1. Giới thiệu bối cảnh
Streptavidin là một protein liên kết biotin có nguồn gốc từ Streptomyces avidinii. Liên kết không đặc hiệu của nó thấp hơn nhiều so với avidin, và so với avidin lòng trắng trứng, có điện tích dương ròng ở độ pH trung tính và chứa khoảng 7% carbohydrate, streptavidin có các đặc tính hóa học thuận lợi hơn như hầu như không có điện tích ròng ở độ pH trung tính và không có carbohydrate. Do đó, nó được sử dụng rộng rãi như một chất thay thế cho avidin.
2. Tính năng sản phẩm
Cấu trúc tetramer: Streptavidin tồn tại dưới dạng homotetramer có kích thước 66KDa;
Độ ái lực cao:Mỗi phân tử streptavidin có khả năng liên kết đặc hiệu với bốn phân tử biotin, với ái lực giữa chúng cực kỳ mạnh;
Ứng dụng rộng rãi: Hằng số phân ly của phức hợp streptavidin-biotin nằm trong phạm vi nanomolar, một tính chất thường được sử dụng trong các ứng dụng sinh học phân tử; Trong hầu hết các ứng dụng, nó có thể được sử dụng thay thế cho các protein kháng thể;
Chiết xuất chất lượng cao: Thu được bằng cách tinh chế từ Streptomyces avidinii;
Hình 1. Streptavidin
Sản phẩm Ứng dụng
Ứng dụng 1: Nhựa tinh khiết với streptavidin
1) Nguyên lý ứng dụngDựa trên sự tương tác giữa streptavidin và biotin, streptavidin có liên kết chéo cao với 6% agarose và quy trình chế biến độc đáo mang lại cho nó các tính chất lý hóa cao hơn, cho phép nó chịu được áp suất cao hơn. Nó có thể đạt được quá trình tinh chế protein mục tiêu ở tốc độ dòng chảy tương đối cao, làm cho nó phù hợp hơn cho quá trình tinh chế protein công nghiệp quy mô lớn.
Hình 2. Nguyên lý tinh chế nhựa streptavidin
2）
Hình 3. Protein tinh khiết bằng nhựa streptavidin
3）Câu hỏi thường gặp| Câu hỏi | Lý do có thể | Giải pháp được đề xuất |
| Áp suất ngược của cột quá cao | Đóng gói bị chặn | Làm sạch nhựa. |
| Đệm phân hủy chứa các hạt rắn nhỏ, nên lọc bằng màng lọc 0,22μm hoặc 0,45μm trước khi nạp hoặc ly tâm để loại bỏ. | ||
| Mẫu quá nhớt. | Mẫu chứa nồng độ axit nucleic cao, kéo dài thời gian phân hủy cho đến khi độ nhớt giảm hoặc thêm DNase I (nồng độ cuối cùng là 5 μg/ml), Mg2+ (nồng độ cuối cùng là 1 mM), ủ trong đá trong 10-15 phút | |
| Đệm quá nhớt | Thuốc thử hữu cơ hoặc thuốc thử ổn định protein (như glycerol, v.v.) có thể làm tăng áp suất ngược, giảm lưu lượng hoạt động. | |
| Protein không có mục đích trong thành phần rửa giải | Sự phân cắt quá mức làm biến tính protein quan tâm | Sử dụng điều kiện ly giải nhẹ. Điều kiện thực nghiệm dựa trên kinh nghiệm. |
| Protein mục tiêu kết tụ để tạo ra kết tủa | Thêm DTT vào dung dịch tiền ly giải tế bào ở nồng độ cuối cùng là 1-10 mM. | |
| Protein mục tiêu không được giải phóng hoàn toàn | Thể tích rửa giải quá nhỏ | Tăng thể tích dung dịch rửa giải và giảm tốc độ dòng chảy rửa giải. |
| Độ pH của dung dịch rửa giải thay đổi | Sử dụng dung dịch rửa giải mới chuẩn bị | |
| Thời gian ủ dung môi không đủ | Tăng thời gian ủ của đệm rửa giải với gel. |
Ứng dụng 2: Nhóm huỳnh quang và liên hợp enzyme gắn nhãn streptavidin.
