Bakgrund – Vad är ROS
Reactive oxygen species (ROS) är en normal produkt av cellmetabolism - en syreinnehållande bioaktiv molekyl, inklusive peroxid, superoxid, hydroxylradikal, singletsyre och α-syre, etc., som spelar en viktig reglerande roll i cellsignalvägar och transkription, såsom apoptos, autofagi, åldrande, cancer, etc.
Effekt av ROS-koncentration på celler – varför upptäcka ROS?
Vid låga nivåer av reaktiva syrearter är ROS involverad i intracellulär signalering och reglering som "redoxbudbärare". Men under miljöpåfrestningar (t.ex. joniserande strålning, värmeexponering, ultravioletta strålar, hypoxi, etc.), ökar ROS-nivåerna dramatiskt, vilket kan orsaka DNA-skador, hämma genuttryck, leda till felveckning av proteiner och till och med påverka proteinsyntesen, vilket orsakar allvarlig skada på cellulära strukturer, vilket är känt som oxidativ stress.
När väl ROS-nivåer överstiger kapaciteten hos endogena antioxidantförsvar, störs redoxbalansen, vilket leder till strukturella eller konformationella förändringar i DNA, lipider, proteiner och i slutändan celldöd.
ROS-nivå är en viktig signal om cellskador orsakade av normala fysiologiska funktioner och miljöfaktorer, och upptäckten av intracellulär ROS-nivå är av stor betydelse för att förstå signalvägarna och potentiella verkningsmekanismer för vissa läkemedel. Därför spelar valet av lämpliga sonder för detektion av ROS en viktig roll i sjukdomsmekanismforskning och läkemedelsscreening.
Hur fungerar ROS-detektering?
De Reactive Oxygen Species Assay Kit (CAT# 50101ES01) är den mest använda metoden för att kvantifiera nivåer av intracellulära reaktiva syreämnen baserat på förändringar i fluorescensintensiteten hos det fluorescerande färgämnet DCFH-DA (2,7-Diklordi-hydrofluoresceindiacetat).
DCFH-DA själv har ingen fluorescens och kan fritt passera genom cellmembranet, och efter att ha kommit in i cellen kan det hydrolyseras av intracellulära esteraser för att producera DCFH. DCFH kan dock inte penetrera cellmembranet, vilket gör det lätt för sonden att märkas och aggregeras i cellen. Intracellulära reaktiva syrearter kan oxidera icke-fluorescerande DCFH för att bilda fluorescerande DCF. Intensiteten av DCF grön fluorescens är direkt proportionell mot nivån av intracellulära reaktiva syrearter, och nivån av intracellulära reaktiva syrearter kan vara känd genom att detektera fluorescensen av DCF.
Under förhållanden med excitationsvåglängd 488 nm och emissionsvåglängd 525 nm, detekterades DCF-fluorescens med fluorescensmikroskop, laserkonfokalmikroskop, fluorescensspektrofotometer, fluorescensmikroplattläsare, flödescytometer, etc., för att bestämma den intracellulära reaktiva syrenivån.
Litteratur publicerad av kunder som använder denna produkt (några exempel)
I september 2022 har totalt 164 artiklar publicerats i ROS reactive oxygen species detection kit (50101ES01), med en total impact factor på 913,72.
Effekt av ROS-produktion på makrofagpolarisering och tumörcellsdöd （PMID: 35665496; PMID: 35301299; PMCID: PMC8931093PMCID: PMC9353410.
FAQ
F1: Vilka prover är lämpliga för ROS-testning?
A1: Det används vanligtvis för detektion av däggdjursceller och är endast lämpligt för detektion av reaktiva syrearter i levande celler eller in vivo.
F2: Är ROS-testsatsen lämplig för detektering i serum eller plasma?
A2: Ej lämplig för detektering av ROS i serum eller vävnadshomogenat. Färska vävnadsberedda encellssuspensioner kan provas.
F3: Kan växter eller bakterier upptäckas?
A3: Den är endast lämplig för detektering av reaktiva syrearter i levande celler eller in vivo, eftersom halveringstiden för hydroxylradikaler och superoxidradikaler av syre är mycket kort, och den är endast lämplig för detektering av levande celler. Växter eller bakterier, som kan användas för detektion efter beredning av protoplaster, detta kit kan inte detektera ROS in vivo.
