Yeasen UCF. Me ® Ultranuclease - ditt bästa val för att förnedra nukleinsyror

1. Vad är totipotent nukleas?
2. Vilka är användningsscenarierna för totipotent nukleas?
3. Vilka är fördelarna som totipotent nukleas behöver ha?
4. Vanliga frågor
5. Relaterade produkter

1. Vad är totipotent nukleas?

Totipotenta nukleaser är genetiskt modifierade endonukleaser med förmågan att bryta ned ett brett spektrum av nukleinsyraformer, innefattande enkelsträngade, dubbelsträngade, linjära, nativa och denaturerade nukleinsyror. De genererar 5'-monofosfat-oligonukleotider med längder som sträcker sig från 3 till 5 baser och uppvisar ingen specifik basigenkänning. Dessa mångsidiga nukleaser uppvisar robust stabilitet och nedbrytningsaktivitet över olika förhållanden, vilket gör dem mycket effektiva för att eliminera nukleinsyrarester i prover eller produkter. Detta förbättrar provets renhet och produkternas biologiska effektivitet, vilket gör totipotenta nukleaser det föredragna enzympreparatet för vetenskaplig forskning, vacciner och industrier som protein- och polysackaridläkemedel.

Dessutom spelar totipotenta nukleaser en avgörande roll i avlägsnandet av nukleinsyror under beredningen av vacciner, antikroppar, cellterapi och andra biologiska produkter, vilket säkerställer överensstämmelse med FDA-föreskrifter som föreskriver att kvarvarande nukleinsyra i slutprodukten för terapeutisk användning inte får överstiga 10 pg/dos. Genom att bryta ner nukleinsyror minskar totipotenta nukleaser cellysatens viskositet, vilket underlättar lösningsfiltrering/ultrafiltreringsprocessen under reningen av cellhärledda partiklar såsom virus, AAV-vektorer och inklusionskroppar. Detta effektiviserar bearbetningen, förbättrar centrifugeringen, förbättrar separationseffektiviteten för utfällning och supernatant, och ökar effektiviteten av kromatografisk rening, vilket i slutändan ökar utbytet och produktens renhet.

2. Vilka är användningsscenarierna för totipotent nukleas?

UltraNuclease har ett brett utbud av applikationer och här är de specifika användningsscenarierna.

2.1 Virusrening (lentivirus, AAV, rekombinant adenovirusvaccin, inaktiverat virus, onkolytiskt virus, etc.)

Användningen av virus inom den biomedicinska sektorn expanderar avsevärt och spänner över applikationer som vacciner, cellterapi, genterapi och flera andra områden. Värdceller ansvariga för virusproduktion är övervägande kontinuerliga passageceller (CCL). CCLs uppvisar en genetisk predisposition för oreglerad tillväxt, vilket ger dem förmågan att föröka sig på obestämd tid. Däremot kan närvaron av kvarvarande DNA från CCL utgöra potentiella risker, såsom okontrollerad mänsklig cellproliferation som leder till tumörbildning. Dessutom kan dessa kvarvarande DNA-fragment innehålla infektiösa virala genom, vilket ger upphov till oro för infektionsrisk vid sidan av tumörbildning. Följaktligen är stränga kontrollåtgärder absolut nödvändiga för att hantera resterande DNA i biologiska produkter, för att säkerställa deras säkerhet. I detta avseende, vår UCF.ME™ UltraNuclease erbjuder en säker lösning för virusrening.

Salt spelar en avgörande roll för att mildra protein- eller virusaggregation, vilket underlättar separationen av DNA och RNA från proteiner och andra cellulära komponenter. Salt Active UltraNuclease, som är ett ospecifikt endonukleas, uppvisar optimal aktivitet vid höga saltkoncentrationer. Under förhållanden med hög salthalt får enzymer bättre tillgång till frisatt DNA och RNA, vilket förbättrar deras nedbrytning. Nukleaser med förhöjd aktivitet i miljöer med hög salthalt visar sig vara mer effektiva för att förbättra reningsprocesser. Salt Active UltraNuclease kan användas för att minska viskositeten i cellsupernatanter och lysat, vilket förbättrar reningseffektiviteten under höga saltförhållanden. Detta enzym reducerar också värdnukleinsyrarester till pikogramnivån, vilket förbättrar prestandan och säkerheten för olika biologiska produktapplikationer, inklusive virusrening, vaccintillverkning och produktion av protein- och polysackaridläkemedel.

