UCF.ME™ UltraNuclease, также известная как тотипотентная нуклеаза, нуклеаза широкого спектра действия и неограничивающая ингибиторная эндонуклеаза, произошла от Serratia Marcescen, но впоследствии была переработана и произведена командой Yeasen Research & Development, экспрессирована в E. coli. Она обладает молекулярной массой 26,5 кДа и изоэлектрической точкой 6,85. Примечательно, что она способна полностью расщеплять нуклеиновую кислоту на 5'-монофосфатные олигонуклеотиды длиной от 2 до 5 оснований. И UltraNuclease, и Salt Active UltraNuclease служат прекрасными альтернативами Benzonase.
1. Что такое тотипотентная нуклеаза?
2. Каковы сценарии использования тотипотентной нуклеазы?
3. Какими преимуществами должна обладать тотипотентная нуклеаза?
4. Часто задаваемые вопросы
5. Сопутствующие товары
1. Что такое тотипотентная нуклеаза?
Тотипотентные нуклеазы — это генетически модифицированные эндонуклеазы, способные расщеплять широкий спектр форм нуклеиновых кислот, включая одноцепочечные, двухцепочечные, линейные, нативные и денатурированные нуклеиновые кислоты. Они генерируют 5'-монофосфатные олигонуклеотиды длиной от 3 до 5 оснований и не обладают специфическим распознаванием оснований. Эти универсальные нуклеазы демонстрируют надежную стабильность и активность переваривания в различных условиях, что делает их высокоэффективными для устранения остатков нуклеиновых кислот в образцах или продуктах. Это повышает чистоту образца и биологическую эффективность продуктов, делая тотипотентные нуклеазы предпочтительным ферментным препаратом для научных исследований, вакцин и таких отраслей, как производство белковых и полисахаридных фармацевтических препаратов.
Кроме того, тотипотентные нуклеазы играют решающую роль в удалении нуклеиновых кислот во время приготовления вакцин, антител, клеточной терапии и других биологических продуктов, обеспечивая соответствие правилам FDA, согласно которым остаточная нуклеиновая кислота в конечном продукте для терапевтического использования не должна превышать 10 пг/дозу. Разлагая нуклеиновые кислоты, тотипотентные нуклеазы снижают вязкость клеточных лизатов, облегчая процесс фильтрации раствора/ультрафильтрации во время очистки частиц, полученных из клеток, таких как вирусы, векторы AAV и тельца включения. Это упрощает обработку, улучшает центрифугирование, повышает эффективность разделения осадков и супернатанта и повышает эффективность хроматографической очистки, в конечном итоге увеличивая выход и чистоту продукта.
2. Каковы сценарии использования тотипотентной нуклеазы?
UltraNuclease имеет широкий спектр применения, и вот конкретные сценарии использования.
2.1 Очистка вирусов (лентивирус, AAV, рекомбинантная аденовирусная вакцина, инактивированный вирус, онколитический вирус и т. д.)
Использование вирусов в биомедицинском секторе значительно расширяется, охватывая такие области применения, как вакцины, клеточная терапия, генная терапия и различные другие области. Клетки-хозяева, ответственные за производство вирусов, в основном являются клетками непрерывного пассажа (CCL). CCL демонстрируют генетическую предрасположенность к нерегулируемому росту, что дает им возможность размножаться неограниченно. Однако наличие остаточной ДНК из CCL может представлять потенциальные риски, такие как неконтролируемая пролиферация человеческих клеток, приводящая к образованию опухолей. Кроме того, эти остаточные фрагменты ДНК могут содержать инфекционные вирусные геномы, что вызывает опасения по поводу риска инфицирования наряду с опухолеобразованием. Следовательно, строгие меры контроля являются обязательными для управления остаточной ДНК в биологических продуктах, обеспечивая их безопасность. В этой связи наш UCF.ME™ UltraNuclease предлагает безопасное решение для очистки вирусов.
