Công nghệ chẩn đoán phân tử khác biệt với nhiều phương pháp phát hiện khác do độ nhạy và độ đặc hiệu đặc biệt của nó. Tuy nhiên, các thuốc thử chẩn đoán dạng lỏng thông thường có những nhược điểm như chi phí vận chuyển cao và thời hạn sử dụng hạn chế, làm hạn chế tính hữu dụng của chúng. Để đáp ứng nhu cầu thị trường đang thay đổi và những tiến bộ công nghệ, các thuốc thử xét nghiệm chẩn đoán phân tử đông khô đã xuất hiện. Các sản phẩm đông khô có một số ưu điểm so với thuốc thử xét nghiệm dạng lỏng truyền thống, bao gồm:
- Ổn định ở nhiệt độ phòng - Cấu trúc ba chiều cố định, có thể đảm bảo tính ổn định của enzyme và hệ thống phản ứng ở nhiệt độ phòng. Không cần vận chuyển và bảo quản trong tủ lạnh hoặc kho lạnh, có thể kéo dài thời hạn sử dụng của sản phẩm.
- Dễ sử dụng- Không cần phải rã đông, cấp chất lỏng nhiều lần, v.v.
- Giảm chi phí- Không cần vận chuyển chuỗi lạnh và lưu trữ đông lạnh, giúp giảm hiệu quả chi phí vận chuyển và lưu trữ.
- Độ chính xác cao- Sử dụng một lõi vi sinh đông khô trong một phản ứng để giảm lỗi thành phần trong quá trình chuẩn bị thuốc thử, rút ngắn thời gian vận hành, ngăn ngừa mất hoạt tính sinh học trong quá trình chuẩn bị chất lỏng và cải thiện cơ bản độ chính xác.
- Sử dụng linh hoạt- Không giới hạn số lượng mẫu, có thể nạp 1 mẫu.
Các enzyme phân tử thông thường hoặc premix thường kết hợp nồng độ glycerin cao như một tác nhân bảo vệ đông lạnh và chất ổn định. Tuy nhiên, sự hiện diện của glycerin trong thuốc thử có thể phá vỡ tính toàn vẹn về mặt cấu trúc của nước, khiến việc loại bỏ nước hiệu quả trở nên khó khăn. Điều này, đến lượt nó, có tác động bất lợi đến cấu trúc và độ ổn định của sản phẩm đông khô. Do đó, khi lựa chọn đông khô, nên chọn thuốc thử không chứa glycerol.
Hơn nữa, trong các ứng dụng đặc biệt nhạy cảm với thành phần thuốc thử, chẳng hạn như PCR kỹ thuật số, việc sử dụng các enzyme không chứa glycerin nồng độ cao có thể làm giảm thêm ảnh hưởng của glycerol lên phản ứng PCR kỹ thuật số. Cách tiếp cận này không chỉ giảm thiểu sự can thiệp mà còn mở rộng tiềm năng tối ưu hóa hệ thống thuốc thử phát hiện PCR kỹ thuật số.
- Thử nghiệm quá trình thẩm phân
Tối ưu hóa quá trình thẩm phân cho một thể tích enzyme glycerin cố định:
- Sàng lọc dung dịch đệm thẩm phân tối ưu cho các loại enzyme phân tử khác nhau;
- Sàng lọc các giải pháp lưu trữ ổn định cho các loại enzyme phân tử khác nhau để có thể lưu trữ lâu dài ở nhiệt độ 4℃ hoặc -20℃.
- Quá trình khuếch đại lọc dòng chảy tiếp tuyến
Dựa trên quá trình sàng lọc thẩm phân, các thành phần đệm thẩm phân tối ưu và các giải pháp lưu trữ tối ưu của chúng có thể được xác định. Sau đó, quá trình lọc dòng tiếp tuyến (còn gọi là UFDF) có thể được sử dụng để thay thế đệm dung dịch.
Các yếu tố quan trọng trong quá trình phát triển quá trình lọc dòng tiếp tuyến xoay quanh việc lựa chọn công thức dung dịch lưu trữ, công thức dung dịch rửa và lọc, cũng như áp suất xuyên màng và tốc độ dòng chảy được áp dụng trong quá trình lọc.
- Kiểm soát chất lượng
Các quy trình chuẩn bị khác nhau được nêu ở trên được thiết kế để đáp ứng các yêu cầu đa dạng cho các khối lượng và loại sản phẩm khác nhau. Để đánh giá độ ổn định của sản phẩm trên nhiều lô khác nhau và trong cùng một quy trình,
Sản phẩm enzyme phân tử không chứa Glycerol
premix qPCR được chuẩn bị bằng cách sử dụng
- Sản phẩm đông khô RT-qPCR: Được tăng tốc ở 50℃ trong 25 ngày, sản phẩm đông khô có hình thái và hiệu suất ổn định
Hình 4: Dữ liệu thử nghiệm độ ổn định tăng tốc của sản phẩm đông khô RT-qPCR- Sản phẩm đông khô RT-LAMP: Được tăng tốc ở 45℃ trong 30 ngày, sản phẩm đông khô có hình thái và hiệu suất ổn định
Hỗn hợp RT-LAMP được chuẩn bị với
Thông tin sản phẩm
| Phân loại | Ntôi | Số danh mục |
| Sản phẩm enzyme không chứa Glycerol cho qPCR/RT-qPCR | Bộ dụng cụ RT-qPCR một bước Hifair™ Lyo Multiplex -11831ES | 11831ES |
| Hieff UNICON® HotStart E-Taq DNA Polymerase, không chứa Glycerol | 14316ES | |
| 11301ES | ||
| 10707ES | ||
| 10703ES | ||
| Sản phẩm enzyme không chứa Glycerol cho RT-LAMP | Hifair® III Reverse Transcriptase, 600U/μl, không chứa Glycerol | 11297ES |
| Lyophilized Bst Plus DNA Polymerase (60 U/μL，Không chứa Glycerol) | 14405ES |