1.จะป้องกันไม่ให้ RNA เสื่อมสลายได้อย่างไร?

2. สารยับยั้ง RNase คืออะไร?

3. สารยับยั้ง RNase ทำหน้าที่อะไร?

4. สารยับยั้ง Murine RNase มีคุณสมบัติอย่างไร?

5. ผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้องและประสิทธิภาพ

6. สินค้าที่เกี่ยวข้อง

7. คำถามที่พบบ่อย

1.จะป้องกันไม่ให้ RNA เสื่อมสลายได้อย่างไร?

RNase มีบทบาทสำคัญในกระบวนการเผาผลาญกรดนิวคลีอิกและพบได้ในโพรคาริโอตและยูคาริโอตเกือบทุกประเภท RNase ถูกหลั่งออกมาในของเหลวในร่างกาย เช่น น้ำตา น้ำลาย และเหงื่อ เพื่อป้องกันการบุกรุกของจุลินทรีย์ และ RNase ยังพบอยู่ในเศษผิวหนังด้วย อย่างไรก็ตาม แหล่งหลักของ RNase ในสภาพแวดล้อมส่วนใหญ่คือจุลินทรีย์ ได้แก่ แบคทีเรียและเชื้อรา RNase เป็นเอนไซม์ที่ยากต่อการทำให้ไม่ทำงานและมีเสถียรภาพสูง ทนความร้อน ทนกรด และทนด่าง หลังจากผ่านกระบวนการเปลี่ยนสภาพด้วยความร้อนแล้ว RNase จะสามารถกลับคืนสู่โครงสร้างเดิมได้อย่างรวดเร็ว RNase มักจะทำงานได้อย่างมีประสิทธิภาพและกระจายตัวอย่างกว้างขวางในเซลล์และเนื้อเยื่อของทั้งยูคาริโอตและโพรคาริโอต RNA ในตัวอย่างสามารถย่อยสลายได้อย่างสมบูรณ์โดยมีการปนเปื้อนของ RNase เพียงเล็กน้อย การปนเปื้อนของ RNase ในการศึกษาวิจัยสามารถเกิดขึ้นได้ทั้งจากแหล่งภายในและภายนอก RNase ในเซลล์เป็นแหล่งกำเนิดการปนเปื้อนภายในเป็นหลัก ในขณะที่แหล่งภายนอกได้แก่ อุปกรณ์ในการทดลอง สภาพแวดล้อมในห้องปฏิบัติการ และตัวผู้ทดลองเอง RNases โดยเฉพาะอย่างยิ่งสมาชิกของตระกูล RNase A เป็นโปรตีนขนาดเล็กและกะทัดรัดที่มีกรดอะมิโนซิสเตอีนเพียงเล็กน้อยที่สามารถสร้างพันธะไดซัลไฟด์ภายในโมเลกุลได้หลายพันธะ เมื่อกลับสู่อุณหภูมิห้อง หากไม่มีสารก่อการเสื่อมสภาพ RNase ที่เสื่อมสภาพจะฟื้นฟูโครงสร้างตามธรรมชาติและหน้าที่บางอย่าง ดังนั้น RNases จึงยังคงทำงานได้อย่างมีประสิทธิภาพหลังจากผ่านการแช่แข็งและละลายซ้ำหลายครั้ง แม้ว่าจะผ่านการนึ่งฆ่าเชื้อแล้วก็ตาม ลักษณะที่เสถียรของเอนไซม์เหล่านี้ทำให้ทนต่อวิธีการขจัดสารปนเปื้อนหลายวิธี ซึ่งโดยปกติแล้วต้องใช้วิธีการทางเคมีที่รุนแรงเพื่อกำจัด RNases ออกจากพื้นผิวและสารละลาย