F4: Hur kan jag undvika överdriven fluorescensbakgrund?
A4: Efter sondinkubation, se till att tvätta bort alla återstående prober som inte har kommit in i cellen.
F5: Kan jag upptäcka mängden ROS i normala celler?
A5: Innehållet av reaktiva syreämnen i normala celler är mycket lågt, och detektionseffekten kanske inte är särskilt bra.
F6: De negativa och positiva fluorescensvärdena är desamma, vad händer?
S6: Det kan bero på att koncentrationen av den tillsatta sonden är för stor, det rekommenderas att minska probkoncentrationen med 5-7,5 μM och inkubationstiden: 15-20 min.
F7: Fluorescensen hos den positiva kontrollen är svag, vad händer?
A7: Den positiva kontrollen Rosup koncentrerades vanligtvis till 100 μM, och en signifikant ökning av reaktiva syreämnen observerades 30 min-4 timmar efter stimulering. Effekten av den reaktiva syrespecies positiva kontrollen kan variera mycket mellan olika celler. Om ökningen av ROS inte observeras inom 30 minuter efter stimulering, kan induktionstiden förlängas eller koncentrationen av Rosup kan ökas på lämpligt sätt.
A8: Samma sond, inte delad, de första 5 gångerna är effekten mycket bra, den här gången är den inte färgad, vad är det?
F8: 1. Celltillståndet är inte bra, vilket resulterar i låg färgningseffektivitet; 2. Induktionstiden för positivt läkemedel är för kort och nivån av reaktiva syreämnen kan ökas avsevärt genom att inkubera vid 37°C i mörker under 30 min-4 timmar; 3. Sonden har frysts och tinats mer än 4 gånger, färgningseffektiviteten är reducerad och fluorescenssignalen är instabil (ibland stark, ibland svag och lätt att släcka). Det rekommenderas att proberna alikvoteras och förvaras i en -20°C frys skyddad från ljus för att undvika upprepade frys-upptiningscykler.
F9: Vilka instrument kan användas för testning?
A9: Fluorescensmikroskop, laserkonfokalmikroskop, fluorescensspektrofotometer, fluorescensmikroplattläsare, flödescytometer etc. kan detektera fluorescensvärden.
Vetenskapliga forskningspublikationer publicerade av kunder som använder denna produkt (delvis)
[1] Zhong D, Jin K, Wang R, Chen B, Zhang J, Ren C, Chen X, Lu J, Zhou M. Mikroalgbaserad hydrogel för inflammatorisk tarmsjukdom och dess associerade ångest och depression. Adv Mater. 2024 26 januari: e2312275. doi: 10.1002/adma.202312275. Epub före tryck. PMID: 38277492. OM: 29,4
[2] Zhang M, et al. Beväring av immunceller genom ljusaktiverbar tystande NK-härledd exosom (LASNEO) för synergetisk tumörutrotning. Adv Sci (Weinh). 2022 aug;9(22): e2201135. doi: 10.1002/advs.202201135. Epub 2022 4 juni. IF: 16,806
[3] Zhang D, et al. Mikroalgbaserade orala mikrobärare för tarmmikrobiotahomeostas och tarmskydd vid cancer strålbehandling. Nat Commun. 2022 Mar 17;13(1):1413. doi: 10.1038/s41467-022-28744-4. PMID: 35301299. IF: 14,919
[4] Jiao D, et al.Biokompatibla reducerade grafenoxidstimulerade BMSCs inducerar acceleration av benombyggnad och ortodontisk tandrörelse genom främjande av osteoklastogenes och angiogenes. Bioact Mater. 2022 6 februari; 15:409-425. doi: 10.1016/j.bioactmat.2022.01.021. PMID: 35386350; PMCID: PMC8958387. IF: 14,593
[5] Guo G, et al. Rymdselektiv kemodynamisk terapi av CuFe5O8 nanokuber för implantatrelaterade infektioner. ACS Nano. 2020 27 oktober;14(10):13391-13405. doi: 10.1021/acsnano.0c05255. Epub 2020 22 september. PMID: 32931252. IF: 14,588
[6] Yang C, et al. Röd fosfordekorerad TiO2 Nanorod-medierad fotodynamisk och fototermisk terapi för njurcellscancer. Små. 2021 juli;17(30): e2101837. doi: 10.1002/smll.202101837. Epub 2021 19 juni. PMID: 34145768. IF：13.281
