Điện di protein là một kỹ thuật phân tích protein. Protein tích điện âm hoặc dương trong dung dịch đệm và di chuyển đến anot trong một trường điện gọi là điện di. Các phân tử protein khác nhau có độ linh động điện di khác nhau. Một phần rất quan trọng của điện di protein là chuẩn bị gel. Chuẩn bị gel thông thường thường mất vài giờ và cũng có những vấn đề như rò rỉ chất lỏng, gel không đều và bọt khí. Ngoài những rắc rối trong quá trình chuẩn bị, thuốc thử nguyên liệu cũng sẽ có độc tính nhất định, sẽ gây hại cho thân máy phân phối keo và sự xuất hiện của keo đúc sẵn có thể giải quyết những rắc rối này. Vậy nguyên lý cơ bản của điện di protein là gì và chức năng và nguyên lý của gel đúc sẵn là gì?

1. Nguyên lý cơ bản của điện di protein là gì?
2. Chức năng và nguyên lý của keo dán đúc sẵn là gì?
3. Giới thiệu keo dán đúc sẵn do Yeasen
4. Câu hỏi thường gặp
5. Chi tiết sản phẩm

1. Nguyên lý cơ bản của điện di protein là gì?

Hầu hết các đại phân tử sinh học, chẳng hạn như protein và axit nucleic, đều có nhóm cation và nhóm anion, được gọi là zwitterion. Phương pháp điện di vùng trong đó các hạt được phân tán trong dung dịch và gel tinh bột, gel agar hoặc agarose, gel polyacrylamide, v.v. làm môi trường hỗ trợ được gọi là điện di gel. Điện di gel polyacrylamide là phương pháp điện di trong đó chất hỗ trợ là gel polyacrylamide. Người ta tin rằng kích thước lỗ chân lông của gel polyacrylamide được kiểm soát để trùng hợp và các protein được tách ra bằng tác động của một sàng phân tử tương tự.

Điện di protein bao gồm hai dạng, điện di gel polyacrylamide tự nhiên (Native-PAGE) và điện di gel polyacrylamide natri dodecyl sulfate (SDS-PAGE). Native-PAGE giữ nguyên vẹn các protein trong quá trình điện di và tách chúng theo một gradient dựa trên trọng lượng phân tử, hình dạng và điện tích đi kèm. Mặt khác, SDS-PAGE tách protein theo trọng lượng phân tử của các tiểu đơn vị của chúng. SDS là chất tẩy rửa anion. Là chất biến tính và chất hòa tan, nó có thể phá vỡ các liên kết hydro nội phân tử và liên phân tử, gấp các phân tử và phá hủy cấu trúc bậc hai và bậc ba của các phân tử protein. Là chất khử mạnh, mercaptoethanol, dithiothreitol, có thể phá vỡ các liên kết disulfide giữa các dư lượng cysteine. Sau khi thêm chất khử và SDS vào mẫu và gel, các phân tử bị khử trùng thành các chuỗi polypeptide và các chuỗi bên axit amin đã khử trùng và SDS được kết hợp thành các micelle protein-SDS. Điện tích âm của micelle protein-SDS vượt quá điện tích ban đầu của protein, loại bỏ sự khác biệt về điện tích và sự khác biệt về cấu trúc giữa các phân tử khác nhau. Tính di động của protein chỉ phụ thuộc vào khối lượng phân tử của protein và khối lượng phân tử của protein có thể được xác định bằng cách so sánh với một tiêu chuẩn có khối lượng phân tử đã biết.

2. Chức năng và nguyên lý của keo dán đúc sẵn là gì?

So với gel đúc thủ công truyền thống, gel protein đúc sẵn có thể tránh tiếp xúc với số lượng lớn thuốc thử độc hại, tiết kiệm nhiều thời gian và giải quyết hiệu quả vấn đề chênh lệch lớn giữa các gel đúc thủ công.

Gel bao gồm hai lớp gel khác nhau, lớp trên là gel xếp chồng và lớp dưới là gel tách. Gel xếp chồng còn được gọi là gel xếp chồng.Nồng độ gel tương đối nhỏ và kích thước lỗ tương đối lớn. Mẫu được thêm vào gel xếp chồng và cô đặc trong một vùng hẹp thông qua sự di chuyển của gel có kích thước lỗ lớn. Gel tách, còn được gọi là gel điện di, thường có kích thước lỗ nhỏ và việc lựa chọn nồng độ gel thích hợp có thể làm cho các thành phần mẫu được tách biệt tốt.

Gel tách có thể được chia thành gel cố định và gel gradient. Nồng độ polyacrylamide là 8%, 10%, 12%, 15%, 4% đến 12% và 4% đến 20%. Bốn loại đầu tiên là gel đúc sẵn có nồng độ cố định và hai loại cuối cùng là gel gradient. Nồng độ biểu thị phạm vi trọng lượng phân tử protein cô lập. Gel gradient được hình thành bởi máy trộn gradient. Một dung dịch acrylamide nồng độ cao được thêm vào tấm thủy tinh, sau đó nồng độ của dung dịch giảm dần theo gradient và kích thước lỗ của gel lớn hơn ở trên cùng và nhỏ hơn ở dưới cùng. Gel cố định chỉ có thể tách protein trong phạm vi tách của nó, không quá lớn cũng không quá nhỏ. Gel gradient không có hạn chế này, trong đó các phân tử lớn được tách ra ở trên cùng và các phân tử nhỏ được tách ra ở dưới cùng. Vì kích thước lỗ chân lông của gel gradient dần dần trở nên nhỏ hơn, nó có tác dụng tập trung vào protein gần kích thước lỗ chân lông mà protein không thể xuyên qua, do đó, một vùng rất hẹp sẽ được hình thành sau khi điện di. Các protein có sự khác biệt nhỏ về trọng lượng phân tử thường không thể tách ra trên gel cố định nhưng có thể phân giải trên gel gradient.

