--Yeasen TUNEL analyssats visar vackrare fluorescens
Bindningen av Fluorescein-dUTP till hackad DNA av TdT-transferas är en av de vanligaste metoderna för att detektera apoptos, t.ex. är In Situ Cell Death Kit från Roche baserad på denna princip. TdT-transferasaktiviteten i produkten påverkar direkt märkningseffektiviteten. Yeasen Biologicals, baserat på enzymproduktion, strävar efter att utveckla högkvalitativa produkter baserade på enzymer och har lanserat tre fluorescein (Alexa Fluor 640, Alexa Fluor 488 och FITC)-märkta Tunel-analyser för att möta de höga kvalitetskraven från våra kunder.
För närvarande använder mer än 120 forskargrupper denna produkt och har publicerat många engelska artiklar i auktoritativa tidskrifter, såsom Theranostics och EMBO Molecular Medicine.
Detektionsmekanism
I det sena stadiet av apoptos producerar kromosomala DNA-dubbelsträngsbrott eller enkelsträngsbrott ett stort antal klibbiga 3-OH-ändar, och under inverkan av deoxiribonukleotidterminalöverföring (TdT) binds fluorescein/enzymmärkt dUTP till den 3-terminala änden av DNA:t, så att detektion av DNA-detektion kan ske genom detektion av DNA. fluorescens, som hänvisas till som den deoxiribonukleotidterminala transferasmedierade nick-end-märkningen Denna metod kallas Terminal-Deoxynucleotidyl Transferase Mediated Nick End-märkning (TUNEL), och principen visas i figur 1.

Figur 1: Schematiskt diagram av terminal-deoxinukleotidyltransferasmedierad Nick End-märkning (TUNEL)
Produktegenskaper
- Brett användningsområde
Kan användas för paraffininbäddade vävnadssnitt, frysta vävnadssnitt, odlade celler och celler isolerade från vävnader.
- Hög detektionskänslighet
Mycket liten mängd apoptotiska celler kan detekteras.
- Låg bakgrundsstörning
Högt signal-brusförhållande.
- Observationsmångsidighet
Fluorescensmikroskopi observation, genomflödesdetektion.
Datapresentation
1、Mus preadipocyt (3T3-L) Tunel-analys
Figur 2: Preadipocyt 3T3-L apoptosdetektion från mus. Den första raden representerar negativ kontroll och den andra raden representerar positiv kontroll. Detektionsreagens: Kat. nr. 40306 TUNEL Apoptos Detection Kit (FITC)
2、Tunneltektion av paraffinsektionsprover
Figur 3: LY3009120 ensamt eller i kombination med Vemurafenib och Obatoclax fördröjde effektivt sköldkörtelcancer i en subkutan grafttumörmodell. OM=8,8. Provtyp: paraffininbäddad tumörvävnad (tagen från nakna möss). Detektionsreagens: Kat. nr. 40307 TUNEL Apoptosdetektionskit (Alexa Fluor 488).
3、Tunneldetektering av cellgenomsökningar
Figur 4: Effekt av zinksulfat på apoptos av endotelceller i olika undergrupper. Provtyp: HUVEC (humana navelvenendotelceller). Detektionsreagens: Kat. nr. 40308 TUNEL Apoptos Detection Kit (Alexa Fluor 640)
4、Flödescytometri för att upptäcka apoptos
Figur 5: PA-behandling kan effektivt minska förekomsten av apoptos under omprogrammering. OM=3,7. Provtyp: iPS-celler. Detektionsreagens: Kat. nr. 40307 TUNEL Apoptosdetektionskit (Alexa Fluor 488).
