Inom området för biomedicinsk forskning är proteinrening en nyckelteknologi för att utforska livets mysterier. Men traditionella reningsmetoder kämpar med ineffektivitet och höga kostnader - särskilt för membranproteiner, som är i fokus för strukturbiologiforskningen. Dessa proteiner är strukturellt komplexa, har låga uttrycksnivåer i cellmembran och är känsliga för miljöförhållanden, vilket gör deras rening särskilt svår. Nu har Yeasen Biotech, med sin enastående FoU-kapacitet, lanserat den uppgraderade Anti-DYKDDDDK(Flag) Affinity Gel (Katt#20584ES), ett kraftfullt verktyg för effektiv och bekväm proteinrening, även för utmanande membranproteiner.
Produktens prestanda
1. Hög specificitet och hög bindningskapacitet: Viktiga fördelar för målproteininfångning
Yeasen Anti-DYKDDDDK(Flag) Affinity Gel (Katt#20584ES) framställs genom kovalent koppling av högkvalitativa mus IgG2b monoklonala antikroppar med 4% högt tvärbunden agarosgel. Denna unika tillverkningsprocess ger produkten extremt hög specificitet, vilket gör det möjligt för den att exakt känna igen och binda fusionsproteiner med Flag-taggen. Om det är det N-terminala Flag-fusionsproteinet modifierat av Met (Met-Flagga-Protein), det N-terminala flaggfusionsproteinet (Flagg-protein), eller det C-terminala Flag-fusionsproteinet (Protein-Flagga), kan gelén hantera dem med lätthet.
Vid membranproteinrening är denna specificitet särskilt viktig eftersom dessa proteiner är strukturellt komplexa och benägna att binda ospecifikt med andra proteiner. Den höga specificiteten hos Flag-gelen reducerar effektivt störningar från ospecifika proteiner, vilket säkerställer hög renhet hos de renade membranproteinerna. Dessutom har gelén en hög bindningskapacitet för flaggmärkta fusionsproteiner (minst 1,1 mg protein/ml gel). Detta innebär att även om målproteinet uttrycks vid låga nivåer, kan det fortfarande effektivt fångas upp och renas med hjälp av Flag-gelen.
2. Hög renhet och hög avkastning: Möjliggör nedströmsapplikationer
Yeasen Anti-DYKDDDDK(Flag) Affinity Gel (Katt#20584ES) har minimal ospecifik bindning av föroreningar, vilket resulterar i mycket rena proteinprover efter rening. Detta är avgörande för nedströmsapplikationer som bioaktivitetsanalyser och strukturanalys. Proteinprover med hög renhet ger mer exakta experimentella data, vilket lägger en solid grund för forskarnas studier.
3. Optimerat experimentellt arbetsflöde: Förenkla utmaningar med proteinrening
Proteinrening måste utföras under milda förhållanden för att undvika strukturella skador på proteinerna, särskilt för komplexa membranproteiner. Yeasen Anti-DYKDDDDK(Flag) Affinity Gel (Katt#20584ES) är utformad med detta i åtanke. Dess lagringsbuffert är TBS innehållande 50% glycerol vid pH 7.4, som inte bara skyddar gelens aktivitet utan också ger en skonsam miljö för proteinrening.
Reningsprocessen med Flag gelen är enkel och effektiv. För att underlätta användningen av 1×Flag-peptideluering innehåller produktpaketet en gratis 1×Flag-peptid (Cat#20572ES). Detta gör elueringsprocessen skonsam (med nästan inga skador på proteinerna) och mycket bekväm (förbättrar ytterligare lättheten att experimentera).
4. Flera storlekar och flexibla fraktalternativ: Möter olika experimentella behov
Med tanke på de varierande skalorna och behoven hos olika laboratorier erbjuder Yeasen Flag-gelen i flera storlekar, inklusive 1 ml, 5 ml, 25 ml och 100 ml. Oavsett om det gäller småskalig preliminär prospektering eller storskalig proteinproduktion, finns det ett lämpligt alternativ. För årliga köp av stora volymer kan kunderna välja att ta emot försändelser i omgångar, vilket gör att de kan dra nytta av prisrabatter samtidigt som de undviker trycket från alltför stort lager.