[7] Xiaolu Chen, et al. Metall-fenolnätverk-inkapslade kaskadförstärkning leverans nanopartiklar övervinner cancerläkemedelsresistens via kombinerad svält/kemodynamisk/kemoterapi. Chemical Engineering Journal. 2022 aug; 442:136221. IF: 13,273
[8] Hao Ding, et al. Mesenkymala stamceller inkapslade i en reaktiv syreupptagning och O2-genererande injicerbar hydrogel för behandling av hjärtinfarkt. Chemical Engineering Journal. 2022.133511:1385-8947. IF: 13,273
[9] Yu H, et al. Trippelkaskad nanokatalysator med laseraktiverbar O2-tillförsel och fototermisk förbättring för effektiv katalytisk terapi mot hypoxisk tumör. Biomaterial. 2022 Jan; 280:121308. PMID: 34896860. IF: 12,479
[10] Sun D, et al. En cyklodextrinbaserad nanoformulering uppnår samtidig leverans av ginsenosid Rg3 och quercetin för kemo-immunterapi vid kolorektal cancer. Acta Pharm Sin B. 2022 Jan;12(1):378-393. PMID: 35127393. IF: 11,614
[11] Xiong Y, et al. Tumörspecifika aktiverbara biopolymernanopartiklar stabiliserade av hydroxietylstärkelseprodrug för självförstärkt kooperativ cancerterapi. Teranostik. 1 januari 2022;12(2):944-962. PMID: 34976222. IF: 11,556
[12] Gao J, et al. Mitokondrieinriktad supramolekylär "nano-båt" som samtidigt hämmar dubbel energimetabolism för tumörselektiv och synergistisk kemo-radioterapi. Teranostik. 1 januari 2022;12(3):1286-1302. PMID: 35154487. IF: 11,556
[13] Zhong D, et al. Kalciumfosfat konstruerade fotosyntetiska mikroalger för att bekämpa hypoxisk tumör genom in-situ-modulerande hypoxi och kaskadradiofototerapi. Teranostik. 2021 jan 22;11(8):3580-3594. PMID: 33664849. IF: 11,556
[14] Sun J, et al. Cytotoxicitet hos stabiliserad/stelifierad flygaska från förbränning av kommunalt fast avfall. J Hazard Mater. 2022 15 februari;424(Pt A):127369. doi: 10.1016/j.jhazmat.2021.127369. Epub 2021 29 september. PMID: 34879564. IF: 10,588
[15] Zhu C, et al. Multifunktionell värmekänslig hydrogel för att modulera mikromiljön vid artros genom att polarisera makrofager och ta bort RONS. J Nanobioteknologi. 2022 maj 7;20(1):221. IF: 10,435
[16] Pan X, et al. Zinkoxidnanosfär för vätesulfidrening och ferroptos av kolorektal cancer. J Nanobioteknologi. 2021 nov 27;19(1):392. doi: 10.1186/s12951-021-01069-y. PMID: 34838036; PMCID: PMC8626909. IF: 10,435
[17] Han J, et al. Guld-silver nanoskal främjar sårläkning från läkemedelsresistenta bakterieinfektioner och möjliggör övervakning via ytförbättrad Raman-spridningsbild. Biomaterial. 2020 Mar; 234:119763. PMID: 31978871. IF: 10,317
[18] Cheng Q, et al. Nanoterapeutika stör cellulär redoxhomeostas för mycket förbättrad fotodynamisk terapi. Biomaterial. 2019 dec; 224:119500. doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119500. Epub 2019 17 september. PMID: 31557591. IF: 10,273
[19] Zhong D, et al. Laserutlöst aggregerad kubisk α-Fe2O3@Au nanokompositer för magnetisk resonanstomografi och fototermisk/förbättrad strålningssynergistisk terapi. Biomaterial. 2019 oktober; 219:119369. PMID: 31351244. IF: 10,273
[20] Sun C, et al. Selenoxideliminering manipulerar den oxidativa stressen för att förbättra antitumöreffektiviteten. Biomaterial. 2019 dec; 225:119514. doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119514. Epub 2019 24 september. PMID: 31569018. IF: 10,273
Rekommenderade produkter
| Produktnamn | Katalognummer | Storlek |
| 50101ES01 | 1 kit (1000 tester) |