Mitokondri
Mitokondriler hücrenin enerji fabrikalarıdır, hücre içi oksidatif fosforilasyonun ve hücresel aktiviteler için enerji sağlayan adenozin trifosfat (ATP) sentezinin ana yeridir. Hücresel yaşam aktiviteleri için gereken enerjinin %95'i mitokondrilerden gelir. Hücreler için enerji sağlamanın yanı sıra mitokondriler hücre farklılaşması, hücresel bilgi transferi ve apoptoz gibi süreçlerde de yer alır ve hücre büyümesini ve hücre döngüsünü düzenleme yeteneğine sahiptir. Bu nedenle mitokondri ve mitokondriyal membranlar gibi analizler hücre çalışmasının temel bir parçasıdır.
Mitokondriyal membran potansiyelinin tanımı ve önemi
Mitokondriyal membran potansiyeli, iç mitokondriyal membranın her iki tarafındaki yük dağılımının sonucudur ve normal mitokondriyal işlevi sürdürmede önemli bir faktördür. Mitokondrilerde, elektron taşıma zinciri ATP sentezini yönlendiren redoks reaksiyonları yoluyla bir proton gradyanı oluşturur. Mitokondriyal membran potansiyelinin kararlılığı doğrudan hücrenin enerji tedariki ve hayatta kalma durumuyla ilgilidir. Çok sayıda çalışma, mitokondrilerin apoptozla yakından ilişkili olduğunu göstermiştir; burada mitokondriyal transmembran potansiyelindeki azalma, apoptotik kaskad reaksiyon sürecindeki en erken olaylardan biri olarak kabul edilir. Bu, çekirdekte apoptotik özelliklerin (kromatin yoğunlaşması, DNA kırılmaları) ortaya çıkmasından önce gerçekleşir ve mitokondriyal transmembran potansiyeli çöktükten sonra apoptoz geri döndürülemez. Bu nedenle, mitokondriyal membran potansiyelindeki azalma, apoptozun erken evrelerinde belirgin bir olaydır.
JC-1 Probunun Çalışma Prensibi
JC-1 mitokondriyal transmembran potansiyelinin bir göstergesi olarak kullanılabilen bir katyonik lipid floresan boyasıdır. JC-1 monomer ve multimer olmak üzere iki halde bulunur. Düşük konsantrasyonda monomer olarak bulunur ve yeşil floresans tespit edilebilir, akışlı deneyle tespit edildiğinde ise genellikle FL-1 kanalındadır (FITC ile aynı kanal). Yüksek konsantrasyonda, bir multimer olarak bulunur ve kırmızı ışık tespit edilebilir, ve akış-geçiş testi ile tespit edildiğinde, genellikle FL-2 kanalındadır (PE ile aynı kanal). JC-1 ayrıca katyonik lipid floresan boyası olarak kullanılabilir ve mitokondriyal transmembran potansiyel göstergesi olarak kullanılabilir. ve PE aynı kanal). JC-1 konsantrasyonunun değişmesi nedeniyle monomer ve multimer arasında geri dönüşümlü bir geçiş süreci oluşur.
Normal hücrelerde, membran potansiyeli normal olduğunda, JC-1 mitokondriye mitokondriyal membran polaritesinden girer ve konsantrasyondaki artış nedeniyle kırmızı floresan multimerleri oluştururken, apoptotik hücrelerde mitokondriyal transmembran potansiyeli depolarize olur ve JC-1 mitokondriden azaltılmış bir konsantrasyonda salınır ve yeşil floresan monomer formuna geri döner. Bu nedenle, mitokondriyal membran potansiyelindeki değişiklikler yeşil ve kırmızı floresansın saptanmasıyla saptanabilir.