Testdata
 | M: Proteinmarkör 1: Förkolumn råprov av Flag-N/Flag-M/Flag-C-protein 2: Post-kolonngenomströmning av Flag-N/Flag-M/Flag-C-protein 3: Eluering (pH 2,7 eluering) 4: Eluering (pH 12 eluering) 5: Eluering (1×Flaggpeptideluering) 6: Renad gel (pH 2,7 eluering) 7: Renad gel (pH 12 eluering) 8: Renad gel (1×Flaggpeptideluering) a:Flagga-N b:Flagga-M c:Flagga-C |
Figur 1. Yeasen Anti-DYKDDDDK(Flag) Affinity Gel reningsresultat för låguttryckande proteiner (Flag-N (a), Flag-M (b), Flag-C (c)) som visas i SDS-PAGE.
 | M: Proteinmarkör 1: Förkolumn råprov av Flag-C-protein 2: Post-kolonngenomströmning av Flag-C protein 3: Eluering (pH 2,7 eluering) 4: Eluering (pH 12 eluering) 5: Eluering (1×Flaggpeptideluering) 6: Renad gel (pH 2.7 eluering) 7: Renad gel (pH 12 eluering) 8: Renad gel (1×Flaggpeptideluering) a:Yeasen b:Varumärke S* c:Märke G* |
Figur 2. Jämförelse av Yeasen (a) medBrand S* (b) och Brand G* (c) Anti-Flag-geler vid rening av låguttryckande proteiner (t.ex. membranproteiner) som visas i SDS-PAGE.
Slutsatser:
1. Yeasen Anti-DYKDDDDK(Flag) Affinity Gel (Katt#20584ES) har hög specificitet och kan binda till Flag-taggar i olika positioner (N-terminal Flag-fusionsproteiner, Met-modifierade N-terminal Flag-fusionsproteiner, C-terminal Flag-fusionsproteiner).
2. Under förhållanden med extremt lågt målproteinuttryck (t.ex. membranproteiner), Yeasen Anti-DYKDDDDK(Flag) Affinity Gel (Cat#20584ES) uppnår betydligt högre avkastning och renhet jämfört med konkurrenterna. Användningen av Yeasen gratis 1×Flaggpeptid (Cat#20572ES) för eluering ger ännu bättre resultat.
Kompletta lösningar för flaggmärkta fusionsproteiner:
Rekombinant enterokinas (Katt#20395ES): Ett specifikt proteas som klyver karboxyländen av lysin föregås av fyra asparaginsyror: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys. Denna sekvens är en del av oktapeptidflaggan (DYKDDDDK). Rekombinant Enterokinas (rEK) kan enkelt ta bort Flag-taggen från fusionsproteiner, vilket gör det till ett idealiskt verktyg för att studera strukturen och funktionen hos naturliga proteiner.
Anti-DYKDDDDK(Flagga) MagBeads (Katt#20565ES): Polymermagnetiska mikrosfärer framställda genom kovalent koppling av högkvalitativa mus anti-DYKDDDDK (Flagga) monoklonala antikroppar med kiseldioxidbaserade magnetiska pärlor (diameter av 200 nm). Dessa pärlor är lämpliga för immunoutfällning (IP) eller samimmunoutfällning (Co-IP) av proteiner med Flag-taggen.
Produktinformation
| Produktnamn | Produktnummer | Specifikation |
| 1 ml/5 ml/25 ml | ||
| Rekombinant bovint enterokinas, His, uttryckt i jäst | 100 U/500 U/5000 U | |
| Anti-DYKDDDDK(Flagga) MagBeads | 1 ml/5 ml |