Linear PEI 40000, daha verimli bir transfeksiyon reaktifi
Genel olarak, transfeksiyon, nükleik asitleri (DNA veya RNA) yapay olarak ökaryotik hücrelere sokma sürecidir. Adından da anlaşılacağı gibi transfeksiyon reaktifleri, transfeksiyonda yer alan bir dizi reaktiftir. Transfeksiyon süreci sırasında, genellikle düşük transfeksiyon verimliliği, dar uygulama aralığı, güçlü toksisite, zahmetli işlem ve transfeksiyon reaktiflerinin pahalı fiyatıyla uğraşırız. Peki, bu sorunları çözebilecek bir transfeksiyon reaktifi var mı? Evet, doğrusal PEI bu sorunları çözmek için en iyi seçimdir.
Not: Yeasen, Novel PEI'yi piyasaya sürdü Hieff Trans™ Ultra PEI-AAV Transfeksiyon Reaktifi Çeşitli virüs vektörlerinin büyük ölçekli üretimi ve yapışkan ve süspansiyon sistemlerine uygun proteinlerin geçici ekspresyonu için.
1. Hücre transfeksiyonunun çeşitleri nelerdir?
2. Doğrusal PEI MW 40000 nedir?
3. Doğrusal PEI MW 40000 nasıl çalışır?
4. PEI MW 40000’in özellikleri nelerdir?
5. Yeasen'den diğer transfeksiyon reaktifleri
6. Okumaya Dikkat Edin
1. Hücre transfeksiyonunun çeşitleri nelerdir?
Doğrusal PEI MW 40000'i tanıtmadan önce, hücre transfeksiyonunun türlerini kısaca anlayalım. Hücre transfeksiyonu, viral olmayan enfeksiyon araçlarını kullanarak nükleik asitleri (DNA veya RNA) yapay olarak hücrelere sokma sürecini ifade eden genetik araştırma, protein araştırması ve sitoloji araştırması için büyük önem taşır. Transfeksiyonun temel amacı, hücrelerdeki spesifik gen ifadesini artırarak veya engelleyerek genlerin veya gen ürünlerinin işlevini incelemek veya rekombinant proteinler üretmektir. Ekzojen nükleik asidin sokulması, gen düzenlemesi ve protein ifadesinin yanı sıra proteinlerin sentezi ve üretiminin incelenmesi için yararlı olan transfeksiyonun amacına ulaşmak için hücrelerin özelliklerini değiştirecektir.
Hücre transfeksiyonları kimyasal, biyolojik ve fiziksel yöntemlerle veya hücrede yabancı bir genin kalış süresiyle bölünebilir. Geçici transfeksiyonda, tanıtılan nükleik asit hücrede çoğalmadan sınırlı bir süre var olabilirken, kararlı transfeksiyonda, tanıtılan nükleik asit konak genomuna entegre olur ve transfekte edilen hücrenin yavrularında ifade edilebilir.
Pek çok farklı hücre transfeksiyon yöntemi varken, doğru yöntemi nasıl seçeriz?
Hiçbir tek transfeksiyon yöntemi tüm hücre tipleri için uygun değildir ve tüm deneysel ihtiyaçları karşılamaz. Optimum transfeksiyon yöntemi hücre tipinin ve deneysel koşulların gereksinimlerine göre seçilmelidir.
Günümüzde kimyasal transfeksiyon reaktifleri, kullanım kolaylığı ve çeşitli hücre hatları ile uyumluluğu nedeniyle hala ana akım hücre transfeksiyon yöntemleri arasında yer almaktadır.
2. Doğrusal PEI MW 40000 nedir?
Polietilenimin Doğrusal (PEI) MW40000 (hızlı lizis) 40.000 molekül ağırlığına sahip polietilenimin bazlı geçici bir transfeksiyon reaktifidir (PEI 40000). PEI 40000, negatif yüklü nükleik asit moleküllerine kolayca bağlanarak kompleksler oluşturabilen ve böylece kompleksleri hücrelere sokabilen yüksek yüklü bir katyonik polimerdir.
PEI 25000 transfeksiyon reaktifi ile karşılaştırıldığında, PEI 40000'in çözünmesi kolaydır ve doğrudan suda çözünebilir. Ek olarak, PEI 25000, polimer omurgasının DNA'ya bağlanmasını önleyen %4-11 oranında propionil kalıntıları içerir.Ancak PEI 40000 komple bir baraka konstrüksiyonudur, bu nedenle performansı her zaman verimlidir.