Litteraturcitat
[1] Li C, Wang Q, Gu X, et al. Porös Se@ SiO2 nanokomposit främjar migration och osteogen differentiering av mesenkymala stamceller i benmärg från råtta för att påskynda benfrakturläkning i en råttmodell[J].International Journal of Nanomedicine, 2019, 14: 3845. (OM 4,76)
[2] Miao T, Qian L, Yu F, et al. Skyddseffekter av hydroxisafflor gult och på högoxiderat lipoprotein med låg densitet inducerade mänskliga endotelceller i kransartären [J]. Utveckling, 2019, 22: 581-589.(IF 6,208 )
[3] Wen Y, Liu G, Zhang Y, et al. MicroRNA-205 är associerat med diabetes mellitus-inducerad erektil dysfunktion via nedreglering av androgenreceptorn [J]. Journal of cellular and molecular medicine, 2019, 23(5): 3257-3270.(OM 4,41)
[4] Xu T, Ding W, Ao X, et al. ARC reglerar programmerad nekros och myokardischemi/reperfusionsskada genom hämning av mPTP-öppning[J]. Redox Biology, 2019, 20: 414-426.(OM 8,37)
[5] Li P, Hao L, Guo YY, et al. Klorokin hämmar autofagi och försämrar mitokondriell dysfunktion och apoptos i hypoxiska råttneuroner [J]. Life Sciences, 2018, 202: 70-77.(OM 3,40)
[6] Chen H, Guan B, Chen X, et al. Baicalin dämpar störningar av blod-hjärnbarriären och hemorragisk transformation och förbättrar det neurologiska resultatet hos ischemiska strokeråttor med fördröjd t-PA-behandling: involvering av ONOO--MMP-9-vägen [J]. Translational Stroke Research, 2018, 9(5): 515-529.(OM 4,87)
[7] Liu Q, Qian Y, Li P, et al. De kombinerade terapeutiska effekterna av 131jod-märkta multifunktionella kopparsulfid-laddade mikrosfärer vid behandling av bröstcancer[J]. Acta Pharmaceutica Sinica B, 2018, 8(3): 371-380.(OM 6,88)
[8] Han YQ, Ming SL, Wu HT, et al. Myostatin knockout inducerar apoptos i humana livmoderhalscancerceller via förhöjd generering av reaktiva syrearter[J]. Redox Biology, 2018, 19: 412-428.(OM 8,37)
[9] Wang S, Xu Y, Weng Y, et al. Astilbin förbättrar cisplatin-inducerad nefrotoxicitet genom att minska oxidativ stress och inflammation[J]. Food and Chemical Toxicology, 2018, 114: 227-236.(OM 3,78)
[10] Liu L, Pang XL, Shang WJ, et al. Överuttryckt microRNA-181a minskar glomerulär skleros och njurtubulär epitelskada hos råttor med kronisk njursjukdom via nedreglering av TLR/NF-KB-vägen genom att binda till CRY1[J]. Molecular Medicine, 2018, 24(1): 49.(OM 3,46)
[11] Li G, Yin Q, Ji H, et al. En studie om screening och antitumöreffekt av CD55-specifik ligandpeptid i livmoderhalscancerceller [J]. Drug Design, Development and Therapy, 2018, 12: 3899.(OM 3,27)
[12] Qian Y, Wang Y, Jia F, et al. Tumör-mikromiljökontrollerade nanomiceller med AIE-egenskap för att öka cancerterapi och apoptosövervakning[J]. Biomaterial, 2019, 188: 96-106.(OM 9,85)
[13] Li Z, Li D, Li Q, et al. In situ lågimmunogena albuminkonjugerande-corona-vägledande nanopartiklar för tumörinriktad kemoterapi[J]. Biomaterials Science, 2018, 6(10): 2681-2693.(OM 5,31)
[14] Liu Y, Zhi X, Hou W, et al. Gd3+-joninducerade kolprickar självmonterande aggregat laddade med en fotosensibilisator för förbättrad fluorescens/MRI dubbel avbildning och antitumörterapi[J]. Nanoskala, 2018, 10(40): 19052-19063.(OM 7,17)
[15] Liu Q, Qian Y, Li P, et al. 131 I-märkta kopparsulfid-laddade mikrosfärer för att behandla levertumörer via hepatisk artärembolisering[J]. Theranostics, 2018, 8(3): 785.(OM 8.12)
Vanliga frågor
F: Utseende av ospecifik fluorescerande märkning?
1) Vävnaden/cellerna i sig har höga nivåer av nukleas- eller polymerasaktivitet, vilket lätt kan leda till uppkomsten av icke-specifik fluorescerande märkning, såsom glatta muskelceller. Lösningen är att fixera cellerna eller vävnaderna omedelbart efter att de tagits och att fixera dem tillräckligt för att stoppa dessa enzymer från att orsaka falska positiva effekter.
2) Användning av olämpliga fixativ, såsom vissa sura fixativ, leder till falska positiva resultat. Nyberedd 4 % neutralt paraformaldehydfixativ rekommenderas.
3) Ospecifik fluorescens kan också inträffa när reaktionstiden för TUNEL-analysen är för lång och cell- eller vävnadsytan inte kan hållas våt. Var noga med att kontrollera reaktionstiden och se till att TUNEL analysreaktionslösningen täcker provbrunnen.
F: Är fluorescensbakgrunden mycket hög?
1) Celler som delar sig och prolifererar i hög hastighet, med höga nivåer av transkription, visar ibland också DNA-brott i kärnan.
2) Långvarig exponering för excitationsljus leder till falska positiva resultat.
F: Låg märkningseffektivitet?
1) Fixering med etanol eller metanol leder till låg märkningseffektivitet.
2) Fixeringstiden är för lång, vilket resulterar i för hög grad av tvärbindning. Det är lämpligt att minska fixeringstiden.
3) Vävnadssektionen är för tjock, vilket gör fixeringseffekten otillfredsställande, och det är bättre att kontrollera inom 10 μm.
(4) Fluorescenssläckning: Fluorescensen kommer att släckas kraftigt i 10 minuter med normalt ljus. Lösningen är att undvika lätt drift.
Produktdetaljer
Produktnamn | Art.nr. | Specifikation |
Annexin V-FITC/7-AAD Apoptos Detection Kit | 40311ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
40302ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
Annexin V-PE/7-AAD Apoptos Detection Kit | 40310ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
40303ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD Apoptos Detection Kit | 40313ES60 | 100T |
40305ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
40304ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD Apoptosdetektionskit | 40312ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
40306ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
40307ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
40308ES20/50/60 | 20T/50T/100T |