Protein A och Protein G är guldstandardproteinerna för antikroppsaffinitetsrening och immunfällning (IP). Genom att kovalent koppla både Protein A och Protein G till agaros eller magnetiska pärlor, erbjuder dessa verktyg ett bredare bindningsintervall jämfört med pärlor med endast en proteintyp, vilket ökar deras mångsidighet. Dessutom är protein A och protein G som används i dessa produkter genetiskt modifierade för att bibehålla sin höga affinitet för immunglobuliner (Ig) samtidigt som de eliminerar icke-primära bindningsdomäner, vilket minskar ospecifika interaktioner.
Tabell 1: Jämförelse av protein A/G agarospärlor och magnetiska pärlor
|
| rProtein A/G Agarose Harts | Protein A/G MagBeads |
| Matris | Mycket tvärbundna 4% agarosmikrosfärer | Silica-baserade magnetiska pärlor |
| Partikelstorlek | 45-165 µm | 200 nm |
| Kapacitet | >20 mg hIgG/ml harts | >0,7 mg hIgG/ml magnetiska pärlor |
| Fördelar | Lätt att använda, ingen extrautrustning krävs | Enkel operation |
| Stor porstorlek, stark bindningskraft | Liten diameter, bra kinetik | |
| Högt utbyte av målprotein | Slät yta, minimal pärla adsorption, låg bakgrund, mindre antikroppsförbrukning | |
| Nackdelar | Porös och benägen för adsorption (förrensning krävs) | Bekväm att använda med ett magnetställ |
Produktapplikationer
1. Rening av antikroppar
Isolera antikroppar med hög renhet från serum eller ascites i ett enda steg.
2. Immunfällning (IP)
Berika specifikt proteins att studera dess egenskaper (som post-translationella modifieringar).
3. Co-immunoprecipitation (Co-IP)
Berika mål protein till undersöka andra proteiner som binder till det (dvs protein-protein-interaktioner, proteinkomplex, etc.).
Operationsprocedur
Testdata
1. Rening av antikroppar från kaninserum med hjälp av rProtein A/G Agaros Harts.
 | M: Proteinmarkör L: Råprov före kolumn elu: Eluering |
Figur 1. Elektrofores resultat av antikroppsrening med användning av rProtein A/G Agaros Harts.
2. Antikroppskonjugationsexperiment med Protein A/G Magbeads
 | 1: NC 2: Yeasen Protein A/G Magbeads 3: Yeasen Protein A/G Magbeads 4: Konkurrent |
Figur 2. Yeasen Protein A/G Magbeads överträffade Konkurrent magnetiska pärlor.
3. Användning av Protein A/G Magbeads för IP
 |
Målprotein 1: NC 2: Yeasen Protein A/G Magbeads 3: Yeasen Protein A/G Magbeads 4: Konkurrent |
Figur 3. Yeasen Protein A/G Magbeads överträffade Konkurrent magnetiska pärlor.
4. Användning av Protein A/G Magbeads för Co-IP: Specifika antikroppar mot p65 och cyklinberoende kinas 9 (CDK9) används för immunoutfällningsanalys av extraherat totalt cellulärt protein.
Figur 4. Immunutfällningsmedel utsattes sedan för western blot-analys med användning av specifika antikroppar mot CDK9 och p65.
Produktinformation
| Produktnamn | Produktnummer | Specifikation |
| Protein A/G Magbeads | 1 ml/5 ml | |
| rProtein A/G Agaros Harts | 36403ES08/25/60 | 5 ml/25 ml/100 ml |
Relaterade produkter
| Produktnamn | Produktnummer | Specifikation |
| SuRi rProtein A Agaros Harts | 5 ml/25 ml/100 ml | |
| rProtein G Agaros Harts | 36405ES08/25/60 | 5 ml/25 ml/100 ml |