1 Verkningsmekanismen för Blasticidin S

Blasticidin S är ett nukleosidantibiotikum extraherat från Streptomyces griseochromogenes, som specifikt hämmar proteinsyntesen i prokaryota och eukaryota celler genom att störa bildningen av peptidbindningar i ribosomen. Dess verkningsmekanism inkluderar blockering av hydrolysen av peptidyl-tRNA inducerad av frisättningsfaktorer och förstärkning av bindningen av tRNA till den stora ribosomala subenheten, och därigenom hämmar bildandet av peptidbindningar i viss utsträckning.

Blasticidin S har ett snabbt och potent verkningssätt och mycket låga antibiotikakoncentrationer kan leda till snabb celldöd. Det har inte bara en signifikant hämning av proteinsyntesen i bakterier och eukaryoter, utan också aktivitet mot svampar, nematoder och tumörceller. Pltocidin S används ofta för att screena transfekterade celler som bär bsr- eller BSD-gener.

2 Applicering av Blasticidin S

2.1 Cellkultur och screening

• Däggdjursceller: blast S används ofta för att screena transfekterade celler som bär bsr- eller BSD-gener. Dessa resistensgener, från B. cereus respektive Aspergillus, kunde omvandla murancidin till avirulenta derivat, vilket möjliggör selektiv dödande av celler utan att bära resistensgener, med arbetskoncentrationer av Blasticidin S i däggdjursceller från 1 till 50 μg/ml.

Caln	Genus	Organisering	Codlingsmedium	Blasticidin S-koncentrationen (μg/ml)
HeLa	Mänsklig	Livmoder	DMEM	3-10
HEK293	Mänsklig	Njure	DMEM	3-10
B16	Mus	Melanom	RPMI	3-10
PC1.0	Hamster	Adenocarcinom	RPMI	10-30
CHO	Hamster	Äggstock	DMEM	5-15

• Bakterieselektion: I bakteriekultur kan den rekommenderade koncentrationen på 25-100 µg/mL snabbt orsaka cellers död utan resistensgener.

E.coli är något mindre känslig för Blasticidin S, men transformanter är toleranta mot Blasticidin S och kan screenas med lågsalt LB-medium (pH 8) i ett koncentrationsområde på 50-100 μg/mL Blasticidin S, och högt pH förbättrar Blasticidin S-aktiviteten.

• Växtceller: även tillämpligt på genöverföringsexperiment i växtceller, bsr och BSD används ofta som screeningsmarkörer.

2.2 Forskning om proteinsyntes

• Blasticidin Swas används för att studera proteinsyntesprocessen på nivån av peptidbindningsbildning, speciellt i HEK293-T-celler och HEK-D5-celler av TLR-2-konstruktioner.

2.3 Antifungala egenskaper

• Den har också en viss svampdödande aktivitet, som kan användas för att förebygga och behandla rissprängningar. Dess bakteriedödande effekt är främst att påverka proteinsyntesen och kan hämma sporgroning, hyfutveckling och sporbildning.

2.4 Andra applikationer

• Blasticidin Shas har också använts för att studera den hämmande effekten av tumörceller.
• Det fungerar också som ett selektionsmedel för transformerade celler som innehåller resistensgenen bls, bsr eller BSD.

3 Experimentella procedurer relaterade till Blasticidin S (screening av stabila däggdjurstransfektanter)

1) Blasticidin S används vanligtvis i en koncentration av 10 μg/ml. Celler transfekteras med plasmider som bär bsr- eller BSD-genen och inkuberas i normalt tillväxtmedium innehållande Blasticidin S för att selektera för stabila transfektanter.

2) Vid 48 timmar efter transfektion, passage cellerna i färskt medium innehållande en lämplig koncentration av Blasticidin S (Obs: Antibiotika fungerar bäst när celler är i en aktiv delningsfas. Effektiviteten av antibiotika minskar om celltätheten är för hög. Vid splittring av celler bör sammanflödet inte överstiga 25%).

