Kärnan i NGS-bibliotekskvantifiering är nukleinsyra (DNA eller RNA) kvantifiering. Noggrann analys av NGS-bibliotekskvantifiering är avgörande för att erhålla sekvenseringsdata av hög kvalitet. Om den kvantitativa koncentrationen av NGS-biblioteket är hög, kan utbytet av sekvenseringsdata vara lågt på grund av otillräcklig klustring. Låg kvantitativ koncentration kan dock orsaka signalinterferens mellan kluster för att producera data av låg kvalitet och till och med leda till sekvenseringsfel. Dessutom, med ökningen av sekvenseringsflödet av sekvenserare, kombineras ofta flera NGS-bibliotek för sekvensering. Enligt kraven på storleken på sekvenseringsdata blandas NGS-bibliotek med motsvarande molära kvantiteter baserat på de kvantitativa resultaten för att stabilisera utmatningen av storleken på varje provdata. Därför är korrekt NGS-bibliotekskvantifiering av bibliotek avgörande.

För närvarande finns det två huvudmetoder för NGS-bibliotekskvantifiering, ultraviolett absorptionsmetoden och den fluorescerande färgmetoden. NanoDrop är ett DNA-kvantifieringsinstrument designat baserat på principen om ultraviolett absorption; Qubit är ett DNA-kvantifieringsinstrument utvecklat enligt principen om fluorescerande färgämne. Den kvantitativa noggrannheten och kostnaden för dessa två metoder är olika. Här rekommenderas främst qubitmetoden. Så varför rekommenderar vi qubiten till dig? Vilka egenskaper kännetecknar Qubit-produkter som levereras av Yeasen? Fortsätt gärna läsa...

1. Varför rekommenderar vi Qubit till dig?

2. Vilka egenskaper har Qubit-produkter som levereras av Yeasen?

• Hur fungerar Qubit?
• Populär produkt från Yeasen
• Produktegenskaper

3. Hur väljer man Qubit för olika prover?

1. Varför rekommenderar vi Qubit till dig?

Det råder ingen tvekan om att Qubit är bättre än Nanodrop. Så varför är qubit bättre än nanodrop? Vad är skillnaden mellan qubit och nanodrop? Först, som tidigare nämnt, skiljer de sig åt i principen om DNA-kvantifiering, NanoDrop är designad baserat på ultraviolett absorption. Principen för den ultravioletta absorptionsmetoden är att det finns purin- och pyrimidinbaser i nukleinsyrakomponenter, och dessa baser har konjugerade dubbelbindningar. Det finns stark ljusabsorption vid 250-280nm i UV-området, och det maximala absorptionsvärdet är cirka 260nm. Därför kan UV-absorptionen av nukleinsyra användas för koncentrationskvantifiering. NanoDrop är enkel och snabb att använda, men den kan inte skilja mellan DNA, RNA, nedbrutna nukleinsyror, fria nukleotider och andra föroreningar. Det är inte lämpligt för att erhålla korrekta kvantitativa biblioteksdata. Men Qubit-kvantifiering är det bästa valet för korrekt NGS-bibliotekskvantifiering, särskilt för DNA-kvantifiering. Så vad är funktionerna för kvantifiering av qubit DNA? Se följande tabell:

2. Vilka egenskaper har Qubit-produkter som levereras av Yeasen?

Innan vi introducerar egenskaperna hos Qubit-produkter som levereras av Yeasen, låt oss förstå hur det fungerar.

2.1 Hur fungerar Qubit?

Principen för Qubit är att använda fluorescerande färgämnen för att binda till DNA-molekyler för att avge fluorescens, och sedan mäta fluorescensintensiteten för att erhålla koncentrationen av nukleinsyra. Fluorescerande färgämnen fluorescerar endast efter bindning till DNA-dubbelsträngen, och den resulterande fluorescensen är proportionell mot DNA-koncentrationen.

2.2 Populär produkt från Yeasen

De 1×dsDNA HS Assay Kit för Qubit® (Cat#: 12642ES), utvecklat på basis av dsDNA HS Assay Kit för Qubit®-kit (katnummer: 12640ES), är en färdig Qubit-förblandningslösning för att förspäda de koncentrerade färgämnena i originalsatsen till en fungerande lösning. Under drift behöver du bara blanda arbetsvätskan med provet som ska testas för att bestämma provkoncentrationen med Qubit® fluorometer, vilket är mer bekvämt att använda.

2.3 Produktegenskaper

Enkel och lätt att använda: färdigblandad vätska, inget behov av att förbereda arbetsvätska, enkel användning, kvantitativt mer tidsbesparande;

Figur 1. Processerna för dsDNA HS Assay Kit för Qubit

Ultrahög känslighet: 64x gradientutspädning exakt kvantifiering, 0,2-100 ng dsDNA har bra linjärt samband;

Superspecificitet: Specifik detektion dsDNA, har utmärkt tolerans mot vissa konventionella föroreningar;

Snabb bindningshastighet för färgämnet: mättnad kan nås inom 2 minuter, så det finns ingen anledning att vänta på snabb avläsning av exakta kvantitativa resultat;

Hög stabilitet: Fluorescenssignalen varade i 3 timmar och den kvantitativa noggrannheten påverkades inte efter 20 dagar vid rumstemperatur.

Figur 1. Produktstabilitetstestet. Resultaten visar att det finns kvar stabil efter att ha förvarats i rumstemperatur i 2 veckor (avvikelsen mellan det uppmätta värdet och det teoretiska värdet var <10%)

Notera: Två koncentrationer av dsDNA valdes ut, och Thermo#Q33230 lagrad vid 4 ℃, Yeasen#12642 lagrad vid 4 ℃ och Yeasen#12642 lagrad i rumstemperatur (cirka 25 ℃) användes för att bestämma koncentrationsvärdena vid olika tidpunkter, och avvikelsen mellan varje mätning och den första avvikelsen var 0) beräknat.

Figur 2. Produktstabilitetstest. Superstabilitet, hög relevans av testresultat inom giltighetstiden

3. Hur väljer man Qubit för olika prover?

Qubit, snabb kvantifiering! Att använda Qubit för bibliotekskvantifiering har många fördelar. Dess upptäcktsprocess är snabb och effektiv.Sekvenseringsresultat kan erhållas inom några sekunder för ett enda prov och koncentrationen kan matas ut direkt, vilket är mycket intuitivt. Samtidigt kan den också vara kompatibel med det mesta av enzymmärkningsinstrumentet för kvantifiering av batchprover, vilket är förstahandsvalet för konventionell bibliotekskvantifiering och dsDNA-kvantifiering.