Hücre transfeksiyon reaktifleri, ökaryotik hücrelerde gen fonksiyonunu incelemek ve kontrol etmek için rutin reaktifler haline gelmiştir. Transfeksiyon reaktifleri, gen fonksiyonu araştırmalarında, gen ifadesi düzenlemesinde ve mutasyon analizinde, ayrıca gen terapisinde, hücre terapisinde, protein üretiminde ve aşı üretiminde yaygın olarak kullanılmaktadır. Peki transfeksiyon nedir? Ve deneylerinize dayanarak bir tür transfeksiyon reaktifi nasıl seçilir?

Transfeksiyonun çeşitleri nelerdir?

Yeasen'den transfeksiyon reaktiflerinin özellikleri

Deneylerinize dayanarak bir tür transfeksiyon reaktifi nasıl seçilir?

Uygulama durumu

Transfeksiyon koşulları için referans

SSS

Okumaya Bakın

Transfeksiyonun çeşitleri nelerdir?

Nükleik asidin transfeksiyondan sonra konak hücre kromozomuna entegre olup olmamasına göre "geçici" (geçici transfeksiyon) ve "stabil" (stabil transfeksiyon) olarak ayrılır. Farklı transfeksiyon yöntemlerinin transfeksiyon etkinliği, sitotoksisitesi, normal fizyoloji üzerindeki etkileri ve gen ekspresyon seviyeleri farklıdır. Prensipler, uygulamalar ve özellikler aşağıdaki tabloda karşılaştırılmıştır:

Tablo 1 Farklı transfeksiyon yöntemlerinin karşılaştırılması

Özellikleri Yeasen'den transfeksiyon reaktifleri

DNA transfeksiyon reaktifleri ve RNA transfeksiyon reaktifleri için Yeasen Biotechnology güçlü bir Ar-Ge ve üretim ekibine sahiptir, formülleri sürekli olarak optimize eder, üretim süreçlerini iyileştirir ve katyonik lipozomlar ve katyonik polimerlere dayalı çeşitli ürünler piyasaya sürmüştür. Bilimsel araştırma kurumları ve işletmeleri tam bir ürün yelpazesi sunar ve ürün yelpazesi transfeksiyon reaktifleriyle ilgili tüm alanları kapsar.

• Yüksek verimlilik: Hücre hatlarının geçici transfeksiyonu veya stabil transfeksiyonu için uygundur.
• Düşük toksisite: Transfekte edilen hücreler iyi canlılığını korur.
• Geniş adaptasyon yeteneği: Yaygın hücrelerin ve transfekte edilmesi zor birincil hücrelerin kapsamlı kapsamı.
• Kullanımı kolay: Transfeksiyon öncesi ve sonrasında ortamı değiştirmeden, serum varlığındaki ortamlar için uygundur.
• Maliyet etkin: Ekonomik ve pratik, yüksek transfeksiyon verimliliği, düşük fiyat.

Deneylerinize dayanarak bir tür transfeksiyon reaktifi nasıl seçilir?

Transfeksiyon reaktiflerinin seçimi, transfekte edilen maddeler, spesifik hücreler, operasyon kolaylığı ve diğer faktörler gibi farklı deneysel amaçlara ve deneysel içeriklere göre yapılmalıdır.

Uygulama durumu

Hieff Trans™ Lipozomal Transfeksiyon Reaktifi

Hieff Trans™ steril sıvı formda sağlanır. Genellikle, 24-kuyulu plaka transfeksiyonu için her seferinde yaklaşık 1,5 μL, 1 mL Hieff Trans™ yaklaşık 660 transfeksiyon yapılabilir; 6-kuyulu plaka için her seferinde yaklaşık 6 μL, 1 mL Hieff Trans™ yaklaşık 660 transfeksiyon yapabilir. 160 transfeksiyon;

Daha fazla ayrıntı için lütfen şuraya bakın: Hieff Trans™ Lipofektamin Reaktifi ile transfeksiyonda güven

Polietilenimin Doğrusal (PEI) MW40000 (hızlı lizis)

