รีเวิร์สทรานสคริปเทส หรือที่เรียกอีกอย่างว่า RNA-dependent DNA polymerase เป็นเอนไซม์โพลีเมอเรสของ DNA ที่ถอดรหัส RNA สายเดี่ยวเป็น DNA ประสิทธิภาพของรีเวิร์สทรานสคริปเทสจะส่งผลโดยตรงต่อประสิทธิภาพขั้นสุดท้ายของรีเอเจนต์วินิจฉัยระดับโมเลกุล ในการตอบสนองต่อปัญหาของผู้ผลิตรีเอเจนต์วินิจฉัยระดับโมเลกุล Yeasen ได้ดำเนินการแปลงทิศทางบนทรานสคริพเทสย้อนกลับ ทรานสคริพเทสย้อนกลับมีประสิทธิภาพดีเยี่ยมและได้รับการตอบรับจากลูกค้าเป็นอย่างดี!

1. เอนไซม์รีเวิร์สทรานสคริพเทสมีหน้าที่อะไร
2. จะเลือกใช้ reverse transcriptase อย่างไร?
3. เหตุใดจึงควรเลือก Yeasenเอนไซม์ทรานสคริพเทสย้อนกลับคืออะไร?
4. ผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้องและประสิทธิภาพ
5. สินค้าที่เกี่ยวข้อง

1. เอนไซม์รีเวิร์สทรานสคริพเทสมีหน้าที่อะไร

รีเวิร์สทรานสคริปเทสเป็นดีเอ็นเอโพลีเมอเรสที่ขึ้นอยู่กับอาร์เอ็นเอ รีเวิร์สทรานสคริปเทสสามารถถอดรหัสอาร์เอ็นเอแม่แบบและสร้างดีเอ็นเอเสริม (cDNA) ได้ โดยดีเอ็นเอสายเดี่ยวจะถูกแปลงเป็นดีเอ็นเอสายคู่โดยใช้ดีเอ็นเอโพลีเมอเรส ดังนั้นรีเวิร์สทรานสคริปเทสจึงมักใช้เพื่อวัดระดับการสังเคราะห์ mRNA เมื่อใช้ร่วมกับเทคนิคปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสที่เรียกว่า RT-PCR การทดสอบ RT-PCR เชิงปริมาณมักใช้ในการวินิจฉัยโรค ดังนั้น รีเวิร์สทรานสคริปเทสจึงมีบทบาทสำคัญในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์และการนำไปใช้ในทางปฏิบัติ

2. จะเลือกใช้ reverse transcriptase อย่างไร?

เอนไซม์ทรานสคริพเทสย้อนกลับทั่วไปได้แก่ M-MLV และ AMV โดยที่ M-MLV นั้นดีกว่า AMV แต่เอนไซม์ RT ทั่วไปมีไซต์ที่ทำงานอยู่ 2 ไซต์ ไซต์หนึ่งทำหน้าที่ดำเนินกิจกรรมของพอลิเมอเรส และอีกไซต์หนึ่งทำหน้าที่ดำเนินกิจกรรมของไรโบนิวคลีเอส H RNase H เป็นเอนโดนิวคลีเอสที่สามารถย่อยสลายกลุ่ม RNA ของไฮบริด DNA-RNA ได้ ดังนั้น เอนไซม์ทรานสคริพเทสย้อนกลับที่ไม่มีกิจกรรมของ RNase H จึงเป็นประโยชน์ต่อการสังเคราะห์ cDNA นอกจากนี้ การใช้ RT เวอร์ชันที่ทนความร้อนยังเป็นประโยชน์ต่อการลดการขยายของกรดนิวคลีอิกที่ไม่จำเพาะและลดผลกระทบของโครงสร้างรองที่ซับซ้อนให้เหลือน้อยที่สุด

3. เหตุใดจึงควรเลือก Yeasenรีเวิร์สทรานสคริพเทส คืออะไร?

Yeasen ได้ดำเนินการปรับเปลี่ยนทิศทางบนรีเวิร์สทรานสคริปเทส ซึ่งขจัดกิจกรรมของ RNase H ออกไป จึงทำให้ความสามารถในการสังเคราะห์ cDNA ดีขึ้น โดยใช้เทคโนโลยีวิวัฒนาการโปรตีนเพื่อปรับปรุงความคงตัวทางความร้อนของการถอดรหัสย้อนกลับ

Yeasenเอนไซม์ทรานสคริพเทสย้อนกลับไม่เพียงแต่มีความสามารถในการสังเคราะห์ที่แข็งแกร่งเท่านั้น แต่ยังมีความสามารถในการทนทานที่แข็งแกร่งอีกด้วย นอกจากนี้ Yeasen มีข้อกำหนดที่เข้มงวดด้านคุณภาพ เป็นตัวเลือกที่ดีที่สุดสำหรับเอนไซม์ทรานสคริพเทสย้อนกลับ

4. ผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้องและประสิทธิภาพ

4.1 ทนทานต่ออุณหภูมิที่สูงถึง 65°C

โดยใช้ RNA ทั้งหมดของเซลล์ 293T จำนวน 500 นาโนกรัมเป็นแม่แบบ การถอดรหัสย้อนกลับดำเนินการที่อุณหภูมิ 42°C-65°C โดยใช้เอนไซม์ Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase ใช้ cDNA 1 μL เป็นแม่แบบเพื่อขยายยีน TFRC (4.4kb)

รูปที่ 1 ทำการถอดรหัสย้อนกลับที่อุณหภูมิ 42°C-65℃

4.2 เข้ากันได้กับเทมเพลตที่ซับซ้อน

อุณหภูมิปฏิกิริยา 55°C สามารถตอบสนองการถอดรหัสย้อนกลับของเทมเพลตทั่วไปและเทมเพลตโครงสร้างรองได้ และอุณหภูมิปฏิกิริยาของเทมเพลต GC สูงสามารถเพิ่มขึ้นได้อย่างเหมาะสมเป็น 65°C

รูปที่ 2.เหมาะสำหรับเทมเพลตที่อุดมไปด้วย GC และเทมเพลตโครงสร้างรอง

4.3 ประสิทธิภาพการขยายที่ยอดเยี่ยม

โดยใช้ RNA ทั้งหมด 500 นาโนกรัมของเซลล์ 293T เป็นเทมเพลตและ Oligo(dT) เป็นไพรเมอร์ cDNA ถูกสังเคราะห์โดยใช้ Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase ใช้ cDNA 1 μL เป็นเทมเพลตเพื่อขยาย 500bp ของ 5' ของยีน DY1C1N1 (19.9kb) ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่า Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase สามารถสังเคราะห์ cDNA ได้ถึง 19.8kb

รูปที่ 3 สามารถสังเคราะห์ cDNA ได้สูงสุด 19.8kb

4.4 การสังเคราะห์อย่างรวดเร็ว

การใช้ RNA ของเซลล์ 293T เป็นแม่แบบ จะดำเนินการถอดรหัสย้อนกลับตามขั้นตอนมาตรฐานในคู่มือ และกำหนดเวลาถอดรหัสย้อนกลับเป็น 5, 10, 15, 30, 45 และ 60 นาทีตามลำดับ เอนไซม์ Hifair™ III Reverse Transcriptase สามารถสังเคราะห์ cDNA ขนาด 6kb ได้ภายใน 5 นาที และความจำเพาะและผลผลิตนั้นเหนือกว่าของแบรนด์ V

รูปที่ 4 สามารถสังเคราะห์ cDNA ขนาด 6kb ได้ภายใน 5 นาที

4.5 ช่วงเชิงเส้นกว้าง

โดยใช้ RNA ทั้งหมด 5pg-5μg ของเซลล์ 293T เป็นเทมเพลต cDNA ได้รับการสังเคราะห์โดยใช้ Hifair™ III Reverse Transcriptase โดยใช้ cDNA 1 μL เป็นเทมเพลต และทำ qPCR กับยีนทั้งสี่ตัว และผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าประสิทธิภาพในการขยายพันธุ์ทั้งหมดอยู่ระหว่าง 98% ถึง 100.10% แสดงให้เห็นว่าสามารถสังเคราะห์ cDNA ได้อย่างมีประสิทธิภาพในช่วงเทมเพลตเชิงเส้นที่กว้าง

รูปที่ 5 สามารถสังเคราะห์ cDNA ได้อย่างมีประสิทธิภาพในช่วงเทมเพลตที่กว้าง

4.6 การควบคุมคุณภาพอย่างเข้มงวด

เพื่อให้มั่นใจถึงประสิทธิภาพการทำงานที่มั่นคงของ Yeasenเอนไซม์ย้อนกลับของ Yeasen ปฏิบัติตามข้อกำหนดอย่างเคร่งครัดในกระบวนการผลิตเพื่อรักษาเสถียรภาพของกระบวนการผลิตและรับรองความเสถียรของชุดการผลิต ในเวลาเดียวกัน การตรวจสอบคุณภาพได้รับการเสริมความแข็งแกร่งเพื่อตรวจจับสารตกค้าง เช่น เอ็กโซนิวคลีเอส นิคเคส RNase เป็นต้น ให้มั่นใจว่าไม่มีสารตกค้างเพื่อไม่ให้ส่งผลกระทบต่อการทดลองปลายน้ำ

รูปที่ 6 การตรวจจับสารตกค้าง

5. สินค้าที่เกี่ยวข้อง

ผลิตภัณฑ์ที่จัดทำโดย Yeasen มีดังนี้.

ตารางที่ 1. สินค้าที่เกี่ยวข้อง

เรื่องการอ่าน

แนวทางการคัดเลือกเอนไซม์ทรานสคริปเทสย้อนกลับ

Yeasen UDG: “ผู้เชี่ยวชาญการป้องกันการเกาะติด” ในปฏิกิริยา PCR