在细胞培养过程中，经常需要进行细胞消化，所以用于消化细胞的胰蛋白酶对于细胞培养来说将是不可缺少的，也是非常重要的，它会影响细胞的生长状态。

胰蛋白酶大致可分为两种，一种是重组胰蛋白酶，一种是非重组胰蛋白酶。

• 非重组胰蛋白酶是从动物提取的，具有动物来源，也是传统用途的胰蛋白酶，常见于动物消化系统，直接从牛或者猪的胰腺组织中提取。
• 重组胰蛋白酶是利用基因重组技术生产的，并非源自动物。

产品介绍及应用

非重组胰蛋白酶（动物来源）

产品特点：

非重组胰蛋白酶（又称胰蛋白酶）是从牛、羊、猪的胰腺中提取的丝氨酸蛋白水解酶，可特异性地裂解带正电荷的赖氨酸和精氨酸的羧基末端，经多重结晶纯化，再采用层析和超滤技术制备而成，来源具有动物性。

由于胰酶能作用于跨膜蛋白和细胞外基质中的蛋白，如钙粘蛋白、整合素等，现常用来解离组织和单层细胞。胰蛋白酶虽然能水解细胞间的蛋白水解物使细胞离散，但不同组织或细胞对胰蛋白酶的反应不同，而分散细胞的活性也与胰蛋白酶的浓度、反应温度和时间有关，在pH为7～9、温度为37℃的条件下，胰蛋白酶分散细胞的能力最强。在胰蛋白酶溶液中加入EDTA作为螯合剂，将钙、镁结合成六齿结构，可减弱细胞与细胞间的粘附，增强胰蛋白酶对水解靶向肽键的获取。

胰蛋白酶早期在生物制药领域的主要应用是生产胰岛素，很快也应用于其他细胞培养领域。动物胰酶常用于血清培养，不同细胞加入的胰蛋白酶成分和浓度不同。

应用

1. 胰岛素和灭活疫苗的生产；
2. 组织细胞的分离和培养；
3. 临床和外科用途；
4. 食品工业中的加工助剂；

重组胰蛋白酶（非动物来源）

产品功能

重组胰蛋白酶是利用基因工程技术生产的酶，具有稳定性好、纯度高、无动物来源等优点。现代生物制药生产过程中，使用含有动物来源的原料，可能会将潜在的引起人畜共患疾病的病毒源带入产品中，如疯牛病BSE、口蹄疫病毒等，为了减少污染源，通过基因工程技术合成胰蛋白酶，解决了传统的猪或牛胰蛋白酶可能带来的病毒污染风险。

重组胰蛋白酶多为重组大肠杆菌或酵母系统重组表达，经多步层析纯化，无糜蛋白酶等杂酶污染。重组胰蛋白酶具有与天然提取的胰蛋白酶相同的性质，氨基酸序列与猪胰蛋白酶序列同源，能特异性地切割多肽链中赖氨酸和精氨酸残基上的羧基。由于其无动物源污染、纯度高，在药物开发、生物化学研究、蛋白质组学等领域有广泛的应用。

市场上主流的重组胰蛋白酶是利用DNA重组技术在大肠杆菌或酵母中表达的重组猪胰蛋白酶，其氨基酸序列与猪胰蛋白酶完全一致，具有与天然胰蛋白酶相同的活性和特异性。它由223个氨基酸组成，含有6对二硫键。该酶含有两种活性形式的胰蛋白酶：α-胰蛋白酶和β-胰蛋白酶。其活性受丝氨酸蛋白酶抑制剂如PMSF和TLCK、金属离子螯合剂如EDTA等抑制。重组胰蛋白酶用于无血清培养，与胰蛋白酶一样，不同的细胞加入不同成分和浓度的胰蛋白酶。

