支原体又称胸膜肺炎样生物（PPLO），是迄今为止发现的最小、最简单的原核生物，没有细胞壁。它们的直径为 0.1 至 0.3 μm，可以通过过滤器，并表现出高度多形性。它们是哺乳动物细胞培养中比较常见且难以检测的细菌污染物
支原体污染对细胞培养有多种不良影响，已成为细胞培养实践中严重的问题，保守估计常规细胞培养中支原体污染率达15%~35%，严重干扰了实验结果的可信度。
细胞培养中约95%的支原体污染主要由莱氏胆管支原体、精氨酸支原体、口腔支原体、发酵支原体、人型支原体和猪鼻支原体引起。在培养基上，支原体菌落形成“煎蛋”状。细胞培养上清液和细胞膜为支原体生长提供了适宜的环境，寄生在细胞表面的支原体可以穿透宿主细胞膜。
支原体污染的主要来源包括：细胞培养基或其成分（如培养基原料、血清和其他试剂）、实验室人员、细胞培养箱、液氮储罐、空气中的颗粒物和气溶胶、抗生素的过度使用、密封不当的细胞培养物以及已经被支原体污染的细胞。
同时这些污染相应的危害包括：因后续纯化过程中不能有效去除支原体，导致细胞产品或以细胞为培养基生产的产品批量报废；污染与污染物质接触的所有相关设备设施、中间产品或最终产品；导致其他正常细胞受到支原体的污染；导致重要细胞或病毒种子库因支原体污染而报废；迫使实验室因处理支原体污染而停止生产或实验操作；导致支原体产生耐药性，使其更加难以根除；扩大支原体污染的范围；对实验室内其他细胞培养造成威胁。
因此必须定期进行支原体检测及清除，确保细胞培养体系中不存在支原体，这对于科研的正常进行至关重要。
支原体 检测
支原体是一种比较常见但通常难以去除的污染类型。对于涉及细胞培养的生物制剂工艺，法规要求“不得有支原体污染”。
- 2020年版《中国药典》三部《生物制品生产与检测用动物细胞基质的制备与质量控制》规定，对于生产所用的细胞，必须对主细胞库（MCB）、工作细胞库（WCB）、生产终止细胞（EOPC）进行支原体检测。
- FDA《行业指南：用于生产传染病病毒疫苗的细胞基质和其他生物材料的表征和鉴定》规定，必须对原材料、病毒种子、未处理的收获液和其他此类材料进行支原体控制。
- ICH Q5D“用于生产生物技术/生物产品的细胞基质的衍生和表征”也提到必须对原材料、病毒种子、未处理的收获液和其他此类材料进行支原体控制。
图1 国内外法规要求的支原体污染检测点
传统的支原体检测方法主要有培养法和指示细胞法，然而这两种方法由于检测周期长或存在灵敏度问题，导致企业生产或产品发布周期延长。随着细胞和基因治疗的发展，行业对于支原体检测的时效性和灵敏度要求越来越严格，较短的保质期不足以支撑如此长的检测周期，因此快速NAT（核酸检测）方法在众多支原体检测方法中脱颖而出。
图2 国内外法规列出的支原体检测方法
基于 NAT（核酸扩增技术），
该产品用于快速定性检测生产原料、细胞库、病毒种子、病毒或细胞收获液、治疗细胞中潜在的支原体污染，主要用于生物制药的研究、开发、生产和放行过程。
产品资质
法规遵从性： 依据EP2.6.7、JP G3、USP 63药典要求验证，符合国际权威机构标准。
审计合规性： 产品生产符合ISO13485质量管理体系标准，并有完善的审核文件支持。
质量保证： 试剂盒所需酶原料全部自主生产并已实现产业化，保证供应稳定。
技术经验积累： TaqMan方法有着坚实的技术基础，试剂盒灵敏度可以达到10CFU/mL及以下。
关注产品性能： Taq酶抗体库，采用双重阻断抗体，增强了试剂盒的特异性、灵敏度和稳定性。
产品特性
多种检测类型： 优化的 TaqMan 探针可以检测多达 183 种支原体。
便于使用： 样品准备和测试的总时间不到 3 小时，无需等待培养方法所需的 28 天。
高灵敏度： 检测限低至 10 CFU/mL，使其成为直接培养方法的可行替代方案。
高特异性： 引物和探针针对 16S rRNA 进行设计，确保不会与梭菌和乳酸杆菌等密切相关的物种发生交叉反应。
