各位朋友，在蛋白免疫印迹实验中，面对各式各样的Loading Control和Epitope Tagging Antibodies，您是否会手足无措呢？蛋白在生物体中由管家基因编码，在多种组织中稳定表达，用于验证免疫学实验是否正常进行，以及作为蛋白表达的半定量检测标准。那么，如何正确选择内参抗体呢？可以参考以下几点。

一、样本物种来源

对于哺乳动物组织或细胞样本，一般选择β-actin、α-tubulin、GAPDH、Lamin-B、Histone H3、Na+/K+-ATPase。
对于植物来源的样品，一般选择植物肌动蛋白、Rubisco等。
对于其他研究较少的样本，通过查阅相关文献或数据库，选择合适的蛋白质作为内参。

II. 目标蛋白的分子量

确保目标蛋白的分子量与上样对照的分子量不同为防止检测时受到干扰，建议加样量不要超过5KDa。例如，如果目标蛋白为40KDa，则不宜选择β-actin（42KDa）作为加样对照，可以考虑使用GAPDH（36KDa）或β-tubulin（55KDa）作为加样对照。

III. 内参蛋白的表达位点

因此，选择加载控制蛋白质因蛋白质提取部位而异。例如，当分别提取细胞质和核蛋白而不是总蛋白时，选择上样对照内参蛋白应选择相应位点表达的蛋白，如H3在细胞核内高表达且稳定，理论上细胞质中不表达，所以对于细胞质蛋白的提取，不应以H3为内参蛋白，而应选择β-actin、GAPDH、α-Tubulin等在细胞质中表达的蛋白作为内参蛋白。

注意：使用时避免以下情况 上样对照抗体

亚细胞定位	上样对照蛋白	分子量（KDa）	笔记
细胞质，整个细胞	β-肌动蛋白	四十二	不适用于核提取物。β-肌动蛋白是染色质重塑复合物的组成部分；可能不适合研究对象年龄差异较大的情况。
	α-微管蛋白	55	不适用于研究对象年龄差异较大的情况。微管蛋白的表达会随着抗菌和抗有丝分裂药物而改变，因此不适用于添加抗癌和抗真菌药物的情况。
	β-微管蛋白	55
	磷酸甘油醛脱氢酶	三十六	细胞缺氧会导致GAPDH表达增多，因此不适合进行与氧气相关的研究。糖尿病等因素可导致GAPDH表达增多。
	纽蛋白	117	可以作为大分子量蛋白质的参考。
线粒体	COXIV系列	15-17	该系列蛋白主要集中在15-17KDa，如果目标蛋白分子量接近，可以考虑使用其他内参抗体。
线粒体	热休克蛋白60	60
核	电压模拟转换器1/2	31-37	该系列蛋白质主要集中在31-37KDa。
	层蛋白B1	66	不适用于胚胎干细胞，不适合作为上样对照在细胞凋亡实验中。
	增殖细胞核抗原	三十六	不适用于非增殖细胞。
	三丁基苯胺	33-43	TBP在人类中为37-43KDa，在小鼠和大鼠中为33-36KDa，不适合用于细胞凋亡实验。
	YY1	65-70
	组蛋白H3	17	大多数蛋白质的分子量约为17KDa。如果目标蛋白质分子量接近，请考虑使用其他负载对照抗体。
全血、血清、血浆	转铁蛋白	77	表达受某些疾病状态和治疗的影响，例如视黄酸。
全血、血清、血浆	白蛋白	66	含量极高，WB实验时注意减少上样量。

标记抗体一起使用效果更佳

在研究蛋白质相互作用的实验中，如pull-down，可以通过分子生物学的方法将表位标签融合到目标蛋白的N端或C端。常用的表位标签包括His、HA、Myc、GST等。这些表位标签通常不影响目标蛋白的生物活性和细胞内定位。表位标签的出现为科学研究和工业生产提供了便利。

表位标签	标签序列	分子量（钾通道）
HA 标签	异丙基苯并噻嗪	1.1
Myc标签	艾克斯	1.2
旗帜标签	韓國	1
GST 标签	-	二十六
GFP标签	-	26.9
V5标签	国标	1.4
麈	凯塔克费QHMDS	1.8
电子标签	人人都爱的	1.4

产品信息

类型	产品名称	分子量（钾通道）	产品编号
上样对照抗体	β-肌动蛋白，小鼠 mAb	四十二	30101ES
	β-肌动蛋白，兔多克隆抗体	四十二	30102ES
	GAPDH（克隆：1A6），小鼠 mAb	三十六	30201ES
	GAPDH，兔多克隆抗体	三十六	30202ES
	α-微管蛋白，小鼠 mAb	50-55	30304ES
	β-微管蛋白，小鼠 mAb	50-55	30301ES
	β-微管蛋白，兔多克隆抗体	50-55	30302ES

选择加载控制和表位标记抗体的指南

标记抗体一起使用效果更佳

产品信息

询问