Fluorescerande kvantitativ PCR är ett mycket känsligt experiment som kräver en hög grad av precision i operationen av laboratoriepersonal. Därför stöter vi oundvikligen på problem under qPCR-experimentprocessen:
I. Frågor relaterade till icke-experimentella faktorer
- Laboratoriet har många qPCR-experimentprojekt, och instrumenten är upptagna, vilket gör att de noggrant förberedda reaktionsblandningarna saknar en tydlig metod för bortskaffande.
- Det finns många kvantitativa prover, uppgiften att lägga till prover är betungande och det finns en risk för provtillsättningsfel på grund av yrsel, vilket leder till otillförlitliga experimentella resultat.
- Långa maskinkörningstider, begränsat antal experimentkörningar och experimentella uppgifter kan inte slutföras som planerat regelbundet.
- Laboratorieutrustningen byts ut mot nya instrument, det finns flera kvantitativa instrument i laboratoriet och de kvantitativa reagensen är inte kompatibla med instrumenten.
II. Frågor som begränsas av experimentella faktorer
Kvantifieringsproblem med gener med låg förekomst. Komplex primerdesign och screeningsprocesser, känslighet och reproducerbarhet för replikatbrunnar...
Som en erfaren tillverkare dedikerad till forskning och utveckling av qPCR-reagenser, YEASEN har noggrant utvecklat en högpresterande qPCR premix-lösning – Hieff UNICON™ Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix, som kan lösa de tidigare nämnda experimentella problemen i ett svep. Den Universal ROX som används i denna produkt ersätter den traditionella ROX, som kompenserar för de optiska vägskillnaderna mellan olika instrumentplattformar, vilket gör den lämplig för alla qPCR-instrument. Dessutom använder produkten en antikroppsmodifieringsmetod och inkluderar tillsatser som förbättrar genamplifiering, vilket avsevärt förbättrar produktens amplifieringsprestanda. Den balanserar perfekt de högpresterande behoven hos forskare i det vetenskapliga samfundet med industriföretagens högeffektiva krav.
Produktegenskaper
- Bred instrument kompatibilitet: De förblandning innehåller a specifik typ av hänvisning färga, eliminera de behov till justera de ROX koncentration.
- Lätt Spårning: De blå förblandning tillåter för direkt visualisering till skilja om de prov har varit lade till, helt enkelt av observera de färg.
- Hög Stabilitet: De system är beredd på rum temperatur, och de blandad system burk vara lagras på 4°C för upp till 24 timmar utan några ändra i de testa resultat.
- Snabb Inställning: Kompatibel med både standard och snabb program, tillåter de kvantitativ experimentera till vara avslutad i som snabb som 46 minuter.
- Excellent Förstärkning Prestanda: Hög förstärkning effektivitet, bra specificitet, kapabel av upptäcka gener på de enda kopiera antal.
Beställningsinformation
| Produktpositionering | Produktnamn | Katt# |
| Högkänslig universell kvantitativ premix | 11184ES | |
| Färgspårning Högkänslighet Fluorescens Kvantitativ Förblandning | 11188ES | |
| 11189ES | ||
| 11190ES |
Produktens prestanda
1.Hög känslighet: kan detektera ner till en enda kopia
Figur 1. Hieff UNICON™ Universal Blue premix kan effektivt detektera ett mallmängdsområde över 7 storleksordningar, med hög förstärkningseffektivitet och ett bra linjärt förhållande inom ett brett linjärt område. Den använda mallen var 2 µL plasmid med en koncentration av 10^6 till 10^0 kopior, vilket amplifierade den humana IL23R-genen.
2.Den upptäckt hastighet och specificitet är bra: allmänt tillämplig till förstärkare med 30-70 % GC innehåll
Figur 2. Hieff UNICON™ Universal Blue premix är allmänt användbar för förstärkare med 30-70 % GC-innehåll, vilket säkerställer en extremt hög specificitetsdetektionshastighet. Med användning av 2 µL 293T cDNA som mall designades 1000 par primrar för 200 bp amplimerer (GC%-halt 30%-70%) med Primer5-mjukvaran, och 27 av dessa amplimerer amplifierades slumpmässigt.
