводить в щадящих условиях, чтобы избежать структурных повреждений белков, особенно сложных мембранных белков. Yeasen Аффинный гель против DYKDDDDK(Flag) (Кат. № 20584ES) разработан с учетом этого. Его буфер хранения TBS, содержащий 50% глицерина при рН 7.4, который не только сохраняет активность геля, но и обеспечивает щадящую среду для очистки белка.

Процесс очистки с помощью геля Flag прост и эффективен. Для облегчения использования элюирования пептида 1×Flag в комплект продукта входит дополнительный пептид 1×Flag (Cat#20572ES). Это делает процесс элюирования мягким (практически без повреждения белков) и очень удобным (еще больше облегчая экспериментирование).

4. Различные размеры и гибкие варианты доставки: удовлетворение разнообразных экспериментальных потребностей

Учитывая различные масштабы и потребности различных лабораторий, Yeasen предлагает гель Flag в различных размерах, включая 1 мл, 5 мл, 25 мл и 100 мл. Будь то мелкомасштабная предварительная разведка или крупномасштабное производство белка, есть подходящий вариант. Для крупных ежегодных закупок клиенты могут выбрать получение поставок партиями, что позволяет им пользоваться ценовыми скидками, избегая при этом давления избыточных запасов.

Тестовые данные

М: Маркер белка 1: Неочищенный образец белка Flag-N/Flag-M/Flag-C до колонки 2: Постколоночный поток белка Flag-N/Flag-M/Flag-C 3: Элюирование (элюирование при pH 2,7) 4: Элюирование (элюирование при pH 12) 5: Элюирование (1×Элюирование пептида флага) 6: Очищенный гель (элюирование при pH 2,7) 7: Очищенный гель (элюирование при pH 12) 8: Очищенный гель (1×Элюирование пептида флага) а：Флаг-N   б：Флаг-М   с：Флаг-С

Рисунок 1.   Yeasen Аффинный гель против DYKDDDDK(Flag) Результаты очистки для белков с низкой экспрессией (Flag-N (a), Flag-M (b), Flag-C (c)), показанные в SDS-PAGE.

М: Маркер белка 1: Неочищенный образец белка Flag-C до колонки 2: Постколоночный поток белка Flag-C 3: Элюирование (элюирование при pH 2,7) 4: Элюирование (элюирование при pH 12) 5: Элюирование (1×Элюирование пептида флага) 6: Очищенный гель (pH 2.7 элюирование) 7: Очищенный гель (элюирование при pH 12) 8: Очищенный гель (1×Элюирование пептида флага) а：Yeasen б：Марка S*   с：Марка G*

Фигура 2. Сравнение Yeasen (а) сБранд S* (б) и Бrand G* (c) Гели Anti-Flag в очистке низкоэкспрессирующихся белков (например, мембранных белков), показанные в SDS-PAGE.

Выводы:

1. Yeasen Аффинный гель против DYKDDDDK(Flag) (Кат. № 20584ES) обладает высокой специфичностью и может связываться с тегами Flag в различных положениях (белки слияния N-конца Flag, белки слияния N-конца Flag, модифицированные Met, белки слияния C-конца Flag).

2. В условиях крайне низкой экспрессии целевого белка (например, мембранных белков), Yeasen Аффинный гель против DYKDDDDK(Flag) (Cat#20584ES) обеспечивает значительно более высокие выходы и чистоту по сравнению с конкурентами. Использование Yeasen Дополнительный пептид 1×Flag (Cat#20572ES) для элюирования обеспечивает еще лучшие результаты.

Комплексные решения для гибридных белков с метками-флагами:

Рекомбинантная энтерокиназа (Кат. № 20395ES): Специфическая протеаза, которая расщепляет карбоксильный конец лизина, которому предшествуют четыре аспарагиновых кислоты: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys. Эта последовательность является частью октапептидного тега Flag (DYKDDDDK). Рекомбинантная энтерокиназа (rEK) может легко удалить тег Flag из белков слияния, что делает ее идеальным инструментом для изучения структуры и функции нативных белков.

Анти-DYKDDDDK(Флаг) MagBeads (Кат. № 20565ES): Полимерные магнитные микросферы, полученные путем ковалентного связывания высококачественных мышиных моноклональных антител против DYKDDDDK (Flag) с магнитными шариками на основе кремния (диаметр из 200 нм). Эти шарики подходят для иммунопреципитации (ИП) или коиммунопреципитации (Ко-ИП) белков с меткой Flag.

Информация о продукте

Название продукта	Номер продукта	Спецификация
Аффинный гель против DYKDDDDK(Flag)	20584ЭС03/25.08	1 мл/5 мл/25 мл
Рекомбинантная бычья энтерокиназа, His, экспрессированная в дрожжах	20395ES60/76/90	100 У/500 U/5000 U
Анти-DYKDDDDK(Флаг) MagBeads	20565ES03/08	1 мл/5 мл