PEI 40000, negatif yüklü nükleik asit moleküllerine çok kolay bağlanan, bir kompleks oluşturan ve kompleksin hücrelere girmesine izin veren 40.000 moleküler ağırlığa sahip yüksek yüklü bir katyonik polimerdir. PEI 40000, HEK293 ve CHO gibi hücrelerde düşük sitotoksisite, yüksek transfeksiyon verimliliği ve yüksek gen ekspresyon verimliliğine sahip geçici bir transfeksiyon reaktifidir. Doğrusal PEI transfeksiyon reaktifleri, HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 ve Hela hücreleri dahil olmak üzere çok çeşitli hücre hatları için doğrulanmıştır. Transfeksiyon verimliliği %80~%90 kadar yüksektir.

Daha fazla ayrıntı için lütfen şuraya bakın: Transfeksiyon için yeni favori —— Linear PEI MW 40000, daha verimli bir transfeksiyon reaktifi

Hieff Trans™ in vitro siRNA/miRNA Transfeksiyon Reaktifi

Bu ürün, hedef dışı etkilerden kaçınarak, çok çeşitli hücre hatlarında 1 nM siRNA'nın %90'ın üzerinde ifade verimliliğine ulaşabilir. Hela, MCF-7, HepG2, CHO ve diğer yapışık hücreler dahil olmak üzere çeşitli hücrelerin transfeksiyonu için uygundur; ve K562 veya THP-1 hücreleri gibi transfekte edilmesi zor süspansiyon hücre hatları %80 susturma verimliliğine ulaşabilir; Bazı birincil hücreler, birincil insan fibroblastları ve birincil insan hepatositleri vb. dahil olmak üzere, %80 susturma verimliliğine ulaşılabilir.

Transfeksiyon koşulları için referans

Her ürün için talimatlara ek olarak, müşteriler kendi özel deneysel içeriklerine göre çalışırlar ve kullanım miktarında farklı farklılıklar olacaktır. Müşterilerin ürünü kullandıktan sonra bildirdikleri in vitro hücre transfeksiyon koşullarına göre, bunlar referansınız için sıralanmıştır.

SSS

1 Hieff Trans™ Lipozomal Transfeksiyon Reaktifi

1.1 S: Nükleik asit transfeksiyon reaktif kompleksleri hazırlanırken serum bulunabilir mi?

A: Serumun varlığı lipozomların oluşumunu etkileyecektir. Nükleik asit transfeksiyon reaktif kompleksleri hazırlanırken serumsuz bir ortam (genellikle MEM ortamı) kullanılması önerilir.

1.2 S: Hieff Trans™ Lipozomal Nükleik Asit Transfeksiyon Reaktifi kullanırken nelere dikkat etmeliyim?

A:

1) Hücreler transfekte edildiğinde hücre yoğunluğu tercihen %80-%95 olup, spesifik plaka yoğunluğu hücrelerin durumuna göre belirlenmektedir;

2) Yüksek saflıkta DNA kullanımı daha yüksek transfeksiyon veriminin elde edilmesine yardımcı olur;

3) Transfeksiyon kompleksleri hazırlanırken DNA ve transfeksiyon reaktiflerinin serumsuz besiyeri ile seyreltilmesi gerekmektedir;

4) Transfeksiyon sırasında ortama antibiyotik eklenemez;

5) Reaktifler 2-8°C’de saklanmalı ve uzun süre kapağın tekrar tekrar açılmamasına dikkat edilmelidir;

6) Maksimum transfeksiyon verimliliğini elde etmek için ilk kullanımda DNA konsantrasyonu ve katyonik lipozom reaktiflerinin sayısı optimize edilmelidir. DNA/transfeksiyon reaktifi oranının genellikle 1:2-1:3 olması önerilir.

1.3 S: Transfeksiyondan sonra sonlandırılması gerekir mi?

A: Gerek yok. Lipozom kompleksleri 6 saat boyunca stabildir. Hücre ortamı transfeksiyondan önce değiştirilmezse, normal hücre büyümesi için gereken besinleri sağlamak için 4-6 saat sonra yeni bir ortama geçmek gerekir. Ancak ortam transfeksiyondan önce değiştirilmişse, lipozom transfeksiyonundan sonra ortamı değiştirmek gerekli değildir.

