I processen med cellodling krävs ofta cellsmältning, så trypsinet som används för att smälta celler kommer att vara oumbärligt för cellodling, och det är också mycket viktigt, vilket kommer att påverka cellernas tillväxttillstånd.

Trypsin kan grovt delas in i två typer, den ena är rekombinant trypsin och den andra är icke-rekombinant trypsin.

• Icke-rekombinant trypsin härrör från djurextraktion, med animaliskt ursprung, och är också den traditionella användningen av trypsin, som vanligen finns i djurets matsmältningssystem och som extraheras direkt från bukspottkörtelvävnaden hos nötkreatur eller grisar.
• Rekombinant trypsin framställs med hjälp av genetisk rekombinant teknologi och är inte av animaliskt ursprung.

Produktintroduktion och tillämpning

Icke-rekombinant trypsin (från djur)

Produktegenskaper:

Icke-rekombinant trypsin (även känt som trypsin) är ett serinproteolytiskt enzym som extraheras från bukspottkörteln hos nötkreatur, får och grisar, som specifikt kan klyva karboxylterminalen av positivt laddat lysin och arginin, renat genom multipel kristallisation och vidare framställt med kromatografi och ultrafiltreringsteknologi.

Eftersom pankreasenzymer kan verka på transmembranproteiner och proteiner i den extracellulära matrisen, såsom cadherin, integrin, etc., används de nu ofta för att dissociera vävnader och monolagerceller. Även om trypsin kan hydrolysera proteolysen mellan celler till diskreta celler, är reaktionen mellan olika vävnader eller celler till trypsin olika, och aktiviteten hos dispergerade celler är också relaterad till koncentrationen av trypsin, reaktionstemperatur och tid, och trypsins förmåga att dispergera celler är starkast under förhållanden med pH 7-9 och temperatur på 37 °C. Tillsatsen av EDTA till trypsinlösningen som ett kelatbildande medel binder kalcium och magnesium till en sextandsstruktur, vilket kan försvaga cellcellsvidhäftningen och förbättra trypsins förvärv av hydrolyserade riktade peptidbindningar.

Den huvudsakliga tillämpningen av trypsin i de tidiga dagarna inom det biofarmaceutiska området var produktionen av insulin, och snart användes det även inom andra cellodlingsfält. Animaliska pankreasenzymer används vanligtvis i serumodling, och sammansättningen och koncentrationen av trypsin som sätts till olika celler är olika.

Ansökningar

1. produktion av insulin och inaktiverade vacciner;
2. Isolering och odling av vävnadsceller;
3. Klinisk och kirurgisk användning;
4. Processhjälpmedel inom livsmedelsindustrin;

Rekombinant trypsin (fritt från djur)

Produktegenskaper

Rekombinant trypsin är ett enzym som produceras med hjälp av genteknik, vilket har fördelarna med god stabilitet, hög renhet och inget animaliskt ursprung. I produktionsprocessen av moderna bioläkemedel kan användningen av råvaror som innehåller animaliskt ursprung föra in potentiella viruskällor som orsakar zoonotiska sjukdomar i produkten, såsom BSE från galna ko-sjuka, mul- och klövsjukevirus, etc., för att minska föroreningskällan, trypsin syntetiseras genom genteknik, vilket löser risken för porcinvirus eller bovinepsin.

Rekombinant trypsin är mestadels rekombinant uttryckt av rekombinant E. coli eller jästsystem och renas genom flerstegskromatografi, utan heterozymkontamination såsom kymotrypsin. Rekombinant trypsin har samma egenskaper som naturligt extraherat trypsin, med en aminosyrasekvens som är homolog med trypsinsekvens från svin, som specifikt klyver karboxylgrupperna i lysin- och argininrester i polypeptidkedjan.På grund av dess icke-animaliska föroreningar och höga renhet har den ett brett utbud av tillämpningar inom läkemedelsutveckling, biokemisk forskning, proteomik och andra områden.

Det vanliga rekombinanta trypsinet på marknaden är ett rekombinant svintrypsin uttryckt i Escherichia coli eller jäst med hjälp av DNA-rekombinant teknologi, och dess aminosyrasekvens överensstämmer helt med svintrypsin, med samma aktivitet och specificitet som naturligt trypsin. Den består av 223 aminosyror och innehåller 6 par disulfidbindningar. Enzymet innehåller två aktiva former av trypsin: α-trypsin och β-trypsin. Dess aktivitet hämmas av serinproteashämmare som PMSF och TLCK, metalljonkelatorer som EDTA etc. Rekombinant trypsin används i serumfri kultur, och liksom trypsin tillsätts olika celler med olika komponenter och koncentrationer av trypsin.

Ansökningar

1. vaccin och rekombinant insulinproduktion;
2. Beredning av vävnadsprover för cellanalys;
3. Immuncellsterapi;
4. Biofarmaceutisk produktion;
5. Proteinsekvens, struktur och omicsforskning