3.Hög upplösning: Kan exakt urskilja skillnader i mallkoncentration på två gånger
Figur 3. Hieff UNICON™ Universal Blue premix kan exakt urskilja skillnader i mallkoncentration på 2-faldigt. Mallen som användes var en 2-faldig gradientspädning av 2 µL 293T cDNA-stamlösning, som amplifierade GAPDH-genen.
4.God reproducerbarhet av duplikatbrunnar: 90 duplikatbrunnar
Figur 4. Hieff UNICON™ Universal Blue-premix uppvisar utmärkt reproducerbarhet, med amplifieringskurvorna för 90 duplikatbrunnar som visar hög sammanträffande och en standardavvikelse för Ct-värden på mindre än 0,2. Med användning av 1 µL 293T cDNA som mall amplifierades GAPDH-genen.
5.Bra stabilitet: Premixen förblir opåverkad i amplifieringsprestanda även efter att ha frysts och tinats 50 gånger
| Frys-tina cykler | 0 gång | 10 gånger | 30 gånger | 50 gånger |
| Genomsnittlig Ct | 23.11 | 23.17 | 23.18 | 23.25 |
| ▲Ct | - | 0,06 | 0,07 | 0,14 |
Figur 5. Hieff UNICON™ Universal Blue premix visar ingen förändring i förstärkningsprestanda efter att ha frysts och tinats 50 gånger. Med användning av 1 µL 293T cDNA som mall amplifierades C2orf68-genen med premix som hade genomgått olika antal frys-upptiningscykler.
Kund Feedback
Provkälla: äggstockscancercellinje ID8 från mus, HM1
Provkälla: Mus epididymal adipose RNA
Provkälla: Arabidopsis thaliana leaf RNA
Litteratur med hög impact factor delvis publicerad med YEASEN qPCR Mix
[1] Li Y, Wang D, Ping X, et al. Lokal hypertermibehandling framkallar brunfärgning av vitt fett och behandlar fetma. Cell. 2022;185(6):949-966.e19.doi:10.1016/j.cell.2022.02.004.(IF=66,850)
[2] Seki T, Yang Y, Sun X, et al. Brunt-fett-medierad tumörsuppression genom kylförändrad global metabolism. Natur. 2022;608(7922):421-428. doi:10.1038/s41586-022-05030-3. (IF=69,504)
[3] Chen P, Wang W, Liu R, et al. Olfaktorisk sensorisk erfarenhet reglerar gliomagenes via neuronal IGF1. Natur. 2022;606(7914):550-556. doi:10.1038/s41586-022-04719-9.(IF=69,504)
[4] Dong W, Zhu Y, Chang H, et al. En SHR-SCR-modul specificerar baljväxtkortikala cellöde för att möjliggöra nodulation. Natur. 2021;589(7843):586-590. doi:10.1038/s41586-020-3016-z.(IF=69,504)
[5] Lu XY, Shi XJ, Hu A, et al. Matning inducerar kolesterolbiosyntes via mTORC1-USP20-HMGCR-axeln. Natur. 2020;588(7838):479-484. doi:10.1038/s41586-020-2928-y.(IF=69,504)
[6] Bi X, Wang K, Yang L, et al. Spåra de genetiska fotavtrycken från landning av ryggradsdjur i fiskar med icke-teleoststrålefena. Cell. 2021;184(5):1377-1391.e14. doi:10.1016/j.cell.2021.01.046.(IF=66,850)
[7] Liu S, Hua Y, Wang J, et al. RNA-polymeras III krävs för reparation av DNA-dubbelsträngsbrott genom homolog rekombination. Cell. 2021;184(5):1314-1329.e10. doi:10.1016/j.cell.2021.01.048.(IF=66,850)