2.2 Rening av det rekombinanta proteinet uttryckt i E. coli

Vissa proteiner som uttrycks i E. coli har en tendens att aggregera till inklusionskroppar, vilket komplicerar reningsprocessen eftersom de ofta blir sammanflätade med värd-DNA. De resulterande sprängda bakteriecellerna kan uppvisa hög viskositet, vilket avsevärt minskar proteinreningseffektiviteten. Genom att introducera 10-50 U/mL UCF.ME™UltraNuclease i bakterielösningen under ultraljudsavbrott och inkubera provet vid antingen 37°C i 30 minuter eller 4°C över natten efter avbrottet kan viskositeten i bakterielösningen reduceras effektivt. Detta i sin tur ökar avsevärt effektiviteten av reningsprocessen. Sammanfattningsvis kan du lita på vår UCF.ME™ UltraNuclease för att underlätta effektiv rening av proteinet.

2.3 Förhindra cellklumpning

Under de senaste åren har användningen av kryokonserverade perifera mononukleära blodceller (PBMC) i immunanalyser ökat dramatiskt. Det största kännetecknet för PBMC-celler är att de är mycket lätta att klumpa ihop sig efter återupplivning, vilket lätt kan leda till låg cellkvalitet och opålitliga testresultat. När cellerna återupplivas tillsätts lämplig koncentration (25-50 U/mL) av UCF.ME™UltraNuclease till odlingsmediet och cellerna samodlas, vilket effektivt kan förhindra cellklumpning. Därför kan du få ut det mesta av vår UCF.ME™ UltraNuclease för att öka oddsen för ett framgångsrikt resultat.

3. Vilka är fördelarna som totipotent nukleas behöver ha?

3.1 Brett utbud av applikationer

UCF.ME™ UltraNuclease kan skära och bryta ned olika former av DNA och RNA under en mängd olika experimentella förhållanden och kan appliceras för att avlägsna resterande nukleinsyra i olika biologiska produkter.

3.2 Hög renhet, hög enzymaktivitet

För vårt UCF.ME™ UltraNuclease är dess enzymrenhet större eller lika med 99 % (HPLC), och dess enzymaktivitet är större eller lika med 1,5*106 U/mg (med en absolut kvantitativ metod för allmänt substrat).

3.3 Stark anpassningsförmåga

UCF.ME™ UltraNuclease har hög stabilitet vid lagring och frys-upptining. Vi lagrar UCF.ME™ UltraNuclease vid -20 °C, 4 °C och 37 °C för att upptäcka trenden av enzymaktivitet. När den placerades vid 37 °C i 2 veckor fanns det ingen signifikant förändring i enzymaktivitet.Under tiden, för att säkerställa enzymets stabilitet, använder vi en kombination av torris + ispåse för att transport UCF.ME™ UltraNuclease till din plats. Den har också stark tolerans och kan anpassa sig till en mängd olika driftsförhållanden.

3.4 Följ farmakopén

UCF.ME™ UltraNuclease tillverkas i UCF.ME (Ultra Clean Factory. Molecular Enzyme) är ett slags ultrarent enzym. Vad är ett ultrarent enzym? Det är ett molekylärt enzym som uppnår kvalitetsstandarder för ingen HCD、HCR、HCP, DNASE FRI、RNASE FRI, inga proteasrester, inga mikrobiella rester, inga patogener, animaliskt ursprung, antibiotikaföroreningar, ultralågt endotoxinrester, hög enzymaktivitet och hög renhet, etc. Därför kan du på ett säkert sätt och lita på våra produkter.

