Översikt
Coelenterazine är ett naturligt fluorescein som är rikligt i naturen och är ljusenergilagringsmolekylen för de flesta marina självlysande organismer (mer än 75%). Coelenterazin kan användas som substrat för många luciferasenzymer, såsom luciferas från havets njure (Rluc), Gaussia-utsöndrat luciferas (Gluc) och fotoproteiner inklusive aequorin och Obelia. Till skillnad från eldflugans luciferin/luciferas-systemet kräver inte Coelenterazine/luciferassystemet adenosintrifosfat (ATP), vilket gör det lättare att studera biofluorescens in vivo. Därför används Coelenterazine vanligtvis som ett luminiscerande substrat för fluorescensanalyser baserade reportergenanalyser och analyser av levande djur.
Det huvudsakliga kommersiella Coelenterazine som för närvarande används är Coelenterazine naturligt. Det finns också många coelenterazinderivat såsom Coelenterazin h, Coelenterazine 400a, Coelenterazin cp, Coelenterazin f, Coelenterazin hcp, Coelenterazine n likadana syntetiseras. Teoretiskt kan dessa coelenteriner användas i samma experiment, men på grund av deras skillnader i ljusvåglängd, cellmembranpermeabilitet och ljuskvanteffektivitet visar de olika experimentella effekter i samma applikation.
Arter av Coelenterazin
Även känd som Coelenterazine fri syra. Det är substratet för många luciferasenzymer som Renilla luciferas (Rluc) och Gaussia luciferas (Gluc), och är också kofaktorn för självlysande manetprotein.
Applikationsscenarier: Detektion av kalciumjonkoncentration i levande celler, genrapportanalys, BRET (Bioluminescent resonance Energy transfer) studie, ELISA, HTS och kemiluminescensdetektering av ROS-nivåer i vävnader eller celler, etc.
Det är substratet för många luciferasenzymer som Renilla luciferas (Rluc) och Gaussia luciferas (Gluc), och är också kofaktorn för självlysande manetprotein.
Applikationsscenario: Ljusstyrkan är mer än 10 gånger högre än Coelenterazine Native, som är lämplig för reportergenanalys och detektering av kalciumjonkoncentration i levande celler.
Coelenterazine hcp
Det är ett av derivaten av Coelenterazine Native. Fluorescensintensiteten för Coelenterazine hcp-Aequorin-komplex är 190 gånger högre än den för Coelenterazine Native-komplex, med högt kvantutbyte och snabb Ca.2+ reaktionshastighet, som är mycket lämplig för detektering av kalciumjonnivåer.
Applikationsscenario: Lämplig för detektering av kalciumjonnivåer.
Även känd som DeepBlue CTM, är det ett av derivaten av Coelenterazine Native. Det är ett bra substrat för Renilla luciferas (Rluc), och dess emissionsvåglängd är cirka 400 nm, vilket har liten störning med signalen från GFP-receptorprotein och inte kan oxideras av Gaussia-utsöndrat luciferas (Gluc).
Applikationsscenario: Det är det föredragna Coelenterazine-substratet för BRET-forskning (Bioluminescent resonance Energy Transfer).
Det är det föredragna substratet för aequorin, och den enda strukturella skillnaden från Coelenterazine Native är att hydroxylgruppen på dess R-1-fenolgrupp ersätts med fluor (F).Jämfört med det totala antalet fotoner som produceras av Coelenterazine Native-Apoaequorin-komplexet, producerar detta komplex endast 80% av fotonenergin. Fördelen är att det tar mycket kort tid att generera aequorinkomplexet. När den kommer i kontakt med Ca2+, avger den ljus snabbt och med högt utbyte, med en produktionsintensitet som är 20 gånger högre än Coelenterazine Native. Dessutom har den god cellpermeabilitet.
Applikationsscenario: När extremt hög Ca2+ detektionskänslighet krävs för att studera manetproteinregenereringsexperiment, rekommenderas användning av substrat.
Coelenterazin cp
Det är ett derivat av Coelenterazine Native. Fotoproteinkomplexet som bildas med Apoaequorin-protein är 15 gånger mer lysande än Coelenterazine Native och har en snabbare Ca2+ reaktionshastighet.
Applikationsscenario: Den kan användas för screening av G-proteinkopplade receptorer (GPCR) med hög genomströmning.
Coelenterazine n
Dess fluorescensintensitet är svagare i alla Coelenterazin-derivat, och reaktionshastigheten till Ca.2+ är betydligt lägre än den för Coelenterazine Native.
Coelenterazin e
Ett derivat av Coelenterazine Native som strukturellt är en etylgrupp mer än Coelenterazine Native. Som ett substrat för Renilla luciferas är dess fluorescensintensitet 137 % av Coelenterazine Native. Coelenterazine e har en hög in vitro-reaktivitet av självlysande manetprotein och dubbla emissionstoppar (405 & 465), vilket möjliggör bestämning av Ca2+ koncentrationen i pCa5-7-området genom förhållandet mellan dubbla våglängder. Denna metod är oberoende av Coelenterazinkoncentrationen, vilket förbättrar detektionsnoggrannheten. Eftersom cellpermeabiliteten för detta derivat är dålig har det inte denna fördel för intracellulära relaterade experiment.
