Mänsklig Wnt3A uttryckt i HEK293 -celler uppvisar hög aktivitet som främjar organoider odling

Organoider är in vitro-skapade tredimensionella modeller som nära liknar naturliga vävnader eller organ, och de har betydande betydelse inom områdena sjukdomsmodellering, organföryngring och individualiserad medicinsk vård. Odlingen av dessa organoider kräver noggrann hantering av en mångfald av cytokiner, där Wnt3a utmärker sig som en ofta använd faktor som tar en avgörande roll för att vårda organoider som härrör från ett brett spektrum av vävnader.

Vad är Wnt-3a?

Wnt-3a tillhör Wnt-familjen, en grupp av utsöndrade proteiner som omfattar 19 mänskliga varianter, inklusive Wnt1, Wnt2, Wnt2b (Wnt13), Wnt3, Wnt3a, Wnt4, Wnt5a, Wnt5b, Wnt6, Wnt7a, Wnt8ab, Wnt8ab, Wnt8ab, Wnt8ab, Wnt8ab, Wnt8ab (även känd som Wnt14), Wnt9b (Wnt14b), Wnt10a, Wnt10b, Wnt11 och Wnt16. Denna familj kännetecknas av dess bevarande och cysteinrika sammansättning. Wnt-proteiner underlättar Wnt-signalvägen genom att binda till cellmembranreceptorer eller angränsande cellmembranreceptorer. Denna väg kan kategoriseras i den kanoniska vägen, förmedlad av β-catenin, som inkluderar Wnt1, Wnt2, Wnt2b, Wnt3, Wnt3a, Wnt7a, Wnt8, Wnt8b och Wnt10a, och den icke-kanoniska vägen, som omfattar Wnt-4, oberoende av W, βnt4 Wnt5a, Wnt6 och Wnt11. Wnt3a, som den huvudsakliga medlemmen av Wnt-familjen, är spridd överallt och utövar en central roll i att styra olika cellulära funktioner, såsom självförnyelse, spridning, differentiering och motilitet.

Wnt-3a signalvägstransduktionsmekanism

Wnt-signalvägen är ett mångfacetterat nätverk av proteininteraktioner främst förknippade med embryonal utveckling och cancer. Men det spelar också en roll i normala fysiologiska processer i vuxna organismer. Wnt3a binder till sin receptor, Frizzled (Fz) proteinet, tillsammans med det co-receptor lipoprotein receptor-relaterade proteinet (LRP5/6), och aktiverar sedan byggnadsställningsproteinet Disheveled (Dvl). Denna aktivering leder till demontering av "destruktionskomplexet", som består av Kaseinkinas 1 (CK1), glykogensyntaskinas-3β (GSK-3β) och byggnadsställningsproteiner adenomatös polypos coli (APC), Axin1 och Axin2. Upplösning av detta komplex stabiliserar det fria β-Catenin-proteinet i cytoplasman. Det ackumulerade β-Catenin i cytoplasman translokerar sedan in i kärnan, där det binder till transkriptionsfaktorer i TCF/LEF-familjen, vilket slutligen aktiverar nedströms målgener såsom c-myc och Cyclin D1. Denna kaskad inducerar efterföljande cellulära svar. Sammanfattningsvis kan Wnt-signalvägen förenklas enligt följande: Wnt3a→FZD→DVL→komplex upplösning→β-Catenin går in i kärnan→TCF/LEF→nedströms gentranskription. Utan Wnt3a bryts β-catenin normalt ned i cytoplasman av "destruktionskomplexet", som riktar sig mot det för ubiquitination och efterföljande nedbrytning i proteasomen. Som ett resultat kan det inte komma in i kärnan för att initiera transkriptionen av gener nedströms. Wnt/β-catenin-signalvägen är mycket bevarad under hela evolutionen och spelar en grundläggande roll i embryonal utveckling, celltillväxt, differentiering, polaritetsbildning, neural utveckling och karcinogenes.

Wnt3a och organoider

Wnt3a har en central position som en av de mest använda odlingsfaktorerna för generering av organoider. Dess höga aktivitet, överensstämmelse mellan satser, brist på kontaminering och serumfria beredning är nyckelfaktorer som bidrar till framgången med organoidexperiment.Wnt3a har funnit utbredd användning i organoidkulturer av olika vävnader, inklusive tarmen, magen, bukspottkörteln, levern, sköldkörteln, matstrupen och nervsystemet. I ett försök att hjälpa vetenskapliga forskare och läkemedelsföretag i deras studier om den kliniska tillämpningen av Wnt3a i organoidbildning och tumörforskning, har YEASEN introducerat en mycket aktiv Wnt3a-proteinprodukt (katalog: 92276ES) utformad för att underlätta organoidodling.

Figur 3. Mätt genom dess förmåga att inducera Topflash-reporteraktivitet i HEK293T mänskliga embryonala njurceller. ED50 för denna effekt är 25 ng/ml.

Organoid kulturvalidering

Yeasen cytokiner har verifierats på mänskliga tumörorganoider såsom lungcancer, livmoderhalscancer, äggstockscancer, bukspottkörtelcancer och tarmcancer, och normala organoider såsom organoider i tunntarm hos människor och mus.

Besläktade cytokiner information