Ters transkripsiyon, RNA'yı tamamlayıcı DNA'ya (cDNA) dönüştürme sürecidir ve bu, ters transkriptaz enzimi tarafından aracılık edilir. Tavlama primerlerinin varlığında, ters transkriptaz önce RNA şablonuna bağlanır. Ters transkriptazın RNA'ya bağımlı DNA polimeraz aktivitesi, reaksiyon karışımından dNTP'leri dahil ederek cDNA'yı sentezler. Bu süreç, birinci zincir cDNA sentezi olarak bilinen bir cDNA:RNA hibrit zincirinin oluşumuyla sonuçlanır.
Moloney Murine Lösemi Virüsü (M-MLV) ters transkriptaz, moleküler biyoloji laboratuvar prosedürlerinde yaygın olarak kullanılan ters transkriptazlardan biridir. Daha yüksek ters transkripsiyon verimliliği, daha iyi termal stabilite ve artan cDNA sentez oranı elde etmek için, orijinal ters transkriptaz genellikle genetik olarak tasarlanır. Şu anda, piyasada bulunan ters transkripsiyon reaktifleri genellikle 15 ila 30 dakika arasında değişen reaksiyon süreleri gerektirir, bu da nispeten uzundur. Reaksiyon örneklerinin sayısı fazla olduğunda, toplam zaman harcaması önemli ölçüde artabilir. YESSEN'in mevcut 5 dakikalık ters transkripsiyon serisi ürünleri, ters transkripsiyon sürecini sadece 5 dakika içinde tamamlayabilir, zamandan tasarruf sağlar ve oldukça verimlidir.
| Pürün Pkonumlandırma | Ürün Adı | Kedi# |
| Hızlı, Verimli ve Yüksek Verimli Ters Transkripsiyon Ön Karışımı | Hifair™ AdvanceFast 1. Zincir cDNA Sentezi qPCR için SuperMix | 11156TS |
| Hızlı, Verimli ve Yüksek Verimli Ters Transkripsiyon Ön Karışımı (gDNA Çıkarımı ile) | Hifair™ AdvanceFast 1. Zincir cDNA Sentezi qPCR için SuperMix (DNA sindirici artı) | 11155ES |
| gDNA Çıkarımının ve Ters Transkripsiyon Ön Karışımının Hızlı Tek Adımda Tamamlanması | Hifair™ AdvanceFast Tek Adımlı RT-gDNA Sindirimi qPCR için SuperMix | 11151ES |
| Esnek Primer Seçimi Hızlı Ters Transkripsiyon Kiti (gDNA Çıkarımı ile) | 11150ES | |
| Esnek Primer Seçimi Hızlı Ters Transkripsiyon Kiti (gDNA Çıkarımı ve İzleme Boyası ile) | Hifair™ AdvanceFast 1. Zincir cDNA Sentez Kiti | 11149TS |
Butik Öneri Bir
Hızlı, Verimli ve Yüksek Verimli Ters Transkripsiyon Ön Karışımı (gDNA Çıkarımı ile) (Kat #11155ES)
Farklı şablonlardan yüksek ters transkripsiyon verimi
| Örnek | 293T Hücre | Arabidopsis thaliana | Fare | Balık Karaciğeri |
| 11155ES | 23.4↓ | 19.6↓ | 24.9↓ | 21.1↓ |
| Marka A | 24.9 | 21.3 | 27.5 | 21.3 |
| Marka B | 26.1 | 20.5 | 27.1 | 23.1 |
| Marka C | 25.7 | 19.8 | 27.3 | 21.9 |
| Marka D | 24.3 | 21.3 | 28.1 | 24.5 |
Şekil. Ters transkripsiyon, insan 293T hücreleri, Arabidopsis thaliana, fare karaciğeri ve balık karaciğerinden alınan RNA şablonları kullanılarak gerçekleştirildi. A, B, C ve D markaları, 15 ila 20 dakika arasında değişen ters transkripsiyon sürelerine sahip iki aşamalı sindirim ters transkripsiyon reaktifleridir. Test sonuçları, Hifair 11155ES 5 dakikalık ters transkripsiyon kitinin diğer markalara kıyasla daha yüksek verimle öne çıktığını ve Ct değerlerinin daha düşük olduğunu göstermektedir.
Butik Öneri İki
5 Dakikalık Tek Adımlı Sindirim ve Ters Transkripsiyon Ön Karışımı (Cat #11151ES)
Yüksek ters transkripsiyon verimi
Şekil. Şablon olarak insan 293T hücre RNA'sı kullanılarak, sırasıyla üç gen test edildi. Markalar A, B ve C, hepsi tek adımlı gDNA çıkarma ve ters transkripsiyon reaktifleridir. Test sonuçları, 1 μg ve 10 ng Toplam RNA girişiyle, 11151ES kitiyle ters transkripsiyon veriminin, daha küçük Ct değerleriyle diğer markalardan üstün olduğunu göstermektedir.
Şekil. Şablon olarak Arabidopsis thaliana RNA'sı kullanılarak, Markalar A, B ve C tek adımlı gDNA çıkarma ve ters transkripsiyon reaktifleridir. Test sonuçları, 1 μg ve 10 ng Toplam RNA girişiyle, 11151ES kitiyle ters transkripsiyon veriminin daha küçük Ct değerleriyle diğer markalardan üstün olduğunu göstermektedir.
Mükemmel hassasiyet
Şekil. Şablon olarak insan 293T hücre RNA'sı kullanılarak %30 GC, %50 GC, %60 GC ve %70 GC içeriğine sahip genler çoğaltıldı. 100 pg, 1 ng, 10 ng, 100 ng ve 1 μg toplam RNA girdileri, floresan kantitatif tespitinin ardından ters transkripsiyon için kullanıldı. Sonuçlar, 11151ES'nin 100 pg ila 1 μg aralığındaki RNA girdileri için ters transkripsiyonu karşılayabildiğini göstermektedir.
