——Daha Fazla Genotipleme, Daha Az Zaman ve Daha Az Reaktif
PCR tabanlı Genotipleme ve diğer deneyler genellikle örneklerden genomik DNA'nın saflaştırılmasını gerektirir. Test edilecek çok sayıda örnek olduğunda, genomik DNA'yı saflaştırma süreci zaman alıcı, tekrarlayıcı ve maliyetlidir. YEASEN Biyoloji, Taq DNA polimerazını modifiye ederek ve PCR reaksiyon sistemini optimize ederek, genomik saflaştırmaya olan ihtiyacı ortadan kaldıran bir dizi Doğrudan PCR Kiti ürünü geliştirdi.
Akıllı PCR: Doğrudan PCR
YEASEN'in Doğrudan PCR Kiti, PCR tabanlı Genotipleme için şablon olarak genomik saflaştırma olmaksızın, ham örneklerin (Şekil 1-A) veya lizat ürünlerinin (Şekil 1-B) minimal miktarlarını kullanarak doğrudan numuneden başlar (Şekil 1). Geleneksel PCR tabanlı Genotipleme ile karşılaştırıldığında, Doğrudan PCR Kiti daha az numune kullanır, kullanımı kolaydır, düşük deneysel maliyete sahiptir ve yüksek verimli numune tespitine olanak tanır.
Şekil 1 Doğrudan PCR Amplifikasyon İş Akışı
A.Doğrudan Yöntem: Numunenin küçük bir miktarını alın ve PCR tanımlaması için doğrudan PCR Master Mix'e ekleyin.Teknik Avantajlar
Doğrudan: Zaman alıcı ve pahalı DNA saflaştırmasına gerek yok.
Hızlı: Şablon hazırlama 10 dakikada tamamlanır ve PCR reaksiyonu 30 dakika gibi kısa bir sürede tamamlanır.
Basit: Numuneler kesme veya öğütme işlemine gerek kalmadan lize edilebilir ve PCR karışımı önceden karıştırılmış formda olduğundan pipetleme adımlarının sayısı azalır.
Tasarruf: Az miktarda malzeme kullanıldı.
Yüksek verim: Liz reaksiyonları 96-kuyucuklu bir plakada tamamlanabilir.
İnhibisyona dayanıklı: Çeşitli hayvan ve bitki örneklerine karşı toleranslıdır.
Doğrudan PCR Kiti Deneysel İşlem
Bu ürün serisi, numuneleri lizlemek için benzersiz bir proteaz lizis sistemi kullanır. Lizis solüsyonu doğrudan bir şablon olarak kullanılabilir ve gen amplifikasyonu için kitte sağlanan PCR Master Mix ile eşleştirilebilir.
Şekil 2 Fare dokularının doğrudan PCR deney süreci
İncir.3 Bitki dokusunda doğrudan PCR deneyinin süreci
Doğrudan PCR Ürün Seçim Tablosu
| Ürün Serisi | Fare Doğrudan PCR İkinci Nesil | |||
| Ürün Numarası | 10189ES | 10185ES | 10188ES | 10187ES |
| Özellikler | 20T/50T/200T/500T | 50T/200T | 20T/50T/200T/500T | 50T/200T |
| Özellikler | ||||
| Amplikon Uzunluğu | ≤5 kb | ≤1 kb | ≤8 kb | ≤1 kb |
| Uzatma Süresi (s/kb) | 3-20 saniye | 30 saniye | ≤2 kb: 3-5 sn ≤8 kb: 10 sn | 60 saniye |
| Uygulanabilir Organizmalar | Fareler, Sıçanlar | Fareler, Sıçanlar | İnsanlar, Fareler, Keçiler, Tavuklar, Domuzlar, vb. | Pirinç, Mısır, Tütün, Kolza, Buğday, Soya Fasulyesi vb. |