Not: Görseller internetten alıntıdır
JC-10 Sondası
JC-10JC-1'in bir türevi olan , akış sitometrisi, floresan mikroskopisi ve mikrotitre plaka tabanlı floresan analizleri ile mitokondriyal transmembran potansiyelini belirlemek için kullanılan potansiyele bağlı bir probtur. Sağlıklı hücrelerde, JC-10 seçici olarak mitokondrilerde birikir ve geniş bir uyarım spektrumu ve 590 nm'de büyük emisyon değerleri gösteren kırmızı agregalar üretir.Ancak, düşük mitokondriyal transmembran potansiyeline sahip apoptotik ve nekrotik hücrelerde, JC-10 mitokondriden dışarı yayılır ve JC-10 monomerleri üretir, bu da yeşil emisyona (525 nm) doğru bir kaymaya neden olur. Miyosit, nöron, sağlam doku ve izole edilmiş mitokondri gibi çeşitli örnek tiplerinde mitokondriyal transmembran potansiyelinin bir göstergesi olarak başarıyla kullanılmıştır.
JC-10--JC-1'in Yerine Geçen
- Stabilite: JC-10, sulu ortamlarda daha yüksek çözünürlüğe ve daha yüksek duyarlılığa sahip olduğundan daha az tespit yanlılığına sahiptir.
- Gelişmiş sinyal: JC-10, JC-1'den daha yüksek sinyal-arka plan oranına sahiptir.
- Gelişmiş hassasiyet: JC-10, test edilen tüm hücre hatlarında mitokondriyal transmembran potansiyel kaybındaki ince değişiklikleri JC-1'den daha iyi tespit edebilmektedir.
- Geniş uygulama alanı: JC-10 primer rat hepatositlerinde kullanılabilir.
- Kullanışlı: JC-10 floresan enzim belirteçleri, hücre görüntüleyicileri ve akış sitometreleri ile uyumludur.
Notlar:. Komedonlar tarafından indüklenen mitokondriyal membran potansiyeli değişiklikleri, JC-10 ve JC-1 içeren Jurkat hücrelerinde ölçüldü. Jurkat hücreleri kamptotesinle (10 mM) 4 saat muamele edildikten sonra, JC-1 ve JC-10 boya örnekleme çözeltileri kuyulara eklendi ve 30 dakika inkübe edildi. JC-1 ve JC-10'un kümelenmiş ve monomerik formlarının floresan yoğunluğu, bir NOVOstar enzim etiketleyici (BMG Labtech) kullanılarak Ex/Em = 490/525 nm ve 490/590 nm'de ölçüldü.
Sonuçların analizi
JC-1 monomeri tespit edilirken, uyarım ışığı 490 nm'ye ve emisyon ışığı 530 nm'ye ayarlanabilir; JC-1 polimeri tespit edilirken, uyarım ışığı 525 nm'ye ve emisyon ışığı 590 nm'ye ayarlanabilir. Apoptozis akış sitometrisi ile tespit edildi, yeşil floresans FL-1 kanalıyla tespit edildi ve kırmızı floresans FL-2 kanalıyla tespit edildi. FL-1+, FL-2+ normal hücreler, FL-1+, FL-2- ise apoptotik hücrelerdir.
Not: Görsel kaynağı Çin Akım Hattı Derneği web sitesi forumlarıdır
Şüphesiz çalışın
S: JC-1 Mitokondriyal Membran Potansiyeli Floresan Probu, bu ürün doku kesitlerini boyamak için kullanılabilir mi?
A: Boyamadan önce hücrelerin aktivitesini garantilemek için canlı dokuyu tek tek hücrelere ayırın.
S: JC-1 ile boyama öncesi hücreleri düzeltebilir miyim?
A: Hayır. JC-1 boyası mitokondride potansiyele bağlı bir şekilde birikir ve hücreleri, dokuları veya saflaştırılmış mitokondriyal membran potansiyellerini tespit etmek için kullanılabilir. Hareketsizleştirme elektrik potansiyelini bozar, bunun sonucunda probun mitokondri üzerinde birikmemesi ve özgüllüğün kaybolması meydana gelir.
Q: JC-1 çalışma solüsyonunda toplanmış parçacıklar var ve bunları boyama öncesinde santrifüjleme yoluyla uzaklaştırmayı planlıyorum, santrifüjleme için önerilen herhangi bir parametre var mı?
A: JC-1 Çalışma Çözeltisi 13.000 g’de yaklaşık 1-2 dakika santrifüj edilebilir.
Sipariş Bilgileri
| Ürün Adı | Ürün No. | Şartname |
| 40705ES03/08 | 1 mg/5 mg | |
| 40707ES03/08 | 1 mg/5 mg |