3. Doğrusal PEI MW 40000 nasıl çalışır?
Polietilenimin (PEI), iyi hücre yapışmasına sahip mükemmel bir çok işlevli viral olmayan vektördür ve lizozomal inhibitörlerden bağımsız olarak hücreleri transfekte etmek için kullanılabilir. PEI ve DNA, elektrostatik kuvvetlerle bağlanır ve DNA'nın gevşek bobin benzeri yapıdan küresel parçacık komplekslerine çökmesine neden olur. PEI-DNA kompleksleri genellikle pozitif yüklüdür ve dış hücre zarıyla elektrostatik olarak etkileşime girer ve endositozla alınır. Endositozlanmış PEI-DNA kompleksleri daha sonra parçalanma için lizozomlara transfer edilmek üzere endosomlar tarafından yakalanır. Sürekli artan iç iyonik basınç, endosomun şişmesine ve yırtılmasına neden olur ve yabancı DNA'yı sitoplazmaya bırakır. Bu transfeksiyon mekanizmasına "proton süngeri" etkisi denir.
Çalışmalar, PEI moleküllerinin, DNA'nın sitoplazmadaki nükleazlar tarafından parçalanmasını yeterince önlemek için PEI-DNA komplekslerinin yüzeyini kaplayabildiğini ve yabancı DNA'nın sitoplazmadan çekirdeğe geçişini sağladığını göstermiştir. Dahası, PEI molekülleri fosfolipid zarlarına yerleşebilir ve DNA'yı hücre çekirdeğine aktarmak için kararlı kanallar oluşturabilir. PEI molekülleri hücre çekirdeğine girmez ve bir DNA vektörü olarak önemli bir rol oynar.
Gen ifadesi, ekzojen gen memeli hücrelerine sokulduktan 1-4 gün sonra tespit edilebilir. Bu ifade, sokulan DNA'nın bir kısmının çekirdeğe girdikten sonra mRNA'ya transkribe edilmesi ve ardından sitoplazmaya çevrilmesi gerçeğinden kaynaklanmaktadır. Bu yöntem nispeten basit ve uygulanması kolay olduğundan, iyi bir ifade vektörü ve transfeksiyon yöntemi seçilerek protein ifadesi miktarı daha yüksek bir seviyeye ulaşabilir. PEI transfeksiyon reaktifleri, protein yapısı ve işlevini incelemek için yaygın bir transfeksiyon yöntemi olarak bilimsel araştırmalarda ve endüstriyel uygulamalarda yaygın olarak kullanılmıştır.
4. PEI MW 40000’in özellikleri nelerdir?
Düşük sitotoksisiteye sahip geçici bir transfeksiyon reaktifi olarak PEI 40000, HEK293 ve CHO gibi hücrelerde yüksek transfeksiyon verimliliğine ve yüksek gen ekspresyonu verimliliğine sahiptir. Doğrusal PEI transfeksiyon reaktifi, HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, HepG2 ve Hela hücreleri dahil olmak üzere çok çeşitli hücre hatları için doğrulanmıştır. Transfeksiyon verimliliği %80~%90 kadar yüksektir. Performans verilerini görüntülemeye devam edin:
- Yapışık ve süspansiyon hücreleri için uygun, yüksek transfeksiyon verimliliği
HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 ve Hela hücreleri vb. dahil olmak üzere çeşitli hücre hatları için uygundur, transfeksiyon verimliliği %80~%90 kadar yüksektir.
Tablo 1.Doğrulanmış hücre hatlarının listesi
| Yapışkan hücreler (1 μg DNA) | Yeterlik | Süspansiyon hücreleri (2 μg DNA) | Yeterlik |
| HEK-293 | %80-%90 | ÇÖP-K1 | %85 |
| Sf9 | %80-%90 | HEK-293T | %70-%80 |
| HepG2 | %80-%90 | THP-1 | %70-%80 |
| Merhaba | %80-%90 |
| |
Şekil 2. PEI 40000 transfekte edilmiş GFP plazmidi yapışık hücrelere HEK-293'e aktarıldı, transfeksiyon verimliliği 72 saat sonra %90'a ulaştı (sol); PEI 40000, GFP plazmidini süspansiyon hücreleri CHO-K1'e transfekte etti ve transfeksiyon verimliliği 72 saat sonra %80'e ulaştı (sağ)
- Düşük toksisite
Hücre canlılığını sağlar ve transfeksiyon verimliliğini artırır.