| Uygulanabilir Doku/Malzeme Türleri | Fare kuyruğu, Fare kulağı, Ayak parmakları (kaslı) ve diğer organlar | Fare kuyruğu, Fare kulağı, Ayak parmakları (kaslı) ve diğer organlar | EDTA, heparin, sitrat gibi yaygın antikoagülanlar içeren taze kan, soğutulmuş (dondurulmuş) kan ve Whatman903 gibi ticari kurutulmuş kan lekeleri® ve FTA® | Yumuşak yapraklar, Eski yapraklar, Fideler, Yumuşak gövdeler |
| Örnek Kullanım | Doku: 5 mg Fare kuyruğu: 1-5 mm | Doku: 5-10 mg Fare kuyruğu: 1-5 mm | Tam kan: 0.%5-%20 Whatman® kurumuş kan lekeleri: 1 mm2 | Yaprak: 1-10 mm Tohum: 1-3 mm |
| Genomik Yayın Süresi | 5-10 dk | 15 dk | 0-3 dk | 0-10 dk |
| Ürün Son Yapısı | Künt uçlar | Künt uçlar | Künt uçlar | Künt uçlar |
| Tavlama Sıcaklığı | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(1~2)℃ | Tm-(2~5)℃ |
| GC Kırpma Aralığı | %29-70 | %30-70 | %30-75 | %40-65 |
| 5'-3' Ekzonükleaz Aktivitesi | Evet | Evet | Evet | Evet |
| Uygulamalar | ||||
| Genotipleme | Evet | Evet | Evet | Evet |
| Çoklu PCR | 5x'e kadar |
| 3-4x'e kadar |
|
| Doğrudan Örnek Amplifikasyonu | Evet | Evet | Evet | Evet |
| Diğer Özellikler | ||||
| Elektroforez Göstergesi | Renksiz | Mavi | Renksiz | Mavi |
| Sıcak Başlangıç | Evet | Evet | Evet | Evet |
| Önceden karıştırılmış/Kit | Kit (Karışımlı) | Kit (Karışımlı) | Kit (Mix+buffer ile) | Kit (Karışımlı) |
Ürün Avantajları
Modifiye Taq DNA Polimeraz Direkt PCR’ın garantisidir: İnhibitörlere karşı süper toleranslıdır.
Saflaştırılmamış örnekler şablon olarak kullanıldığında, PCR reaksiyonlarını engelleyen birçok bileşen eklenir. Sıradan PCR reaksiyon sistemleri ve Taq DNA polimerazı ile ideal sonuçlara ulaşmak zordur, hatta PCR amplifikasyonu yapmak imkansızdır. Bu kit serisindeki PCR Karışımı, şablon DNA'ya bağlanma yeteneğini artıran ve yaygın PCR inhibitörlerine karşı daha yüksek toleransa sahip olan, dolayısıyla daha geniş bir şablon uyarlanabilirliğine sahip modifiye edilmiş bir Taq DNA Polimerazı kullanan formül açısından optimize edilmiş bir ön karışımdır.
Şekil 4 Direkt PCR Kitindeki PCR Karışımı, safsızlıklara karşı daha yüksek toleransa sahiptir. Farklı PCR Karışımları ile PCR için aynı miktarda şablon kullanılır ve sisteme çeşitli konsantrasyonlarda PCR reaksiyon inhibitörleri eklenir. Farklı koşullar altında PCR ürünlerinin miktarı karşılaştırılır.
SenKOLAYLAŞTIRMAK farklı numuneler için bir dizi ürün geliştirdi:
- I. Kemirgenlere özgü tip: Fare Doku Doğrudan PCR Kiti Artı (10189ES)
Uygulanabilir örnekler: Fare dokuları (fare kuyruğu, fare kulağı, fare parmağı vb.)