3) Var 3-4 dag, ta bort det använda mediet och tillsätt färskt medium som innehåller antibiotikan.

4) Efter 7 dagar, kontrollera för bildandet av cellkolonier. Beroende på värdcellstyp och transfektion/selektionseffektivitet kan kolonibildning kräva ytterligare en vecka eller längre.

5) Överför 5-10 resistenta kloner till 35 mm cellodlingsskålar och håll i selektivt medium i 7 dagar. Utför sedan cytotoxicitetsanalyser för testning.

4 Produktrekommendation

Yeasen Biotech's Blasticidin S (60218ES) finns i två former: pulver (1 g) och lösning (10 mg/ml).

Produktnamn	Katt#	Specifikation	Utseende
Blasticidin S CAS：3513-03-9	60218ES10	10 mg	Lösning (10 mg/ml) i HEPES Buffert，pH 7,5）
	60218ES50	5×10 mg
	60218ES60	10×10 mg
	60218ES80	1 g	Pulver（Förbered en stamlösning på 5-10 mg/ml med sterilt vatten eller buffert när du använder）

5 Publicerade artiklar med våra reagenser

[1] Mo J, Tan K, Dong Y, Lu W, Liu F, Mei Y, Huang H, Zhao K, Lv Z, Ye Y, Tang Y. Terapeutisk inriktning på den onkogena drivkraften EWSR1::FLI1 i Ewing-sarkom genom hämning av FACT-komplexet. Onkogen. 2023 Jan;42(1):11-25. doi: 10.1038/s41388-022-02533-1. Epub 2022 10 november. PMID: 36357572. (OM:8,0)

[2] Tan K, Mo J, Li M, Dong Y, Han Y, Sun X, Ma Y, Zhu K, Wu W, Lu L, Liu J, Zhao K, Zhang L, Tang Y, Lv Z. SMAD9-MYCN positiv återkopplingsslinga representerar ett unikt beroende för MYCN-förstärkt neuroblastom. J Exp Clin Cancer Res. 2022 Dec 20;41(1):352. doi: 10.1186/s13046-022-02563-3. PMID: 36539767; PMCID: PMC9764568.(OM:11.3)

6 Relaterade produkter

Produktnamn	Katt#	Specifikation
Ciprofloxacinhydroklorid	60201ES05/25/60	5/25/100g
Ampicillin, natriumsalt	60203ES10/60	10/100g
Doxycyklinhyklat	60204ES03/08/25	1/5/25 g
Kloramfenikol, USP-klass	60205ES08/25/60	5/25/100g
Kanamycinsulfat	60206ES10/60	10/100g
Tetracyklin HCl Tetracyklinhydroklorid (USP)	60212ES25/60	25/100g
Vankomycinhydroklorid	60213ES60/80/90	100mg/1g/5g
Gentamycinsulfatsalt	60214ES03/08/25	1/5/25 g
Spectinomycinhydroklorid	60215ES08	5g
Fleomycin (20 mg/ml i lösning)	60217ES20/60	20/5×20mg
Blasticidin S (Blasticidin)	60218ES10/60	10/10×10mg
Nystatin	60219ES08	5g
G418 Sulfate (geneticin)	60220ES03/08	1/5 g
Puromycin (lösning 10 mg/ml)	60209ES10/50/60/76	1 x 1 / 5 x 1 / 1 0 x 1 / 50 x 1 ml
Puromycin dihydroklorid	60210ES25/60/72/76/80	25/100/250/500 mg / 1 g
Hygromycin B (50 mg/ml)	60224ES03	1 g (20 mL)/10 × 1 g (20 mL)
Hygromycin B	60225ES03/10	1/10 g
Erytromycin	60228ES08/25	5/25 g
Timentin	60230ES07/32	3,2/10×3.2g
Aureobasidin A (AbA)	60231ES03/08/10	1/5×1/10×1 mg
Polymyxin B-sulfat	60242ES03/10	1/10MU