เพื่อหลีกเลี่ยงการเสื่อมสภาพของ RNA ที่เปราะบาง ต้องใช้ความระมัดระวังเป็นพิเศษเมื่อทำงานกับ RNA เพื่อควบคุม RNase จากภายนอก ผู้ปฏิบัติงานต้องสวมถุงมือระหว่างการทดลอง และเปลี่ยนถุงมือหลังจากสัมผัสผิวหนัง มือจับประตู และพื้นผิวของวัตถุทั่วไป และผู้ปฏิบัติงานต้องใช้ปืนปิเปตพิเศษสำหรับการดำเนินการ RNA และใช้หัววัดแบบติดผนังที่ปราศจาก RNase หลอดเหวี่ยง สารประกอบ และสารเคมี หลีกเลี่ยงหรือปิดรูระบายอากาศและหน้าต่างที่เปิดอยู่ และใช้บริเวณที่เคลื่อนตัวน้อยเป็นบริเวณที่ปราศจาก RNase และในระหว่างการสกัดและวิเคราะห์ RNA อย่าทำการทดลองอื่น ๆ ที่อาจทำให้เกิดการปนเปื้อนของ RNase
วิธีการยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ RNase ในร่างกายคือการรักษาตัวอย่างก่อน หลังจากเก็บตัวอย่างเนื้อเยื่อแล้ว ไม่ควรสกัด RNA โดยตรง แต่ควรแช่แข็งและเก็บไว้ในอุณหภูมิ -80°C พร้อมไนโตรเจนเหลวทันที และควรดำเนินการทดลองโดยเร็วที่สุดเพื่อลดการย่อยสลายของ RNAสารยับยั้ง RNase จะถูกเติมเข้าไปในไลเสทเซลล์เพื่อทำลายเซลล์และทำให้ RNase ไม่ทำงานในเวลาเดียวกัน โดยลดการทำงานของ RNase ที่ถูกปล่อยออกมาในระหว่างการทำลายเซลล์ให้เหลือน้อยที่สุด สารเคมีและอุปกรณ์ทั้งหมดจะต้องได้รับการบำบัดเป็นพิเศษเพื่อทำให้ RNases ไม่ทำงานก่อนใช้งาน

นอกจากนี้สารยับยั้ง RNA ยังสามารถใช้เพื่อยับยั้งกิจกรรมของ RNase และป้องกันการย่อยสลาย RNA ของ RNase ได้ สารยับยั้ง RNA มีหลายประเภท:

• ไดเอทิลไพโรคาร์บอเนต (DEPC): เป็นสารยับยั้ง RNase ที่มีฤทธิ์แรงแต่ไม่สมบูรณ์ โดยจะเปลี่ยนสภาพโปรตีนผ่านการรวมตัวของวงแหวนอิมิดาโซลของฮีสทิดีนในกลุ่มยีนที่ทำงานอยู่ของ RNase จึงยับยั้งการทำงานของเอนไซม์
• กัวนิดีนไอโซไทโอไซยาเนต: ปัจจุบันถือว่าเป็นสารยับยั้ง RNase ที่มีประสิทธิภาพสูงสุด โดยสามารถทำให้ RNase ไม่ทำงานในขณะที่สลายเนื้อเยื่อ ซึ่งสามารถทำลายโครงสร้างของเซลล์และแยกกรดนิวคลีอิกออกจากนิวคลีโอโปรตีน และยังมีผลต่อ RNase ในระดับหนึ่งอีกด้วย ผลการทำลายโครงสร้างของ RNase ที่แข็งแกร่ง
• สารเชิงซ้อนวาเนดิลไรโบนิวคลีโอไซด์: สารเชิงซ้อนที่ก่อตัวจากไอออนของวาเนเดียมออกไซด์และนิวคลีโอไซด์ ซึ่งสามารถรวมตัวกับ RNase เพื่อสร้างอนาล็อกทรานสิชั่น โดยยับยั้งกิจกรรมของ RNase ได้เกือบสมบูรณ์
• สารยับยั้งโปรตีนของ RNase (RNasin): ไกลโคโปรตีนที่เป็นกรดที่สกัดจากตับหนูหรือจานทดลองของมนุษย์ RNasin เป็นสารยับยั้ง RNase แบบไม่แข่งขัน ซึ่งสามารถจับกับ RNases ได้หลากหลายชนิด ทำให้ไม่ทำงาน
• อื่นๆ: SDS, ยูเรีย, ดินไดอะตอม ฯลฯ ยังมีผลยับยั้ง RNase ในระดับหนึ่งอีกด้วย

2. สารยับยั้ง RNase คืออะไร?

สารยับยั้ง RNase เป็นสารประเภทหนึ่งที่สามารถยับยั้งกิจกรรมของ RNase สารยับยั้ง RNase ทั่วไป ได้แก่ ไดเอทิลไพโรคาร์บอเนต (DEPC), กัวนิดีนไอโซไทโอไซยาเนต, คอมเพล็กซ์ไรโบนิวคลีโอไซด์วาเนดิล (RVC) และสารยับยั้งโปรตีนของ RNase (RNasin) ในจำนวนนี้ DEPC และกัวนิดีนไอโซไทโอไซยาเนตมีความเป็นพิษในระดับหนึ่ง และ RVC มีผลยับยั้ง PCR โพลิเมอเรส ซึ่งไม่เอื้อต่อการทดลองในภายหลัง RNasin ไม่เป็นพิษและเป็นสารยับยั้ง RNase แบบไม่แข่งขัน ซึ่งสามารถจับกับ RNase ต่างๆ เพื่อทำให้ RNase ไม่ทำงาน

3. สารยับยั้ง RNase ทำหน้าที่อะไร?

