背景——什么是 ROS

活性氧(ROS)是细胞代谢的正常产物——一类含氧的生物活性分子,包括过氧化物、超氧化物、羟基自由基、单线态氧和α氧等,在细胞信号通路和转录中起着重要的调控作用,如细胞凋亡、自噬、衰老、癌症等。

ROS 浓度对细胞的影响——为什么要检测 ROS?

在活性氧水平较低时,ROS作为“氧化还原信使”参与细胞内信号传导与调控;但在环境应激(如电离辐射、热暴露、紫外线、缺氧等)下,ROS水平急剧升高,可能造成DNA损伤、抑制基因表达、导致蛋白质错误折叠甚至影响蛋白质合成,对细胞结构造成严重破坏,即所谓的氧化应激。

一旦 ROS 水平超过内源性抗氧化防御的能力,氧化还原平衡就会被破坏,导致 DNA、脂质、蛋白质的结构或构象变化,并最终导致细胞死亡。

ROS水平是细胞因正常生理功能和环境因素造成损伤的重要信号,检测细胞内ROS水平对于了解一些药物的信号通路和潜在作用机制具有重要意义。因此,选择合适的探针检测ROS在疾病机制研究和药物筛选中有着重要的作用。

ROS 检测如何进行?

活性氧检测试剂盒 (CAT# 50101ES01) 是基于荧光染料 DCFH-DA(2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯)的荧光强度变化来量化细胞内活性氧水平的最常用方法。

DCFH-DA本身不带荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞后可被细胞内的酯酶水解生成DCFH。但DCFH不能穿透细胞膜,很容易被探针标记并在细胞内聚集。细胞内的活性氧能够将不带荧光的DCFH氧化成带荧光的DCF。DCF绿色荧光的强度与细胞内活性氧的水平成正比,通过检测DCF的荧光即可知道细胞内活性氧的水平。

在激发波长为488nm、发射波长为525nm的条件下,利用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测DCF荧光,从而测定细胞内活性氧水平。

使用此产品的客户发表的文献(部分示例)

截止2022年9月,ROS活性氧检测试剂盒(50101ES01)共发表文章164篇,总影响因子913.72。

ROS产生对巨噬细胞极化及肿瘤细胞杀伤的影响(PMID: 35665496; PMID: 35301299; PMCID:PMC8931093PMCID:PMC9353410。

常问问题

Q1:哪些样品适合做ROS测试?

A1:一般用于哺乳动物细胞的检测,只适合活细胞或者活体动物体内活性氧的检测。

问题2:ROS检测试剂盒适合检测血清还是血浆?

A2:不适合检测血清或组织匀浆中的ROS。可以尝试新鲜组织制备的单细胞悬浮液。

Q3:可以检测植物或细菌吗?

A3:只适合活细胞或者生物体内的活性氧检测,因为氧的羟基自由基和超氧自由基的半衰期很短,只适合活细胞的检测。植物或者细菌,需要制备原生质体后才能进行检测,本试剂盒无法检测生物体内的ROS。

Q4:如何避免过多的荧光背景?

A4:探针孵育后,务必洗掉任何未进入细胞的剩余探针。

Q5:我可以检测正常细胞中的ROS含量吗?

A5:正常细胞内活性氧的含量很低,检测效果可能不是很好。

Q6:阴性和阳性荧光值相同,这是怎么回事?

A6:可能是添加的探针浓度太大导致的,建议降低探针浓度5-7.5μM,孵育时间:15-20分钟。

Q7:阳性对照的荧光很弱,这是怎么回事?

A7:阳性对照Rosup通常浓度为100μM,在刺激后30分钟-4小时可观察到活性氧明显增加。活性氧阳性对照在不同细胞间的效果可能存在较大差异。若刺激后30分钟内未观察到ROS增加,可适当延长诱导时间或增加Rosup浓度。

A8:同一个探头,不分次,前5次效果很好,这次却不染色,这是怎么回事?

Q8:1.细胞状态不佳,导致染色效率低;2.阳性药物诱导时间太短,37℃避光孵育30min-4h即可明显升高活性氧水平;3.探针冻融次数超过4次,染色效率降低,荧光信号不稳定(时强时弱,易猝灭)。建议将探针分装后避光保存于-20℃冰箱中,避免反复冻融。

Q9:可以使用哪些仪器进行测试?

A9: 荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等都可以检测荧光值。

客户使用该产品发表的科研成果(部分)

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[2] Zhang M 等人。光激活沉默 NK 衍生外泌体 (LASNEO) 招募免疫细胞以协同消除肿瘤。A​​dv Sci (Weinh)。2022 年 8 月;9(22):e2201135。doi:10.1002/advs.202201135。电子版 2022 年 6 月 4 日。 影响因子:16.806

[3] Zhang D 等。基于微藻的口服微载体对肠道菌群稳态和癌症肠道保护作用 放射治疗。 Nat Commun。2022 年 3 月 17 日;13(1):1413。doi:10.1038/s41467-022-28744-4。PMID:35301299。 影响因子:14.919

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[8] 郝丁,等人。间充质干细胞封装在活性氧清除和产生氧气的可注射水凝胶中用于心肌梗死治疗。化学工程杂志。2022.133511:1385-8947。  影响因子:13.273

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[12] Gao J 等人。针对线粒体的超分子“纳米船”同时抑制双重能量代谢,用于肿瘤选择性和协同化放疗。Theranostics。2022 年 1 月 1 日;12(3):1286-1302。PMID:35154487。   影响因子:11.556

[13] Zhong D 等人。磷酸钙工程光合微藻通过原位调节缺氧和级联放射光疗来对抗缺氧肿瘤。Theranostics。2021 年 1 月 22 日;11(8):3580-3594。PMID:33664849。 影响因子:11.556

[14] Sun J 等人。稳定/固化城市固体废物焚烧飞灰的细胞毒性。J Hazard Mater。2022 年 2 月 15 日;424(Pt A):127369。doi:10.1016/j.jhazmat.2021.127369。电子版 2021 年 9 月 29 日。PMID:34879564。  影响因子:10.588

[15] Zhu C 等。多功能热敏水凝胶通过极化巨噬细胞和清除 RONS 来调节骨关节炎的微环境。纳米生物技术杂志。2022 年 5 月 7 日;20(1):221。 影响因子:10.435

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[17] He J 等人。金银纳米壳促进耐药细菌感染的伤口愈合,并可通过表面增强拉曼散射成像进行监测。生物材料。2020 年 3 月;234:119763。PMID:31978871。   影响因子:10.317

[18] Cheng Q 等人。纳米治疗剂干扰细胞氧化还原稳态,大大改善光动力疗法。生物材料。2019 年 12 月;224:119500。doi: 10。1016/j.biomaterials.2019.119500。电子版于 2019 年 9 月 17 日出版。PMID:31557591。  影响因子:10.273

[19] 钟德等。激光引发聚集立方α-Fe2O3@Au nano用于磁共振成像和光热/增强辐射协同治疗的复合材料。生物材料。2019 年 10 月;219:119369。PMID:31351244。   影响因子:10.273

[20] Sun C 等人。硒氧化物消除可控制氧化应激以提高抗肿瘤功效。生物材料。2019 年 12 月;225:119514。doi:10.1016/j.biomaterials.2019.119514。电子版 2019 年 9 月 24 日。PMID:31569018。    影响因子:10.273

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活性氧检测试剂盒

50101ES01

1 套试剂盒(1000 次测试)

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