1.4 S: DNA ve siRNA'nın ko-transfeksiyonu yapılabilir mi? Etkisi nasıldır?

C: Evet, DNA ve siRNA birlikte transfekte edildiğinde siRNA transfeksiyon verimliliği biraz daha düşük olacaktır.

1.5 S: Transfeksiyon reaktifi lentiviral ambalajların transfeksiyonunda kullanılabilir mi?

A: Lentiviral paketleme mümkündür.

1.6 S: Süspansiyon hücreleri Hieff Trans™ Lipozomal Nükleik Asit Transfeksiyon Reaktifi ile transfekte edilebilir mi?

A: Hieff Trans™ Lipozom Nükleik Asit Transfeksiyon Reaktifi süspansiyon hücre transfeksiyonu için kullanılabilir, ayrıntılar için Protokol'e bakın. Ayrıca, süspansiyon hücreler için özel olarak bir transfeksiyon reaktifi de tanıttık (Kat No.40805, Hieff Trans™ Süspansiyon Hücresiz Lipozomal Transfeksiyon Reaktifi)

2 Hieff Trans™ in vitro siRNA/miRNA Transfeksiyon Reaktifi

2.1 S: Transfeksiyondan sonra transfeksiyon reaktifinin değiştirilmesi gerekir mi?

A: Bu problem iki duruma ayrılabilir: 1. Transfeksiyondan önce ortam değişimi yoksa, hücre büyümesi için gerekli besinleri sağlamak amacıyla transfeksiyondan yaklaşık 6 saat sonra ortam değiştirilmelidir; 2. Transfeksiyondan önce ortam değişimi varsa, kültür hücrelerinin normal işleyişine göre çalıştırılabilir mi? ? Sıvı değiştirme işleminden sonra?

2.2 S: Transfeksiyon reaktifleri dondurulabilir mi?

A: Dondurulamaz, çünkü transfeksiyon reaktifi bir PEI katyonik transfeksiyon reaktifidir. Düşük sıcaklıklarda dondurmak PEI transfeksiyon reaktifinin aktivitesini yok edecektir. Bu nedenle, en iyi transfeksiyon etkinliğini korumak için 2-8 °C'de saklamak en iyisidir.

Ürün bilgisi

Ürünlerimizi kullanarak yayınlanan makalelerden bazıları

[1] Liu R, Yang J, ve diğerleri. Mühendislikle geliştirilmiş ışıkla değiştirilebilir RNA bağlayıcı proteinler kullanılarak RNA fonksiyonu ve metabolizmasının optogenetik kontrolü. Nat Biotechnol. 2022 3 Ocak. (IF:55)

[2] Luo J, Yang Q, ve diğerleri. TFPI, hipervirülan klad 2 C. difficile'den TcdB için bir kolon kript reseptörüdür. Hücre. 2022 Mar 17.（IF:41.582）

[3] Zhou J, Chen P, ve diğerleri. Sıkı PAM tanıma yoluyla daha düşük genom çapında hedef dışı etki için tasarlanmış Cas12a varyantları. Mol Ther. 2022 5 Ocak. (IF:11.454)

[4] Chen S, Cao X ve diğerleri circVAMP3, c-Myc Translasyonunu Bastırarak CAPRIN1 Faz Ayrımını Yönlendirir ve Hepatosit Karsinomasını Engeller. Adv Sci (Weinh). 24 Ocak 2022 (IF:16.808)

[5] Gu C, Wang Y ve diğerleri. AHSA1, multipl miyelomda hücresel çoğalma ve proteazom inhibitör direnci için umut vadeden bir terapötik hedeftir. J Exp Clin Cancer Res. 2022 6 Ocak. (IF:11.161)

[6] Zhang Y, Yu X ve diğerleri. Ekleme faktörü arginin/serin açısından zengin 8, CACYBP'nin alternatif eklenmesi ve ekzosom tabanlı hücresel iletişim yoluyla multipl miyelom malignitesini ve kemik lezyonunu teşvik eder. Clin Transl Med. 2022 Şubat (IF:11.492)