高安全性： 试剂盒中的阳性对照（PC）无感染性，完全消除了污染风险。
抗干扰能力强： 内控（IC）的引入有助于排除样品干扰和反应制备中的异常，有效避免假阴性。
图 3 使用支原体实时 qPCR 检测试剂盒进行支原体检测的工作流程
2.MycAway™ Plus-Color一步法支原体检测试剂盒采用独特的等温扩增技术，颜色辨别能力更强，从蓝紫色（阴性）到天蓝色（阳性）的变化，肉眼更容易辨别，并含有抗污染成分，杜绝假阳性的发生。
图4：使用MycAway™ Plus-Color一步法支原体检测试剂盒进行支原体检测的操作流程
3.GMyc-PCR 支原体 检测成套工具与传统一步法PCR检测方法不同，引物数量由一对增至三对，针对支原体16S和23S rRNA保守区域进行嵌套PCR扩增，不仅减少了非特异性产物，而且显著提高了产物的灵敏度，可以检测到少至单拷贝的支原体。
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图5 GMyc-PCR支原体检测试剂盒检测支原体操作流程
支原体去除
在细胞培养过程中，定期检测可以有效预防大规模支原体污染。但如果细胞已经受到支原体污染，则需要及时处理。最佳做法是对受污染的细胞进行高压灭菌，然后丢弃，以避免污染其他清洁细胞系。如果受污染的细胞特别有价值，需要去除支原体污染，可以使用抗生素组合来达到这一目的。由于支原体缺乏细胞壁，传统抗生素对其通常无效。因此，选择合适的支原体去除试剂至关重要。
产品特性
低毒性： 对细胞的毒性极小，确保不会干扰后续的细胞实验，如转染和活力测定。
高稳定性： 该试剂可在-20℃下长期保存并保持高效性。
便于使用： 只需将产品添加到受支原体污染的培养基中并进行孵育即可。
速效： “立即见效”，最快 3 天内即可看到效果。
广谱： 能够去除实验室中发现的大多数支原体类型。
图 6.支原体去除试剂细胞毒性试验图示
支原体预防
在细胞培养过程中，支原体污染的情况时有发生，但由于其独特的特性，用肉眼或显微设备很难发现，因此做好支原体防治工作显得尤为重要，在培养基中添加支原体防治试剂可以有效预防支原体污染。
目前实验室支原体主要来源于：细胞间的交叉污染、工作环境或实验室设备的污染、实验人员无菌操作不当、培养基或试剂被污染、原有组织或器官被支原体污染。我公司研发的支原体预防产品系列
产品信息
| 产品 | 目录编号 | 产品名称 | 产品规格 |
| 样品前处理试剂盒 | 18461ES | 25吨/100吨 | |
| 18467ES | MolPure® Mag48 样品制备套件 FN | 3×16T/ 6×16T | |
| 核酸提取仪 | 80511ES | 48通道自动核酸提取仪 | 48 通道 |
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支原体检测试剂盒 | 40619ES | MycAway® 支原体实时 qPCR 检测试剂盒 （2G）
| 25吨/100吨 |
| 40612ES | 25吨/100吨 | ||
| 40601ES | 10次检测/20次检测 | ||
| 支原体去除试剂 | 40607ES | 1毫升/5×1毫升
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支原体预防试剂 | 40608ES | 迈凯威商标 预防（2000×）-支原体预防试剂 | 1毫升/5×1毫升
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| 40605ES | 迈凯威商标 喷雾（即用型） | 500毫升/2×500毫升/10×500毫升
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| 40609ES | 100毫升 | ||
| 40610ES | 100毫升 |