Hình 4. Các Streptavidin liên hợp khác nhau
1）Streptavidin liên hợp với enzyme- Streptavidin liên hợp với Horseradish Peroxidase (HRP)
Ⅰ.Được sản xuất bằng streptavidin có độ tinh khiết cao và peroxidase cải ngựa thông qua kỹ thuật liên hợp đặc biệt;
Ⅱ. Duy trì hoạt động đặc hiệu cao của peroxidase. Ứng dụng: Miễn dịch mô hóa học (IHC), Miễn dịch tế bào hóa học (ICC), Lai tạo tại chỗ (ISH), v.v.
Nồng độ khuyến nghị: 0,01-0,1 µg/mL cho WB (phương pháp phát quang hóa học); 1-2µg/mL cho ELISA, HC/ICC, WB (phát triển màu chất nền)
- Phosphatase kiềm (AP) liên hợp Streptavidin
Ⅰ.Thích hợp cho phân tích pha rắn, hệ thống nhuộm mô/tế bào và ứng dụng blot, với liên kết cộng hóa trị cụ thể;
Ⅱ.Chất liên hợp ổn định và có hoạt tính cao.
Ứng dụng: Miễn dịch mô hóa học (IHC), Miễn dịch tế bào hóa học (ICC), Xét nghiệm miễn dịch liên kết enzyme (ELISPOT), Xét nghiệm miễn dịch hấp thụ liên kết enzyme (ELISA), Lai tại chỗ (ISH) và ứng dụng blot.
Nồng độ khuyến nghị: 1-2 µg/mL cho ELISA, IHC/ICC; 0,1-1 µg/mL cho WB
2）Streptavidin liên hợp với huỳnh quang- Fluor® Fluorescein liên hợp Streptavidin
Ⅰ.Được khuyến nghị cho xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang thường quy;
Ⅱ. Độ tinh khiết cao với đặc tính liên kết không đặc hiệu rất thấp;
Ⅲ.Có ái lực cao với biotin;
Ứng dụng: Miễn dịch huỳnh quang (IF), Lai tại chỗ (ISH), Phân tích tế bào dòng chảy (Flow Cyt).
Nồng độ khuyến nghị: 0,5-2 µg/mL (IF)
- Thuốc nhuộm DyLight™ Streptavidin liên hợp
Ⅰ.Có thể được sử dụng để phát hiện kháng thể thứ hai biotin hóa và các phân tử lớn khác trong ứng dụng miễn dịch huỳnh quang, lai tại chỗ hoặc đo lưu lượng tế bào;
Ⅱ. Độ tinh khiết cao với đặc tính liên kết không đặc hiệu rất thấp;
Ⅲ.Có ái lực cực cao với biotin;
Ⅳ.Độ ổn định quang cao, không nhạy cảm với pH và huỳnh quang sáng hơn;
Ứng dụng: Miễn dịch huỳnh quang (IF), Lai tại chỗ (ISH), Phân tích tế bào dòng chảy (Flow Cyt).
Nồng độ khuyến nghị: 0.5-2 µg/mL (IF)
Thông tin sản phẩm
| Dòng sản phẩm | Số sản phẩm | Tên sản phẩm | Đặc điểm kỹ thuật |
| Thuốc Streptavidin | 35099ES | Streptavidin (Bột) | 100mg/1g |
| 35101ES | Streptavidin (5mg/ml) | 1mg/5mg/10mg/100mg/1g | |
| Streptavidin liên hợp với enzyme | 35105ES | HRP Streptavidin | 100 μL |
| 35106ES | Thuốc Streptavidin AP | 100 μL | |
| Streptavidin được gắn nhãn huỳnh quang | 35102ES | Thuốc DyLight 405™ Streptavidin | 100 μL |
| 35103ES | YSFluorTM Streptavidin liên hợp 488 | 100 μL | |
| 35104ES | YSFluorTM Streptavidin liên hợp 647 | 100 μL | |
| 35107ES | YSFluorTM Streptavidin liên hợp 584 | 100 μL | |
| 35108ES | Streptavidin liên hợp Cy3 | 1mg | |
| Dòng sản phẩm thanh lọc Streptavidin | 20512ES | Nhựa Streptavidin Agarose 6FF | 5 mL/5 mL×5/100 mL |
| 20513ES | Cột sắc ký BiotSep Streptavidin 6FF, 1ML | 1 mL/1 mL×5 | |
| 20514ES | Cột sắc ký BiotSep Streptavidin 6FF, 5ML | 5mL/5mL×5 |