Соль играет ключевую роль в смягчении агрегации белков или вирусов, облегчая отделение ДНК и РНК от белков и других клеточных компонентов. Активная соль ультрануклеазы, являясь неспецифической эндонуклеазой, проявляет оптимальную активность при высоких концентрациях соли. В условиях высокой соли ферменты получают улучшенный доступ к высвобожденной ДНК и РНК, усиливая их деградацию. Нуклеазы с повышенной активностью в условиях высокой соли оказываются более эффективными в улучшении процессов очистки. Активная соль ультрануклеазы может использоваться для снижения вязкости в супернатантах и лизатах клеток, повышая эффективность очистки в условиях высокой соли. Этот фермент также снижает остатки нуклеиновых кислот хозяина до уровня пикограммов, тем самым повышая производительность и безопасность различных применений биологических продуктов, включая очистку вирусов, производство вакцин и производство фармацевтических препаратов на основе белков и полисахаридов.
2.2 Очистка рекомбинантного белка, экспрессированного в E. coli
Некоторые белки, экспрессируемые в E. coli, имеют тенденцию к агрегации в тельца включения, что усложняет процесс очистки, поскольку они часто переплетаются с ДНК хозяина. Полученные в результате разорванные бактериальные клетки могут обладать высокой вязкостью, что значительно снижает эффективность очистки белка. Однако, путем введения 10-50 ед./мл UCF.ME™UltraNuclease в бактериальный раствор во время ультразвукового разрушения и инкубации образца либо при 37°C в течение 30 минут, либо при 4°C в течение ночи после завершения разрушения, вязкость в бактериальном растворе может быть эффективно снижена. Это, в свою очередь, существенно повышает эффективность процесса очистки. Подводя итог, вы можете положиться на нашу UCF.ME™ UltraNuclease для облегчения эффективной очистки белка.
2.3 Предотвращение скопления клеток
В последние годы использование криоконсервированных мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) в иммуноанализах резко возросло. Самая большая характеристика клеток PBMC заключается в том, что они очень легко слипаются после реанимации, что может легко привести к низкому качеству клеток и ненадежным результатам тестов. Когда клетки реанимируются, в культуральную среду добавляется соответствующая концентрация (25-50 ед./мл) UCF.ME™UltraNuclease, и клетки совместно культивируются, что может эффективно предотвратить слипание клеток. Таким образом, вы можете максимально использовать нашу UCF.ME™ UltraNuclease, чтобы увеличить шансы на успешный результат.
3. Какими преимуществами должна обладать тотипотентная нуклеаза?
3.1 Широкий спектр применения
UCF.ME™ UltraNuclease может разрезать и разрушать различные формы ДНК и РНК в различных экспериментальных условиях и может применяться для удаления остаточной нуклеиновой кислоты в различных биологических продуктах.
3.2 Высокая чистота, высокая активность фермента
Для нашей UCF.ME™ UltraNuclease чистота фермента составляет более или равна 99% (ВЭЖХ), а активность фермента составляет более или равна 1,5*106 Е/мг (при использовании абсолютного количественного метода для общего субстрата).
3.3 Высокая адаптивность
UCF.ME™ UltraNuclease обладает высокой стабильностью при хранении и замораживании-оттаивании. Мы храним UCF.ME™ UltraNuclease при -20 °C, 4 °C и 37 °C для определения тенденции активности фермента. При хранении при 37 °C в течение 2 недель не наблюдалось существенных изменений активности фермента.Между тем, чтобы обеспечить стабильность фермента, мы используем комбинацию сухого льда + пакета со льдом, чтобы транспорт UCF.ME™ UltraNuclease к вам. Он также имеет сильную толерантность и может адаптироваться к различным условиям эксплуатации.
3.4 Соответствовать Фармакопее
UCF.ME™ UltraNuclease производится в UCF.ME (Ultra Clean Factory. Молекулярный фермент) - это разновидность ультрачистого фермента. Что такое ультрачистый фермент? Это молекулярный фермент, который соответствует стандартам качества no HCD、HCR、HCP, DNASE FREE、RNASE FREE, без остатков протеазы, без остатков микробов, без патогенов, животного происхождения, загрязнения антибиотиками, сверхнизкого содержания эндотоксинов, высокой активности фермента и высокой чистоты и т. д. Следовательно, вы можете доверять нашей продукции, безопасно и надежно.
