Mitokondrier
Mitokondrier är cellens energifabriker, huvudplatsen för intracellulär oxidativ fosforylering och syntes av adenosintrifosfat (ATP), som ger energi för cellulära aktiviteter. 95 % av energin som krävs för cellulära livsaktiviteter kommer från mitokondrier. Förutom att tillföra energi till celler är mitokondrier också involverade i processer som celldifferentiering, cellulär informationsöverföring och apoptos och har förmågan att reglera celltillväxt och cellcykel. Därför är analyser som mitokondrier och mitokondriella membran en viktig del av studien av celler.
Definition och betydelse av mitokondriell membranpotential
Mitokondriell membranpotential är resultatet av laddningsfördelning på båda sidor av det inre mitokondriella membranet och är en nyckelfaktor för att upprätthålla normal mitokondriell funktion. I mitokondrier genererar elektrontransportkedjan en protongradient genom redoxreaktioner som driver ATP-syntesen. Stabiliteten hos mitokondriernas membranpotential är direkt relaterad till cellens energitillförsel och dess överlevnadsstatus. Ett stort antal studier har visat att mitokondrier är nära besläktade med apoptos, där minskningen av mitokondriell transmembranpotential anses vara en av de tidigaste händelserna i den apoptotiska kaskadreaktionsprocessen. Det inträffar före uppkomsten av apoptotiska egenskaper (kromatinkondensering, DNA-brott) i kärnan, och när den mitokondriella transmembranpotentialen kollapsar är apoptos irreversibel. Således är minskningen av mitokondriell membranpotential en kännetecknande händelse i de tidiga stadierna av apoptos.
Arbetsprincip för JC-1-sond
JC-1 är ett katjoniskt lipidfluorescerande färgämne, som kan användas som en indikator på mitokondriell transmembranpotential. JC-1 finns i två tillstånd, monomer och multimer. Vid låg koncentration existerar den som en monomer och grön fluorescens kan detekteras, och när den detekteras med genomflödesanalys är den vanligtvis i FL-1-kanalen (samma kanal som FITC). Vid hög koncentration existerar den som en multimer och rött ljus kan detekteras, och när den detekteras med genomflödesanalys är den vanligtvis i FL-2-kanalen (samma kanal som PE). JC-1 kan också användas som ett katjoniskt lipidfluorescerande färgämne och kan användas som en mitokondriell transmembranpotentialindikator. och PE samma kanal). På grund av förändringen av JC-1-koncentrationen bildas en reversibel övergångsprocess mellan monomer och multimer.
I normala celler, när membranpotentialen är normal, går JC-1 in i mitokondrierna genom mitokondriernas membranpolaritet och bildar röda fluorescerande multimerer på grund av koncentrationsökningen, medan i apoptotiska celler depolariseras den mitokondriella transmembranpotentialen och JC-1 frisätts från mitokondrierna och återgår till den gröna monomerformen i en reducerad form. Därför kan förändringar i mitokondriell membranpotential detekteras genom att detektera grön och röd fluorescens.
Obs: Bilder citerade från internet
JC-10 sond
JC-10, ett derivat av JC-1, är en potentialberoende sond som används för att bestämma mitokondriell transmembranpotential genom flödescytometri, fluorescensmikroskopi och mikrotiterplattbaserade fluorescensanalyser. I friska celler ackumuleras JC-10 selektivt i mitokondrier och genererar röda aggregat som uppvisar ett brett excitationsspektrum och avger stora värden vid 590 nm.Men i apoptotiska och nekrotiska celler med låg mitokondriell transmembranpotential diffunderar JC-10 ut ur mitokondrierna och producerar JC-10-monomerer, vilket resulterar i en förskjutning mot grön emission (525 nm). Det har framgångsrikt använts som en indikator på mitokondriell transmembranpotential i en mängd olika provtyper inklusive myocyter, neuroner, intakta vävnader och isolerade mitokondrier.
JC-10--Ersättning för JC-1
- Stabilitet: JC-10 har mindre detektionsbias eftersom det har högre löslighet och högre känslighet i vattenhaltiga medier.
- Förbättrad signal: JC-10 har ett högre signal-till-bakgrundsförhållande än JC-1.
- Förbättrad känslighet: JC-10 kan detektera subtila förändringar i mitokondriell transmembranpotentialförlust bättre än JC-1 i alla testade cellinjer.
- Bred användning: JC-10 kan användas i primära råtthepatocyter.
- Bekvämt: JC-10 är kompatibel med fluorescerande enzymmarkörer, cellavbildare och flödescytometrar.
Anmärkningar:. Mitokondriella membranpotentialförändringar inducerade av komedoner mättes i Jurkat-celler med JC-10 och JC-1. Efter behandling av Jurkat-celler med kamptotecin (10 mM) under 4 timmar, tillsattes JC-1 och JC-10 färgupptagningslösningar till brunnarna och inkuberades i 30 minuter. Fluorescensintensiteten för de aggregerade och monomera formerna av JC-1 och JC-10 mättes vid Ex/Em = 490/525 nm och 490/590 nm med användning av en NOVOstar-enzymmärkning (BMG Labtech).
Analys av resultat
Vid detektering av JC-1-monomer kan excitationsljuset ställas in på 490 nm och emissionsljuset kan ställas in på 530 nm; vid detektering av JC-1-polymer kan excitationsljuset ställas in på 525 nm och emissionsljuset kan ställas in på 590 nm. Apoptos detekterades med flödescytometri, grön fluorescens detekterades genom FL-1-kanalen och röd fluorescens detekterades genom FL-2-kanalen. FL-1+, FL-2+ är normala celler och FL-1+, FL-2- är apoptotiska celler.
Obs: Bildkällan är China Streamline Associations webbplatsforum
Fungera utan tvekan
F: JC-1 Mitokondriell membranpotential fluorescerande sond, kan denna produkt användas för att färga vävnadssnitt?
S: Smält den levande vävnaden till individuella celler för att säkerställa cellernas aktivitet innan färgning.
F: Kan jag fixa cellerna innan färgning med JC-1?
S: Nej. JC-1-färgämne ackumuleras i mitokondrier på ett potentialberoende sätt och kan användas för att detektera celler, vävnader eller renade mitokondriella membranpotentialer. Immobilisering stör den elektriska potentialen, vilket resulterar i oförmåga hos sonden att ackumuleras på mitokondrierna och förlust av specificitet.
F: Det finns aggregerade partiklar i JC-1-arbetslösningen och jag planerar att ta bort dem genom centrifugering innan färgning, finns det några rekommenderade parametrar för centrifugering?
S: JC-1 Working Solution kan centrifugeras vid 13 000 g i cirka 1-2 minuter.
Beställningsinformation
| Produktnamn | Art.nr. | Specifikation |
| 40705ES03/08 | 1 mg/5 mg | |
| 40707ES03/08 | 1 mg/5 mg |