Şekil 3. YEASEN tarafından sağlanan PEI 40000, rakip poli**'den çok daha düşük sitotoksisiteye sahiptir
- Transfeksiyon verimliliği, PEI 25000'in yerini tamamen alabilen PEI 25000'den daha yüksektir
PEI 25000, polimer omurgasının DNA'ya bağlanmasını önleyen %4-11 propionil kalıntısı içerir. PEI 25000 ile karşılaştırıldığında, PEI 40000 tamamen dökülmüş bir yapıdır, bu nedenle performansı sürekli olarak verimlidir.
Şekil 4. HEK-293 hücreleri, PEI 25000 ve PEI 40000 transfeksiyon reaktifleri kullanılarak GFP plazmidi ile geçici olarak transfekte edildi ve floresans 72 saat sonra gözlendi. Deneysel sonuçlar: PEI 40000 transfeksiyon verimliliği PEI25000’den daha iyidir.
- Basit yapılandırma ve kısa transfeksiyon süresi
Bu ürün pH ayarlaması yapılmadan doğrudan suda çözülebilen anında tiptedir. Serum ve antibiyotiklerle uyumludur, ortamı değiştirmeye gerek yoktur.
- Maliyet açısından etkili, büyük ölçekli geçici transfeksiyona uygun
İthal ürünlerle karşılaştırıldığında Yeasen PEI 40000 transfeksiyon reaktifi düşük fiyata ve stabil partilere sahiptir.
5. Yeasen'den Diğer Transfeksiyon Reaktifleri
Yeasen, çeşitli kullanım senaryolarına uygulanabilen mevcut ana akım kimyasal transfeksiyon yöntemleri, katyonik lipozom reaktifleri ve katyonik polimer reaktifleri dahil olmak üzere eksiksiz bir transfeksiyon reaktifleri ürün yelpazesine sahiptir. Bu bölümde, Yeasen'in tüm transfeksiyon reaktiflerini ve uygulamalarını aşağıdaki tabloda listeliyoruz, deneyiniz için en uygun olanı seçebilirsiniz.
Tablo 2.Yeasen Transfeksiyon Reaktiflerinin Listesi
| Kedi# | Ürün Adı | Nükleik asit türü | Hücre tipi |
| 40823ES | DNA | Yapışık Ve Süspansiyon hücreleri | |
| 40816ES | DNA | Yapışık Ve Süspansiyon hücreleri | |
| 40820ES | DNA | Yapışık Ve Süspansiyon hücreleri | |
| 40821ES | DNA | Yapışık Ve Süspansiyon hücreleri | |
| 40802ES | DNA (<10kb), shRNA | Ayapışık hücreler | |
| 40805ES | Hieff Trans™ Süspansiyon Hücresiz Lipozomal Transfeksiyon Reaktifi (Soruşturma) | DNA (<10kb) | Süspansiyon hücreleri (İçin askıda kalmış kan hücreleri veya bağışıklık hücreler, transfeksiyon verimliliği Mevcut kimyasal reaktiflerin yüksek değil. Elektroporasyon veya virüs yöntemi tavsiye edilir.) |
| 40806ES | siRNA、mikroRNA、pre-miRNA, mimik miRNA, antimiRNA | Yapışkan ve süspansiyon hücreleri |
6. Okumaya Dikkat Edin
Transfeksiyon Reaktifi – Hieff Trans™ ve PEI
In Vitro Hücre Transfeksiyon Reaktifi Ürün Seçim Kılavuzu
Referans:
[1] Lu, Y., Yao, J. ve Zhou, J. (nd). Polietilenimin-DNA Komplekslerinin Oluşumu ve Toplanma Davranışı. Eczacılık Bölümü, Nanjing 210009.
[2] Sabin, J., ve diğerleri (2022). Polietilenimin transfeksiyonunun mekanizması ve gen terapisi ve DNA aşıları üzerindeki etkileri hakkında yeni bakış açıları. Koloidler ve Yüzeyler B: Biyoarayüzler, 210, 112219.
[3] Polietilenimin (PEI) ile geçici memeli hücre transfeksiyonu. Longo PA, Kavran JM, Kim MS, Leahy DJ