[7] Qin J, Cai Y, ve diğerleri. Ghrelin reseptöründe agonizm ve ters agonizmin moleküler mekanizması. Nat Commun. 2022 13 Ocak. (IF:14.9)

[8] Tang X, Deng Z, ve diğerleri.circHNRNPU tarafından kodlanan yeni bir protein, kemik iliği mikroçevresini ve alternatif eklemeyi düzenleyerek multipl miyelom ilerlemesini teşvik eder. J Exp Clin Cancer Res. 2022 Mar 8.(IF:11.161)

[9] Xie F, Su P ve diğerleri. COVID-19 Terapisi Olarak Palmitoillenmiş ACE2 ile Zenginleştirilmiş Ekstraselüler Veziküllerin Mühendisliği. Adv Mater. 2021 19 Ekim. (IF:30.849)

[10] Liang Y, Lu Q, ve diğerleri. NamiRNA ağı aracılığıyla güçlendirici geçişi ile meme kanserinde tümör baskılayıcının yeniden aktivasyonu. Nükleik Asitler Res. 2021 7 Eylül (IF:16.9)

[11] Fan Y, Wang J, ve diğerleri. CircNR3C2, üçlü negatif meme kanserinde miR-513a-3p'yi süngerleştirerek HRD1 aracılı tümör baskılayıcı etkiyi teşvik eder. Mol Cancer. 2 Şubat 2021 (IF:27.403)

[12] Dai L, Dai Y, ve diğerleri. Hasarlı kromatine BRCA1-BARD1 kompleksinin katılımına ilişkin yapısal içgörü. Mol Cell. 2021 Temmuz 1.(IF:17.97)

[13] Zhang K, Wang A, ve diğerleri. UBQLN2-HSP70 ekseni poli-Gly-Ala kümelerini azaltır ve C9ORF72 hayvan modelinde davranışsal kusurları hafifletir. Nöron. 2021 16 Haziran (IF:17.17)

[14] Li T, Chen X ve diğerleri. Farelerde glikoz homeostazını sağlayan nabızlı transgen ekspresyonu için sentetik bir BRET tabanlı optogenetik cihaz. Nat Commun. 27 Ocak 2021 (IF:14.92)

[15] Yan F, Huang C, ve diğerleri. Bakteriyel Bir Etkileyici Aile Tarafından Ubiquitin'in Treonin ADP-Ribosilasyonu Konak Ubiquitinasyonunu Engelliyor. Mol Cell. 2020 Mayıs 21.(IF:17.97)

[16] Sun X, Peng X ve diğerleri. ADNP, Wnt/β-catenin sinyallemesini düzenleyerek nöral farklılaşmayı teşvik eder. Nat Commun. 2020 12 Haziran. (IF:14.911)

[17] Yang X, Wang H, ve diğerleri. ERBB3 ve ERK sinyallemesinin yeniden düzenlenmesi, ERBB3-E928G mutasyonu barındıran gastrointestinal kanserlerde FGFR1 inhibisyonuna karşı direnç sağlar. Protein Hücresi. 2020 Aralık (IF:14.872)

[18] Zou Y, Wang A, ve diğerleri. Genetik olarak kodlanmış floresan sensörler kullanılarak canlı hücrelerde ve canlılarda redoks manzaralarının ve dinamiklerinin analizi. Nat Protoc. 2018 Ekim (IF:13.490)

[19] Hao H, Hu S, ve diğerleri. Endotelyal CXCR7 Kaybı Miyokard Enfarktüsünden Sonra Vasküler Homeostazisi ve Kardiyak Yeniden Şekillenmeyi Bozar: Kardiyovasküler İlaç Keşfi İçin Sonuçlar. Circulation. 2017 Mar 28.(IF:29.69)

Okumaya Bakın

Transfeksiyon Reaktifi – Hieff Trans™ ve PEI

Linear PEI MW 40000, daha verimli bir transfeksiyon reaktifi