När du använder traditionella högtrogna enzymer för PCR är det oundvikligt att stöta på några svåra problem. Till exempel kan troheten inte vara tillräcklig, vilket leder till mutationer eller deletioner i målbaserna även efter sekvensering av de amplifierade fragmenten. Förstärkningstiden är också relativt lång; ibland kan det ta nästan 2 timmar att amplifiera ett 5kb-fragment. Nu introducerar XiaoYi en snabb high-fidelity PCR för att lösa dina problem! -- Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (Ultra-snabb High-Fidelity PCR Premix).
De 2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (med färg) innehåller en förinställd elektroforesindikator, vilket gör att PCR-produkterna kan användas direkt för elektrofores. De förstärkta produkterna har trubbiga ändar. Denna högtrogna enzymblandning erbjuder fördelarna av att vara snabb, enkel, mycket känslig, starkt specifik och stabil. I reaktionssystemet behöver endast primers och mallar tillsättas. Dessutom innehåller produkten även ett specifikt skyddsmedel, som säkerställer att den högtrogna PCR-premixen bibehåller stabil aktivitet även efter upprepad frysning och upptining.
Produktegenskaper
- Hög Trohet: Låg oöverensstämmelse hastighet, med a bas oöverensstämmelse förhållande av 231/300 000 i hög GC mutationsbenägen sekvenser;
- Snabb Förstärkning Hastighet: Förlängning hastighet som snabb som 5 sekunder per kb;
- Bred Tillämplighet: Kapabel av beläggning gener med 20-80 % GC innehåll, tål mus lysater och 20 % blod;
- Bra Stabilitet: Burk vara lagras på 37°C för 7 dagar utan påverkar produkt prestanda;
- Snabb och Bekväm: Helt enkelt tillägga primers och mall för förstärkning, kommer med belastning färga för direkt elektrofores.
Produktprestandademonstration
High Fidelity, Low Mismatch Rate
Genom att använda olika arters genom som mallar valdes sex GC-rika fragment som är mycket benägna för basmutationer/förluster ut för amplifiering. De respektive PCR-produkterna klonades in i vektorer och 100 enkla kloner för varje sekvens valdes ut för sekvensering för att bekräfta förekomsten av basfelmatchning/mutation. Resultaten visade att den snabba högtrogna PCR-mastermixen (10164ES) hade en överlägsen hastighet av basfelmatchning/mutation jämfört med inhemska och internationella märkesreagenser.
Förlängningstiden kan nå upp till 5 sekunder/kb
Med användning av den snabba högfientliga enzympremixen (10164ES) och produkt T amplifierades fragment av olika längd (0,4-10 kb) från 100 ng humant genomiskt DNA-mall med en förlängningshastighet på 5 sek/kb, med en förlängningstid som krävdes till 5 sek/kb. Resultaten visade att den snabba högtrogna enzympremixen (10164ES) kan amplifiera fragment inom 10 kb med en förlängningshastighet på 5 sek/kb.
Kan amplifiera genfragment med olika GC-innehåll
Använder den snabba högtrogna enzympremixen (10164ES) för att amplifiera genfragment med 23-76 % GC-innehåll från humana genomiska DNA-mallar, med förlängningstiden inställd på 5 sek/kb. Resultaten visade att produkten har god amplifieringsspecificitet och är kapabel att amplifiera fragment med olika GC-innehåll.
Kan amplifiera genfragment med varierande GC-innehåll
Använder den snabba högfientliga enzympremixen (10164ES) för att amplifiera fragment av varierande längd från olika prover, med en förlängningstid inställd på 5-10 sekunder per kilobas. Resultaten indikerar att denna produkt uppvisar utmärkt amplifieringsspecificitet och är kompatibel med amplifieringen av olika fragment från olika mallar.
Notera: 1. Genomiskt DNA från mus 1 kb; 2. Genomiskt DNA från mus 2 kb; 3. Genomiskt DNA från mus 6 kb; 4. Majsgenomiskt DNA 1 kb; 5. Ris genomiskt DNA 2 kb-A; 6. Ris genomiskt DNA 2 kb-B; 7. Humant 293-cell-cDNA 1 kb; 8. Humant 293-cell-cDNA 2 kb; 9. Humant 293-cell-cDNA 3 kb; 10. Humant 293-cell-cDNA 12 kb; 11. E. coli-buljong 8 kb; 12. E. coli-buljong 16 kb; 13. Ris genomiskt DNA 10 kb-A; 14. Ris genomiskt DNA 10 kb-B; 15. Ris genomiskt DNA 10 kb-C; 16. Ris genomiskt DNA 20 kb-A; 17. Ris genomiskt DNA 20 kb-B; 18. Direkt amplifiering av humant blod 3 kb.
Hög detektionshastighet av mallförstärkning över olika arter
Med användning av den snabba högtrogna enzympremixen (10164ES) amplifierades olika GC-innehållsfragment från 0,5-10 kb i Arabidopsis, raps och potatis, med en förlängningstid på 5 sek/kb. Resultaten visade att den snabba högtrogna enzympremixen (10164ES) kan säkerställa framgångsrik amplifiering.
Genom att använda den snabba högtrogna enzympremixen (10164ES) förstärktes slumpmässiga sekvenser (slumpmässigt valda) från Arabidopsis, raps, fruktflugor, Caenorhabditis elegans och zebrafisk, med fragmentstorlekar från 0,5-10 kb och täckande 20-80% GC-innehåll. Förlängningstiden sattes till 5 sek/kb. Resultaten visade att den snabba high-fidelity enzympremixen (10164ES) har en hög detektionshastighet.
Bra stabilitet
Använda den snabba högtrogna enzympremixen (10164ES) som har värmeaccelererats lagrad vid 37 ℃ i 3 dagar respektive 7 dagar för att amplifiera 3 kb och 5 kb DNA-fragment från 100 ng humant genomiskt DNA, med en förlängningstid inställd på 5 sek/kb. Resultaten visar att produkten har god stabilitet.
Feedback från kundprov
Djur gDNA-120bp-50%GC
Kundutvärdering: PCR-processen är snabb, banden är lämpliga och kan laddas direkt i agarosgelelektrofores. Banden av märket N är snedställda uppåt, vilket kan bero på påverkan av dess egen buffert, och eftersom ingen laddningsbuffert tillsattes kan denna produkt ersätta high-fidelity-enzymet i mitt nuvarande experimentella protokoll.
Plantera cDNA-729bp-45,13%GC
Kundutvärdering: Jämfört med T-märket är kloningsbanden tydligare och mer enhetliga, och hela PCR-processen går snabbare. Det finns inget behov av att lägga till extra färg när du kör gelen, vilket är mycket bekvämt och tidsbesparande.
Mikrobiell gDNA-1158、1953bp-58,8%、52,9%GC
Kundutvärdering: Jämfört med varumärket V är effekten jämförbar, men personligen tycker jag att den är ännu bättre.
Plantera cDNA-2000bp-40%GC
Kundutvärdering: Effekten är mycket god, och remsan är tydlig.
High-Fidelity PCR Selection Guide
| Produktpositionering | Produktnamn | Katt# |
| 5s/kb, säkerställer trohet och hastighet (Med Färga) | 10164ES | |
| 5s/kb, säkerställer trohet och hastighet (utan färgämne) | 2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix | 10163ES |
| 83×Taq, hög detektionshastighet (med färgämne) | 2×Hieff Canace™ Plus PCR Master Mix (med färgämne) | 10154ES |
| 83×Taq enskilt enzym + buffert separat | 10153ES |