3. Giới thiệu keo dán đúc sẵn do Yeasen

Yeasen Gel Protein Plus đúc sẵn chứa nồng độ gradient và nồng độ cố định, nhiều nồng độ khác nhau có thể đáp ứng nhu cầu điện di protein khác nhau. Được chuẩn bị bằng quy trình chuẩn bị gel độc đáo và có hiệu ứng điện di tuyệt vời. Tương thích với tất cả các loại bể điện di trên thị trường (Bio-RAD, Tanon, Life, v.v.) và có ưu điểm là khả năng thích ứng rộng, độ phân giải cao, độ ổn định cao, dải trong và đồng đều, v.v.

3.1 Yeasen Gel Protein Plus đúc sẵn nâng cấp lên bảng nhựa, chất lượng tốt hơn!

Dễ sử dụng: sẵn sàng sử dụng; Xé băng dính ở dưới cùng của tấm nhựa

Phạm vi ứng dụng rộng rãi: tương thích với protein biến tính và protein tự nhiên

Dải tần rõ ràng: việc xử lý đặc biệt các tấm nhựa làm giảm đáng kể sự hấp thụ protein

Tiết kiệm thời gian: thí nghiệm có thể hoàn thành nhanh nhất trong 18 phút

Đảm bảo chất lượng: đảm bảo tính ổn định giữa các lô nghiêm ngặt

Thời hạn sử dụng dài: có thể bảo quản ở nhiệt độ 4℃ trong 12 tháng

3.2 Các thông số sau đây có thể giúp bạn chọn loại gel phù hợp

Hệ thống đệm điện di: đệm chạy protein biến tính hoặc đệm chạy protein tự nhiên

Số lượng giếng và lượng mẫu nạp: 10 hoặc 15 giếng, kích thước mẫu tối đa lần lượt là 70 μL và 40 μL

nồng độ gel: 8%, 10%, 12%, 15%, 4%-12%, 4%-20%

Bảng 1.Nồng độ gel và phạm vi phân tách tuyến tính

3.3 Hiển thị dữ liệu

Hình 1. Hiển thị dữ liệu

Hình 2. Hiển thị dữ liệu

4. Câu hỏi thường gặp

Câu hỏi 1: Phải đúc sẵn gel được đặt ở nhiệt độ 4℃? Có vấn đề gì không nếu bạn để nó ở nhiệt độ phòng một lúc?

MỘT: Khuyến nghị 4℃, có thể bảo quản trong 12 tháng. Không bảo quản dưới 0℃, có thể bảo quản ở nhiệt độ phòng (25℃) trong 30 ngày.

Q2: Làm thế nào để lựa chọn giữa nồng độ gradient và nồng độ cố định? Trọng lượng phân tử tối thiểu của protein được tách bằng precast là bao nhiêu? gel?

A: Kích thước của sự phân tách protein bằng vật liệu đúc sẵn gel có liên quan đến nồng độ của nó và phạm vi tách biệt tương ứng được thể hiện ở hình trên.

Cố định nồng độ đúc sẵn gel có độ phân giải tốt hơn. Nồng độ gradient đúc sẵn gel có phạm vi tách rộng hơn và phạm vi ứng dụng rộng hơn; Khách hàng nên lựa chọn nồng độ phù hợp theo nhu cầu của mình.

Bê tông đúc sẵn có độ dốc 4%-20% của chúng tôi gel (Cat#36250, Cat#36256) có phạm vi phân tách rộng đối với protein thấp tới 3,5kDa.

Hình 3. Đổ sẵn bê tông dữ liệu gel

Q3: Có phải bê tông đúc sẵn gel phải được trang bị bộ đệm đặc biệt của bạn? Bạn có thể tự làm bộ đệm của mình không?

MỘT: Yeasen đệm đặc biệt (Cat#36236, Cat#36237) và đúc sẵn khả năng ứng dụng gel tốt hơn. Không trộn với các chất đệm khác. Chất đệm có thể được chuẩn bị bằng cách mua thuốc thử, nhưng khách hàng cần sử dụng công thức của chúng tôi, có thể tìm thấy trong phần đúc sẵn có liên quan hướng dẫn sử dụng gel.

Câu hỏi 4: Làm thế nào để phân biệt giữa gel tách và gel cô đặc? Có cần thiết phải điện di điện thế cắt ngang không?

A: Hai thành phần giống nhau, nhưng nồng độ không giống nhau, mắt thường không phân biệt được; Chiều cao của keo cô đặc là 1,5 cm.

Không, phương pháp điện di được khuyến nghị ở mức 150 V và cần 30-40 phút để hoàn tất thí nghiệm.

Câu hỏi 5: Sản phẩm đúc sẵn của bạn có Gel nào phù hợp với mọi loại bể điện di trên thị trường?

A: Vâng, sản phẩm đúc sẵn của chúng tôi gel phù hợp với tất cả các loại bể điện di trên thị trường,

Bio-rad Mini-Protean (Hệ thống II/3 /Tetra) và Tanon VE180 (Lưu ý lắp ráp ngược lại của dải niêm phong);

Công nghệ cuộc sống Novex Mini-cell (sử dụng với vách ngăn đặc biệt);

Chiều rộng tấm gel khác trong bể điện di 10 cm.

5. Chi tiết sản phẩm

Các sản phẩm được cung cấp bởi Yeasen như sau:

Bảng 2.Chi tiết sản phẩm