สารยับยั้ง RNase มักใช้เป็นมาตรการป้องกันในการจัดการ RNA ด้วยเอนไซม์เพื่อยับยั้งและควบคุมสารปนเปื้อนดังกล่าว RNasin เป็นไกลโคโปรตีนที่มีกรดซึ่งสกัดมาจากตับหนูหรือบลาสโตเดิร์มของมนุษย์ ซึ่งสามารถจับกับ RNase โดยเฉพาะในลักษณะที่ไม่เป็นโควาเลนต์เพื่อสร้างสารเชิงซ้อน ส่งผลให้ RNase ไม่ทำงาน จึงปกป้องความสมบูรณ์ของ RNA ในปัจจุบัน สารยับยั้ง RNase ช่วยป้องกันการสลายตัวของ RNA ในแอปพลิเคชันต่างๆ เช่น การสังเคราะห์ cDNA, RT-PCR, ปฏิกิริยาการถอดรหัส/การแปลในหลอดทดลอง หรือการทำให้ RNA บริสุทธิ์

4. สารยับยั้ง Murine RNase มีคุณสมบัติอย่างไร?

สารยับยั้ง RNase ของหนูแบบรีคอมบิแนนท์ไม่มีซิสเตอีนที่ไวต่อออกซิเดชัน 2 ชนิดที่มีอยู่ในสารยับยั้ง RNase ที่มีต้นกำเนิดจากมนุษย์ ดังนั้น สารยับยั้ง RNase ของหนูจึงมีฤทธิ์ต้านออกซิเดชันสูง และมีเสถียรภาพมากกว่าสำหรับการทดลอง DTT ต่ำ นอกจากนี้ สารยับยั้ง RNase ของหนู Yeasen มีคุณสมบัติดังนี้:
1) การยับยั้ง RNase รอบด้าน: สารยับยั้ง RNase ในหนูของ Yeasen โดยเฉพาะอย่างยิ่งยับยั้ง RNase A, RNase B, RNase C และอื่นๆ
2) สภาวะปฏิกิริยาที่หลากหลาย: สารยับยั้ง RNase จะออกฤทธิ์ที่ pH 5.0-9.0 และ 25℃-55℃ ซึ่งเหมาะกับเอนไซม์ทรานสคริพเทสย้อนกลับที่ทนความร้อน
3) สามารถทำการทดลองปลายทางได้หลายครั้ง: ไม่พบการยับยั้งกิจกรรมของโพลีเมอเรสเมื่อใช้ RNase Inhibitor ร่วมกับ Taq DNA Polymerase, AMV หรือ M-MuLV Reverse Transcriptase หรือ Phage RNA Polymerases (SP6, T7 หรือ T3)
4) สินค้าผลิตจำนวนมาก: กำลังการผลิต 2 พันล้านหน่วยมีประโยชน์ต่อการจัดการต้นทุนโดยรับประกันความเป็นเนื้อเดียวกันของผลิตภัณฑ์ ความเสถียรของการจัดหา และความตรงเวลา
5) ความสม่ำเสมอจากชุดต่อชุด: แพลตฟอร์มการแสดงออกของโปรตีนที่สมบูรณ์และการทำให้บริสุทธิ์โดยระบบการจัดการคุณภาพ ISO13485 การทดสอบการควบคุมคุณภาพโดยข้อกำหนดคุณภาพเพื่อให้แน่ใจถึงความเสถียรของผลิตภัณฑ์ระหว่างชุด

5. ผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้องและประสิทธิภาพ

A. สารยับยั้ง RNase ขัดขวางกิจกรรมของ RNase

RNA ทั้งหมดของเซลล์ HEK 1μg, สารยับยั้ง RNase 1μL สามารถยับยั้ง RNase 5ng ได้อย่างมีประสิทธิภาพ