Applikationsscenario: Mycket användbart substrat för Ca2+ detektering av låg känslighet.
Coelenterazin 2-metyl
Det är en kraftfull cellulär antioxidant. Det kan effektivt verka på intracellulära reaktiva syrearter, såsom singletsyre och superoxidanjoner, och oxidativ stress är en mellanled i processen för apoptos. Dessutom har föreningen egenskaperna icke-toxicitet och membranpermeabilitet, så den kan användas för att studera apoptos.
Produktapplikation:
1) Som ett viktigt verktyg för att studera apoptos;
2) Den kan också användas för kemiluminescens för att detektera nivåer av superoxidanjoner och peroxinitritanjoner.
| Produktnamn | Molekylvikt | Molekylformel | Em (nm) | RLC* | Relativ intensitet | Halvstigningstid (ms)** |
| 423.46 |
| 466 | 1.00 | 1 | 6-30 | |
| 407,48 |
| 466 | 0,75 | 16 | 6-30 | |
| Coelenterazin hcp | 399,48 |
| 445 | 0,65 | 500 | 2-5 |
| Coelenterazin cp | 415,48 |
| 442 | 0,63 | 28 | 2-5 |
| 425,46 |
| 472 | 0,80 | 20 | 6-30 | |
| Coelenterazine n | 457,52 |
| 468 | 0,25 | 0,15 | 6-30 |
| Coelenterazin e | 449,5 |
| 405 och 465 | 0,5 | 4 | 0,15-0.3 |
| 2-metyl Coelenterazin | 331,37 |
| / | / | / | / |
| 391,48 |
| 400 | / | / | / |
Produktinformation
| Produktnamn | Katalognummer | Specifikationer |
| 40901ES01/02/03/08 | 100mg/500mg/1g/5g | |
| 40902ES01/02/03/09 | 100mg/500mg/1g/5g | |
| 40903ES01/02/03 | 100mg/500mg/1g | |
| 40904ES02/03/08 | 1×500 μg/2×500 μg/5mg | |
| 40905ES02/03 | 1×500 μg/2×500 μg | |
| 40906ES02/03/08 | 1×500 μg/2×500 μg/5mg | |
| 40908ES02/03 | 1×500 μg/2×500 μg |
Publicerad litteratur från användare (ofullständig statistik)
- Xie J, Zheng H, Chen S, Shi X, Mao W, Wang F. Rationell design av en aktiverbar reporter för kvantitativ avbildning av RNA-avvikande splitsning in vivo. Mol Ther Methods Clin Dev. 2020;17:904-911. Publicerad 2020 18 april.
- Lin GY, Lin L, Cai XQ, et al. High-throughput screeningkampanj identifierar en liten molekylagonist av relaxinfamiljens peptidreceptor 4 [publicerad online före tryckning, 31 mars 2020]. Acta Pharmacol Sin. 2020;10.1038/s41401-020-0390-x.
- Shao L, Chen Y, Zhang S, Zhang Z, Cao Y, Yang D, Wang MW. Modulerande effekter av RAMPs på signaleringsprofiler för glukagonreceptorfamiljen, Acta Pharmaceutica Sinica B.
- Haifeng Zheng, Si Chen, Xinan Wang, Jinrong Xie, Jie Tian och Fu Wang. Intron Retained Bioluminescence Reporter för realtidsavbildning av pre-mRNA-skarvning i levande subjekt.Canal. Chem. 2019, 91, 12392−12398
- Peiyu Xu, Sijie Huang, Chunyou Mao, ..., Xi Cheng, Yan Zhang, H. Eric Xu. Strukturer av de humana dopamin D3-receptor-Gi-komplexen.2021, Molecular Cell 81, 1147–1159
- Moxuan Ji, Xinan Wang, Haifeng Zheng, Wenjie Mao, Xiaorui Shi, Si Chen, Chu Tang och Fu Wang Ci. En utsöndrad reporter för blodövervakning av pyroptotisk celldöd. Anal. Chem.
- F Hu, Y Zhang, Q Liu, Z Wang. PurA underlättar Edwardsiella piscicida att undkomma NF-KB-signalaktivering.Fish & Shellfish Immunology, 2022 - Elsevier
- Haifeng Zheng, Xinan Wang, Si Chen, Xiaorui Shi, Jinrong Xie, Wenjie Mao, Jie Tian och Fu Wang. Funktionell bioavbildning i realtid av neuronspecifik mikroRNA-dynamik under neuronal differentiering med hjälp av en dubbel luciferasreporter. ACS Chem. Neurosci.DOI: 10.1021/acschemneuro.8b00614