3,5 GMP produktion

Hela processen för UltraNuclease-produktion slutförs i GMP-produktionsverkstaden, och kvalitetsinspektionsplanen är strikt av farmakopé metod för att möta den storskaliga efterfrågan från forskning och utveckling till produktion.

UCF.ME™ UltraNucleases partner —— UltraNuclease ELISA-kit
I normala reningssteg, UCF.ME™ UltraNuclease tas lätt bort som en förorening.  För att detektera rester av UCF.ME™ UltraNuclease, YEASEN har utvecklat det stödjande UltraNuclease ELISA-kit, som exakt kan detektera rester av UCF.ME™ UltraNuclease i provet. Satsen har utmärkt linjäritet, repeterbarhet, återhämtningshastighet och specificitet.

UltraNuclease ELISA kit

Det linjära området är mellan 0,047 och 3 ng/ml, och R2 är större än 0,99. med god inter-batch-reproducerbarhet lägger vi till en fast koncentration av UltraNuclease till provet och använder 3 olika batcher av ELISA-kit för detektion. Detektionsåtervinningsgraden är mellan 70 % och 110 % när nukleaskoncentrationen är mellan 3 och 0,186 ng/ml och CV är mindre än 10 %. Dessutom är de simulerade provåtervinningshastigheterna för UltraNuclease med olika koncentrationer alla mellan 70 % och 130 % och är bättre än andra märken. Det har också stark specificitet att vi utvärderade den icke-specifika bindningen av UltraNuclease-antikroppen till 8 vanliga prover. Resultaten från interferensgruppen och kontrollgruppen överlappade varandra, och ingen interferens sågs.

Efter UltraNucleases DMF-ansökan har YEASEN erhållit DMFs av saltaktivt ultranukleas från USA:s FDA.

4. Vanliga frågor

F1: I vilket steg ska man lägga till UltraNuclease?

S: Det beror på proverna du har att göra med. Vid virusrening tillsätts det vanligtvis efter virusklarning; vid E. coli-proteinrening kan det tillsättas när cellerna lyseras; vid hantering av cellklumpning kan den tillsättas direkt till mediet för samodling med celler.

Q2: Om reaktionstemperaturen inte kan nå 37°C, hur använder man den?

A: Enzymaktiviteten hos UltraNuclease påverkas av temperatur, behandlingstid och enzymaktivitetsenheter. Om temperaturen inte kan nå 37°C kan mängden enzym tillsättas på lämpligt sätt, eller så kan inkubationstiden förlängas.

F3: Är UltraNuclease kompatibel med proteashämmare?

A: Kompatibel, men var medveten om att många proteashämmare innehåller EDTA. När EDTA börjar bli högre än 1 mM kommer EDTA att hämma aktiviteten hos vissa nukleaser.

F4: Hur tar man bort UltraNuclease?

A: Det kan avlägsnas med metoder som TFF, dialys och kromatografiska kolonner.

F5: Kan UltraNuclease ELISA-kitet användas för att detektera andra märken av totipotenta nukleasrester?

A: Vi rekommenderar inte att du gör detta. ELISA-kitet är helt utvecklat baserat på UltraNuclease och kan exakt kvantifiera UltraNuclease. Altipotenta nukleaser av andra märken kan skilja sig från UltraNuclease när det gäller sekvens och produktionsprocess, och testresultaten kan vara felaktiga.

5. Relaterade produkter

Produkterna som tillhandahålls av Yeasen är följande.

Tabell 1 Relaterade produkter

Produktnamn	SKU	Specifikationer
UCF.ME™ UltraNuclease GMP-kvalitet	20157ES25/60/80/90	25KU/100KU/1MU/5MU
UCF.ME™ Salt Active UltraNuclease GMP-kvalitet	20159ES25/60/80/90	25KU/100KU/1MU/5MU
UltraNuclease ELISA kit	36701ES59	96T
Salt aktiv UltraNuclease ELISA kit	36703ES96	96T