Detaljerad jämförelse av produkter

produkter	Icke-rekombinant trypsin (från djur)	Rekombinant trypsin (fritt från djur)
Punkt	40123ES（fenolröd(-),EDTA(+)） 40124ES（fenolröd(-),EDTA(-)） 40126ES（fenolröd(+),EDTA(-)） 40127ES（fenolröd(+),EDTA(+)）	40512ES 20416ES（MS-SAFE）
Källa	Tagen från bukspottkörteln hos nötkreatur, grisar och får	colibacillus（40512ES） Pichia pastoris（20416ES）
Säkerhet	Kontaminering med potentiella patogener	Ingen exogen viral kontaminering
Renhet	Mer än 90 % av 1:250 trypsinlösningen är föroreningar	Hög renhet (β-trypsin≥ 70 %, α-trypsin≤20%）
Typ av matsmältningscell	De flesta sammanhängande starkt vidhäftande cellinjer	De flesta sammanhängande starkt vidhäftande cellinjer
Gränsvärde för kymotrypsin	Högst 50 enheter kymotrypsin per 2500 enheter trypsin.	Ingen myrosinas och andra föroreningar enzymkontamination
Specifik aktivitet	≥2500 USP-enheter/mg protein	≥3800 USP-enheter/mg protein
Matsmältningseffekt	instabilitet	Stark matsmältning och låg mängd enzymer
Självskärningshastighet	Det är lätt att självklippa och producera självskärande fragment, vilket påverkar resultaten av masspektrometrianalys	Det är lätt att självklippa och producera självskärande fragment, vilket påverkar resultaten av masspektrometrianalys
Upplöst vätska	HBSS-lösning med eller utan Ca2+, Mg2+	HBSS-lösning med eller utan Ca2+ och Mg2+ (40512ES); 1 mM HCL（20416ES）
Cellöverlevnad	Normal	Normal
Om frys-upptining krävs	Ja	Ja

Förutom det vanligaste trypsinet som används vid cellnedbrytning, finns det många andra typer av matsmältningsenzymprodukter som också kan användas, såsom följande.

Om användningsområdet för kollagenas

Kollagenas är ett peptidas-endonukleas som specifikt kan känna igen Pro-X-Gly-Pro-sekvensen och klyva peptidbindningen mellan den neutrala aminosyran (X) och glycin (Gly) i sekvensen, kollagenas är det enda proteaset som kan bryta ned de naturliga kollagenfibrillerna med en tresträngad supercoiled struktur, och kan effektivt hydrolysera andra matrix-proteiner och extracellsaccharider. av bindväv och epitelvävnad, vilket gör denna produkt mycket lämplig för vävnadssmältning.

1. Kollagenas I., vanligen använd som en beredning av epitelceller, lever-, lung-, fett- och binjurevävnadsceller;
2. Kollagenas II, som används för framställning av vävnadshärledda celler såsom hjärta, ben, muskler, lever, sköldkörtel och brosk;
3. Kollagenas III, vanligen använd vid framställning av bröstceller;
4. Kollagenas IV, som vanligtvis används för beredning av pankreasöceller, eller för cellpreparationsexperiment där receptorintegritet måste upprätthållas.
5. Kollagenas V., lämplig för isolering av pankreasöceller och bindvävsceller.

Om användningsområdet för sammansatt trypsin

Accutase är en cellsmältning som innehåller proteolytisk och kollagenasaktivitet och är en perfekt ersättning för trypsin-EDTA-smältning för att smälta celler från konventionella vävnadsodlingskärl och vidhäftande odlingskärl. Accutase är lämpligt för vävnadsdissociation och cellisolering, eftersom de isolerade cellerna behåller intakta ytantigener och inte innehåller några djur- eller bakteriehärledda komponenter, som kan uppfylla kraven för efterföljande experiment såsom cellytemärkning, viral tillväxtanalys, flödescytometri och bioreaktorrelaterade analyser.

Användningsområden för ersättning för pankreasenzym

PerfCell Tryzyme™ Express enzymprodukter är mycket rena, har små cellskador, är milda i matsmältningen och kan lagras stabilt i rumstemperatur, vilket gör dem till ett idealiskt matsmältningsenzym för olika cellinjekulturer. Denna typ av produkt kräver inte användning av trypsinhämmare för inaktivering, och innehåller inte animaliskt ursprung, vilket är mer vänligt för vissa serumfria tillväxtvidhäftande cellexperiment.

Om användningsområdet för dispas

Dispase II dispase II, ett ospecifikt metalloproteinas, används vanligtvis inom cellbiologi för att isolera enstaka celler från olika vävnader eller organ, och används i efterföljande cellkulturer, såsom isolering av primära celler, cellpassage, etc., och kan också användas för att eliminera cellaggregation som sker under suspensionscellodling. Jämfört med andra proteaser som vanligtvis används inom cellbiologi (t.ex. trypsin, kollagenas, pronas, etc.), har detta enzym följande fördelar:

1. Snabba, effektiva och skonsamma cellnedbrytningsenzymer, med liten skada på celler, och kan bibehålla integriteten hos cellmembranen;
2. Kommer från bakterier, ingen mykoplasma eller annan djurviruskontamination;
3. Stark stabilitet, påverkas inte av temperatur, pH och serumkomponenter;
4. Den kan användas för isolering av olika typer av vävnader och celler.

Relaterade produktrekommendationer

Katalognummer	Produktnamn	Storlek
40123ES60	PerfCel™l Trypsin-EDTA (0,25%), fenolröd	100 ml
40124ES60	PerfCell™ Trypsin utan EDTA (0,25%), inget fenolrött	100 ml
40126ES60	PerfCell™ Trypsin (0,25 %), fenolröd	100 ml
40127ES60	PerfCell™ Trypsin-EDTA (0,25%), fenolröd	100 ml
40101ES25	Trypsin 1:250 (pulver)	25 g
40512ES10/60	PerfCell™ rekombinant trypsin（pulver）	10 mg/100 mg
20416ES60	Rekombinant trypsin（MS-SAFE）	100 µg
40134ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 ml
40135ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 ml
40506ES60	ACCUTASE	100 ml
40104ES60/80	Dispase II	100 mg/1 g