[8] Liu CX, Li X, Nan F, et al. Struktur och nedbrytning av cirkulära RNA reglerar PKR-aktivering i medfödd immunitet. Cell. 2019;177(4):865-880.e21. doi:10.1016/j.cell.2019.03.046.(IF=66,850)
[9] Han X, Wang R, Zhou Y, et al. Kartläggning av muscellsatlasen av Microwell-Seq. Cell. 2018;172(5):1091-1107.e17. doi:10.1016/j.cell.2018.02.001.(IF=66,850)
[10] Chai Q, Yu S, Zhong Y, et al. Ett bakteriellt fosfolipidfosfatas hämmar värdpyroptos genom att kapa ubiquitin. Vetenskap. 2022;378(6616):eabq0132.doi:10.1126/science.abq0132.(IF=63,714)
[11] Yu Q, Liu S, Yu L, et al. RNA-demetylering ökar avkastningen och biomassan hos ris- och potatisplantor i fältförsök. Nat Biotechnol. 2021;39(12):1581-1588. doi:10.1038/s41587-021-00982-9.(IF=68,164)
[12] Han F, Liu X, Chen C, et al. Hyperkolesterolemi riskassocierad GPR146 är en föräldralös G-proteinkopplad receptor som reglerar blodkolesterolnivåerna hos människor och möss. Cell Res. 2020;30(4):363-365. doi:10.1038/s41422-020-0303-z.(IF=46,297)
[13] Wang Z, Lu Z, Lin S, et al. Leucin-tRNA-syntas-2-uttryckande B-celler bidrar till immunoevasion av kolorektal cancer. Immunitet. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017.(IF=43,474)
[14] Bi Q, Wang C, Cheng G, et al. Microglia-deriverad PDGFB främjar neuronala kaliumströmmar för att undertrycka basal sympatisk tonicitet och begränsa hypertoni. Immunitet. 2022;55(8):1466-1482.e9. doi:10.1016/j.immuni.2022.06.018.(IF=43,474)
[15] Wang X, Ni L, Wan S, et al. Febril temperatur kontrollerar kritiskt differentieringen och patogeniciteten hos T Helper 17-celler. Immunitet. 2020;52(2):328-341.e5. doi:10.1016/j.immuni.2020.01.006.(IF=43,474)
[16] Xiao J, Li W, Zheng X, et al. Inriktning på 7-dehydrokolesterolreduktas integrerar kolesterolmetabolism och IRF3-aktivering för att eliminera infektion. Immunitet. 2020;52(1):109-122.e6. doi:10.1016/j.immuni.2019.11.015.(IF=43,474)
[17] Zhang X, Zhang C, Qiao M, et al. Utarmning av BATF i CAR-T-celler ökar antitumöraktiviteten genom att inducera motstånd mot utmattning och bildning av centrala minnesceller. Cancercell. 2022;40(11):1407-1422.e7. doi:10.1016/j.ccell.2022.09.013.(IF=38,585)
[18] Wang XY, Wei Y, Hu B, et al. c-Myc-driven glykolys polariserar funktionella regulatoriska B-celler som utlöser patogena inflammatoriska svar. Signal Transduct Target Ther. 2022;7(1):105. Publicerad 2022 18 april. doi:10.1038/s41392-022-00948-6.(IF=38,104)
[19] Fan H, Hong B, Luo Y, et al. Effekten av vassleprotein på virusinfektion och replikering av SARS-CoV-2 och pangolin-coronavirus in vitro. Signal Transduct Target Ther. 2020;5(1):275. Publicerad 2020 24 november. doi:10.1038/s41392-020-00408-z.(IF=38,104)
[20]Ren Y, Wang A, Wu D, et al. Dubbel hämning av medfödd immunitet och apoptos av humant cytomegalovirusprotein UL37x1 möjliggör effektiv virusreplikation. Nat Microbiol. 2022;7(7):1041-1053. doi:10.1038/s41564-022-01136-6.(IF=30,964)