รูปที่ 1 ผลการยับยั้งของสารยับยั้ง Murine RNase

B. RNase Inhibitor เหนือกว่าผลิตภัณฑ์ต่างประเทศในการทดสอบ qPCR

ผลกระทบการยับยั้งของ Yeasen และสารยับยั้ง RNase ที่ได้จากเมาส์ของบริษัท R* (MRI) ได้รับการวัดโดยใช้เทคนิค qPCR ภายใต้สถานการณ์การทดลองที่เหมือนกัน และสารยับยั้ง RNase ของบริษัท Yeasen แหล่งของหนูสามารถยับยั้ง RNase A ในระบบได้อย่างมีประสิทธิภาพ ผลกระทบจากการยับยั้งนั้นเหนือกว่าของคู่แข่ง

รูปที่ 2 การทดสอบการยับยั้ง RNase ด้วย R* MRI

หมายเหตุ: เส้นโค้งในรูปจากซ้ายไปขวาคือ ตัวควบคุมเชิงบวก (RNA เท่านั้น ไม่มี RNase และ MRI), MRI 40 U, ​​MRI 30 U, MRI 20 U, MRI 10 U และตัวควบคุมเชิงลบ (RNA + RNase ไม่มี MRI)

รูปที่ 3. Yeasen การทดสอบการยับยั้ง RNase ด้วย MRI

หมายเหตุ: เส้นโค้งในรูปจากซ้ายไปขวาคือ: ตัวควบคุมเชิงบวก (RNA เท่านั้น ไม่มี RNase และ MRI), 80 U MRI, 60 U MRI, 40 U MRI, 30 U MRI, 20 U MRI, 10 U MRI, ตัวควบคุมเชิงลบ (RNA+RNase ไม่มี MRI)

รูปที่ 4 ผล CT ของ RT-qPCR ของ Yeasen MRI และ R* MRI

6. สินค้าที่เกี่ยวข้อง

สินค้าที่เกี่ยวข้องที่ Yeasen สามารถให้ได้ดังตารางที่ 1:

ตารางที่ 1.รายการสินค้า

7. คำถามที่พบบ่อย

คำถามที่ 1: จะมี RNase อยู่ในสารยับยั้ง RNase ของหนูหรือไม่?
A: รีเอเจนต์แต่ละตัวจะตรวจจับกิจกรรมของ RNase เพื่อให้แน่ใจว่าสารยับยั้ง RNase ในหนูจะไม่ก่อให้เกิดการปนเปื้อนของ RNase
คำถามที่ 2: สารยับยั้ง Murine RNase จะมีผลกระทบต่อการทดลอง PCR ขั้นปลายหรือไม่?
A: จะไม่มีผลใดๆ สารยับยั้ง Murine RNase แต่ละชุดจะไม่มีการปนเปื้อนจีโนมหลังจากการทดสอบคุณภาพ และอาจใช้ในการวิจัย RT-PCR และ RT-qPCR
คำถามที่ 3: สารยับยั้ง Murine RNase จะถูกทำให้ไม่ทำงานหรือไม่?
A: สารยับยั้งจะถูกทำให้ไม่ทำงานที่อุณหภูมิสูงกว่า 65°C และการกวนแรงๆ ก็จะทำให้สารยับยั้งไม่ทำงานได้เช่นกัน
คำถามที่ 4: ควรมีข้อควรระวังอะไรบ้างเมื่อใช้สารยับยั้ง Murine RNase ในการเตรียมระบบปฏิกิริยา?
ตอบ: เมื่อเตรียมระบบ จะต้องเติมสารยับยั้ง RNase ก่อนที่จะเติมส่วนประกอบอื่นๆ ที่อาจทำให้เกิดแหล่งปนเปื้อน RNase
คำถามที่ 5: สารยับยั้ง Murine RNase มีกิจกรรมของเอ็นโดนิวคลีเอสและเอ็กโซนิวคลีเอสหรือไม่?
ตอบ: ไม่มีกิจกรรมของเอนโดนิวคลีเอสและเอ็กโซนิวคลีเอสซึ่งช่วยปรับปรุงผลผลิตของผลิตภัณฑ์

ในส่วนของการอ่าน:

สารยับยั้ง RNase ในหนู —— กำจัดการปนเปื้อนของ RNase และรักษา RNA ได้สำเร็จ

การคัดเลือกทรานสคริปเทสย้อนกลับ

Yeasen UDG ที่ไม่เสถียรต่อความร้อน——ควบคุมมลพิษในละอองลอยได้อย่างง่ายดาย

วัตถุดิบขยายสัญญาณอุณหภูมิคงที่คุณภาพสูง ทำให้ RT-LAMP มีความไวและรวดเร็วมากขึ้น!