3.5 Производство по стандартам GMP
Весь процесс производства UltraNuclease осуществляется в производственном цехе GMP, а план контроля качества строго соблюдается фармакопея метод, удовлетворяющий широкомасштабный спрос от исследований и разработок до производства.
UCF.ME™ Партнер UltraNuclease — набор UltraNuclease ELISA
На обычных этапах очистки UCF.ME™ Ультрануклеаза легко удаляется как примесь. Для обнаружения остатков UCF.ME™ Компания YEASEN разработала вспомогательный набор UltraNuclease ELISA, который позволяет точно обнаружить остатки UCF.ME™. UltraNuclease в образце. Набор имеет отличную линейность, повторяемость, скорость восстановления и специфичность.
Ультрануклеаза Набор для ИФА
Линейный диапазон составляет от 0,047 до 3 нг/мл, а R2 больше 0,99. с хорошей воспроизводимостью между партиями мы добавляем фиксированную концентрацию UltraNuclease в образец и используем 3 разные партии наборов ELISA для обнаружения. Коэффициент восстановления обнаружения составляет от 70% до 110%, когда концентрация нуклеазы составляет от 3 до 0,186 нг/мл, а CV составляет менее 10%. Более того, моделируемые коэффициенты восстановления образцов UltraNuclease с различными концентрациями составляют от 70% до 130% и лучше, чем у других марок. Он также имеет сильную специфичность, поскольку мы оценили неспецифическое связывание антитела UltraNuclease с 8 общими образцами. Результаты группы интерференции и контрольной группы перекрывались, и никаких интерференций не наблюдалось.
После подачи заявки на DMF компанией UltraNuclease компания YEASEN получила DMF солевая активная ультрануклеаза от FDA США.
Номер заявки:
| Число | Название продукта | Регистрационный номер |
| 1 | Ультрануклеаза | MF037298 |
| 2 | Соль Активная УльтраНуклеаза | MF037815 |
4. Часто задаваемые вопросы
В1: На каком этапе добавлять UltraNuclease?
A: Это зависит от образцов, с которыми вы имеете дело. При очистке вирусов его обычно добавляют после очистки вируса; при очистке белка E. coli его можно добавлять, когда клетки лизируются; при работе со слипанием клеток его можно добавлять непосредственно в среду для совместного культивирования с клетками.
В2: Если температура реакции не может достичь 37°C, как ее использовать?
А: Активность фермента UltraNuclease зависит от температуры, времени обработки и единиц активности фермента. Если температура не может достичь 37°C, можно добавить соответствующее количество фермента или увеличить время инкубации.
В3: Совместима ли UltraNuclease с ингибиторами протеазы?
А: Совместимо, но имейте в виду, что многие ингибиторы протеазы содержат ЭДТА. Когда ЭДТА начинает превышать 1 мМ, ЭДТА будет подавлять активность некоторых нуклеаз.
В4: Как удалить UltraNuclease?
А: Его можно удалить такими методами, как ТПФ, диализ и хроматографические колонки.
В5: Можно ли использовать набор UltraNuclease ELISA для обнаружения остатков тотипотентных нуклеаз других марок?
А: Мы не рекомендуем этого делать. Набор ELISA полностью разработан на основе UltraNuclease и может точно количественно определять UltraNuclease. Альтипотентные нуклеазы других марок могут отличаться от UltraNuclease с точки зрения последовательности и процесса производства, а результаты теста могут быть неточными.
5. Сопутствующие товары
Компания Yeasen предлагает следующую продукцию.
Таблица 1. Сопутствующие товары
| Название продукта | Артикул | Технические характеристики |
| 20157ES25/60/80/90 | 25КУ/100КУ/1МЕ/5МЕ | |
| 20159ES25/60/80/90 | 25КУ/100КУ/1МЕ/5МЕ | |
| 36701ES59 | 96Т | |
| Соль активная Набор для ИФА UltraNuclease | 36703ES96 | 96Т |