- Yüksek amplifikasyon verimliliği (uzunluk, hız, GC uyumluluğu)
Şekil 5 Fare Doku Doğrudan PCR Kiti Plus, farklı dokulardan lizatları çoğaltır. 1: Plazmit; 2: Fare Kulağı; 3: Fare Kuyruğu; 4: Karaciğer. Lizis koşulları: 10 dakika boyunca 70°C'de lizis, 5 dakika boyunca 95°C'de inaktivasyon. Hedef parçalar 1 kb, 2 kb, 3 kb ve 6 kb, uzatma süreleri sırasıyla 3, 5, 10 ve 20 sn/kb olarak ayarlanmıştır. M: 10510ES60 (EVET).
- Geniş şablon uyumluluğu (10189ES)
Şekil 6 Fare Doku Doğrudan PCR Kiti Plus, insan 293 hücrelerini doğrudan lize etmek (10 dakika boyunca 70°C) ve çoğaltmak için kullanıldı (1), tükürük (2) ve kafa derisi dokusu (3). Tüm örneklerde belirgin hedef bantları görüldü, M: 10510ES60 (YEASEN).
- II. Çok Türlü Kan Evrensel Tip: Kan Gelişmiş Doğrudan PCR Kiti (10188ES)
- Amplifikasyon uzunluğu 8 kb'ye kadar
Şekil 7. İnsan tam kanından Blood Advanced Direct PCR Kiti kullanılarak farklı uzunluklarda DNA parçaları doğrudan çoğaltıldı. Kan örnekleri antikoagülan olarak EDTA ile -20℃'de saklandı. Kan şablonu konsantrasyonu %10'du ve uzatma süresi 10 sn/kb olarak ayarlandı. M: 10510ES60 (YEASEN).
- Yüksek Tolerans
Şekil 8A: Blood Advanced Direct PCR Kiti, %71 GC içeriğine sahip 2 kb'lik bir DNA parçasını doğrudan insan EDTA antikoagüle edilmiş tam kanından çoğaltmak için kullanılır. Kan şablonu konsantrasyonu gradyan olarak %0,5-50 arasında ayarlanır ve uzatma süresi 10 sn/kb olarak ayarlanır. B: Blood Advanced Direct PCR Kiti, %67 GC içerikli 2,2 kb DNA parçasını doğrudan fare EDTA antikoagüle edilmiş tam kanından çoğaltmak için kullanılır. Kan şablonu konsantrasyonu %0,5-50 olarak ayarlanır ve uzatma süresi 10 sn/kb'dir. M: 10510ES60 (YEASEN).
- III. Bitkiye özgü tip: Bitki Doku Doğrudan PCR Kiti (10187ES)
- Birden fazla bitki örneği türüyle doğrulandı
Şekil 9 Farklı bitki türlerinin yaprak dokularından doğrudan amplifikasyon sonuçları. M: 100 bp DNA merdiveni. C: Şablon olarak karşılık gelen bitkilerden saflaştırılmış genomik DNA. 1-2: Şablon olarak yaprak dokusu lizatı. Döngü sayısı: 30 döngü.
Müşteri Davası
- I. Fare Genotip Tanımlaması
Guangzhou'daki bir biyolojik şirket:
Şekil 10 Fare Doğrudan PCR Kiti (10189ES) kullanılarak fare kuyruğunun çoğaltılması. Hedef gen: 500 bp; Lizis süresi: 10 dk; PCR reaksiyon sistemi: 25 μL, uzatma süresi: 5 sn/kb.
- II.Pirinç Geni Doğrudan Amplifikasyonu
XX Üniversite
Şekil 11. Pirinçle ilgili genleri çoğaltmak için Plant Direct PCR Kiti (10187ES) kullanılır.
Rsevinçli Pürünler
| Ürün Konumlandırma | Ürün Adı | Ürün Numarası | Ürün Özellikleri |
| Yüksek kaliteli agaroz | 10208ES60/76 | 100 gr/500 gr | |
| Nükleik Asit Lekeleri (UV Işığı Altında) | 10202ES76 | 500 μL | |
| Hızlı PCR yükseltmesi, koloni PCR'si olabilir ve karmaşık şablon amplifikasyonu için uygundur | 10167ES03/08 | 1 mL/5×1 mL |