Butik Öneri Tburada
5 Dakikalık Hızlı Ters Transkripsiyon Kiti (Kedi #11149/11150ES)
Yüksek hassasiyet, 10 pg'ye kadar minimum tespit limiti
Şekil. Şablon olarak 293T hücrelerinden toplam RNA kullanılarak, 11149ES ile ters transkripsiyon gerçekleştirildi ve elde edilen cDNA qPCR kantitatif analizine tabi tutuldu. Sonuçlar, 11149ES'nin 10 pg ila 1 μg aralığındaki RNA girdilerini başarılı bir şekilde ters transkripte edebildiğini ve doğru kantitatif sonuçları garanti ettiğini göstermektedir.
İyi amplifikasyon performansı, 14 kb'lik bir parçanın en uzun amplifikasyonu
Figür.Şablon olarak 293T hücrelerinden toplam RNA kullanılarak, 11149ES ile ters transkripsiyon gerçekleştirildi ve elde edilen cDNA PCR tespitine tabi tutuldu. Sonuçlar, 11149ES'nin 1 kb ila 14 kb uzunluğunda cDNA parçalarını sentezleyebildiğini ve sonraki PCR'nin belirli uygulanabilir senaryolara sahip olduğunu göstermektedir. 10 kb'den büyük parçaların doğrudan ters transkripsiyonu gerekiyorsa, son parçaların edinilmesini sağlamak için ters transkripsiyon süresinin 20-30 dakikaya uzatılması önerilir.
Ters transkripsiyon verimliliğinin karşılaştırılması
| RNA Giriş Miktarı | Ct Değeri | |
| 11149TS | Marka A | |
| 1 mikrogram | 15.2 | 15.5 |
| 100 ng | 18.0 | 18.5 |
| 10 ng | 21 | 21.7 |
| 1 ng | 24.5 | 25.1 |
| 100 sayfa | 29.1 | 29.7 |
| 10 sayfa | 32.7 | 34.3 |
Şekil. Şablon olarak 293T hücrelerinden toplam RNA kullanılarak, 11149ES ve Brand A ile ters transkripsiyon gerçekleştirildi ve 11149ES gDNA çıkarma adımından geçmedi. Elde edilen cDNA, qPCR kantitatif analizine tabi tutuldu. Sonuçlar, Brand A için ters transkripsiyon süresinin 13 dakika, 11149ES için ise 5 dakika olduğunu gösterdi. Farklı ürünlerin kantitatif analizi, 11149ES için Ct değerlerinin rakip markanınkine benzer veya daha küçük olduğunu ortaya koydu ve bu da 11149ES'nin 5 dakikalık ters transkripsiyon verimliliğinin Brand A'dan üstün veya yaklaşık olarak eşit olduğunu gösteriyor.
| RNA Giriş Miktarı | Ct Değeri | |
| 11149TS | Marka B | |
| 1 mikrogram | 16.2 | 17.4 |
| 100 ng | 19.0 | 20.5 |
| 10 ng | 22 | 23.8 |
| 1 ng | 26 | 27.9 |
| 100 sayfa | 31.4 | 33.2 |
| 10 sayfa | 32.9 | 35.6 |
Figür.Şablon olarak 293T hücrelerinden toplam RNA kullanılarak, 11149ES ve Brand B ile ters transkripsiyon gerçekleştirildi ve 11149ES gDNA çıkarma adımından geçmedi. Elde edilen cDNA, qPCR kantitatif analizine tabi tutuldu. Sonuçlar, Brand B için ters transkripsiyon süresinin 20 dakika, 11149ES için ise 5 dakika olduğunu gösterdi. Farklı substrat miktarlarının kantitatif analizi, 11149ES için Ct değerlerinin Brand B'ninkilere benzer veya daha küçük olduğunu ortaya koydu ve bu da 11149ES'nin 5 dakikalık ters transkripsiyon verimliliğinin Brand B'ninkinden üstün veya yaklaşık olarak eşit olduğunu gösteriyor.
Önerilen ilgili ürünler
| Yöntem | Pürün Pkonumlandırma | Ürün Adı | Kedi# |
| Boya bazlı qPCR | Yüksek özgüllüklü evrensel kantitatif premiks (Boya bazlı) | Hieff UNICON™ gelişmiş qPCR SYBR Master Mix | 11185ES |
| Yüksek hassasiyetli evrensel kantitatif premiks (Boya bazlı) | 11184TS | ||
| Ters Transkripsiyon | 5 dakikalık tek adımlı sindirim ve ters transkripsiyon ön karışımı (qPCR için) | Hifair™ AdvanceFast Tek Adımlı RT-gDNA Sindirimi qPCR için SuperMix | 11151ES |
| 5 dakikalık hızlı ters transkripsiyon, 14 kb'ye kadar cDNA sentezi, gDNA çıkarma (PCR/qPCR için) - Tracer versiyonu | Hifair™ AdvanceFast 1. Zincir cDNA Sentez Kiti | 11149TS | |
| 5 dakikalık hızlı ters transkripsiyon, 14 kb'ye kadar cDNA sentezi, gDNA çıkarılması (PCR/qPCR için) | Hifair™ AdvanceFast 1. Zincir cDNA Sentez Kiti（Boya Yok） | 11150ES | |
| Yüksek kaliteli birinci zincir cDNA sentez ön karışımı, gDNA çıkarılmasıyla (qPCR için) | Hifair™ III 1. Zincir cDNA Sentezi qPCR için SüperMix (gDNA sindirici artı) | 11141ES |