应用

1. 疫苗和重组胰岛素生产；
2. 准备用于细胞分析的组织样本；
3. 免疫细胞治疗；
4. 生物制药生产；
5. 蛋白质序列、结构和组学研究

产品详细比较

产品	非重组胰蛋白酶（动物来源）	重组胰蛋白酶（非动物来源）
物品	40123ES（酚红(-),EDTA(+)） 40124ES（酚红(-),EDTA(-)） 40126ES（酚红(+),EDTA(-)） 40127ES（酚红(+),EDTA(+)）	40512ES 20416ES（MS-安全）
来源	取自牛、猪、羊的胰腺	大肠杆菌（40512ES） 毕赤酵母（20416ES）
安全	潜在病原体污染	无外源病毒污染
纯度	1:250胰蛋白酶溶液中90%以上是杂质	高纯度（β-胰蛋白酶≥70%， α-胰蛋白酶≤20%）
消化细胞类型	大多数连续的强粘附细胞系	大多数连续的强粘附细胞系
糜蛋白酶限量	每 2500 单位胰蛋白酶中所含糜蛋白酶不得超过 50 单位。	无黑芥子酶等杂质酶污染
具体活动	≥2500 USP 单位/毫克蛋白质	≥3800 USP 单位/毫克蛋白质
消化作用	不稳定	消化能力强，酶含量低
自切率	容易自切割并产生自切割碎片，影响质谱分析结果	容易自切割并产生自切割碎片，影响质谱分析结果
溶解液	含或不含 Ca2+、Mg2+ 的 HBSS 溶液	含有或不含 Ca2+ 和 Mg2+ 的 HBSS 溶液（40512ES）； 1 mM 盐酸（20416ES）
细胞存活	普通的	普通的
是否需要冻融	是的	是的

除了细胞消化中最常用的胰蛋白酶外，还有许多其他类型的消化酶产品也可以使用，例如以下。

关于胶原酶的应用领域

胶原酶是一种能特异识别Pro-X-Gly-Pro序列并裂解该序列中中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间肽键的肽酶内切酶，胶原酶是唯一能降解三链超螺旋结构的天然胶原原纤维的蛋白酶，并能有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质中的其他蛋白质、多糖和脂质，使本产品非常适合于组织消化。

1. 胶原酶I.，常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制剂；
2. 胶原酶II，用于制备心脏、骨骼、肌肉、肝脏、甲状腺和软骨等组织来源的细胞；
3. 胶原酶III，常用于乳腺细胞的制备；
4. 胶原酶IV，常用于胰岛细胞的制备，或用于需要维持受体完整性的细胞制备实验。
5. 胶原酶V.，适用于分离胰岛细胞和结缔组织细胞。

关于复合胰蛋白酶的应用领域

Accutase 是一种具有蛋白水解和胶原酶活性的细胞消化液，是胰蛋白酶-EDTA消化液的完美替代品，可用于消化传统组织培养容器和贴壁培养容器中的细胞。Accutase 适用于组织解离和细胞分离，因为分离的细胞保留了完整的表面抗原，不含任何动物或细菌来源的成分，可满足后续实验的要求，如细胞表面标记、病毒生长分析、流式细胞术和生物反应器相关检测。

胰酶替代品的应用领域

PerfCell Tryzyme™ Express酶产品纯度高，对细胞损伤小，消化温和，可在室温下稳定保存，是不同细胞系培养的理想消化酶。该类产品无需使用胰蛋白酶抑制剂进行灭活，且不含动物来源，对一些无血清生长贴壁细胞实验更加友好。

关于dispase的应用领域

Dispase II Dispase II 是一种非特异性金属蛋白酶，在细胞生物学中常用于从不同的组织或器官中分离单个细胞，并用于后续的细胞培养，如原代细胞的分离、细胞传代等，也可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。与细胞生物学中常用的其他蛋白酶（例如胰蛋白酶、胶原酶、链霉蛋白酶等）相比，此酶具有以下优点：

1. 快速、有效、温和的细胞消化酶，对细胞损伤小，且能保持细胞膜的完整性；
2. 来源于细菌，无支原体或其它动物病毒污染；
3. 稳定性强，不受温度、pH及血清成分的影响；
4. 可用于多种类型的组织和细胞的分离。

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目录编号	产品名称	尺寸
40123ES60	PerfCel™l 胰蛋白酶-EDTA（0.25%），酚红	100 毫升
40124ES60	PerfCell™ 胰蛋白酶-不含 EDTA（0.25%）、不含酚红	100 毫升
40126ES60	PerfCell™ 胰蛋白酶 (0.25%)、酚红	100 毫升
40127ES60	PerfCell™ 胰蛋白酶-EDTA（0.25%）、酚红	100 毫升
40101ES25	胰蛋白酶1：250（粉末）	25 克
40512ES10/60	PerfCell™重组胰蛋白酶（粉末）	10 毫克/100 毫克
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40134ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 毫升
40135ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 毫升
40506ES60	艾库特	100 毫升
40104ES60/80	分散酶Ⅱ	100毫克/1克