快速PNGASE F，仅在10分钟内完成脱糖基化

随着糖蛋白质组学和抗体药物研究的快速发展，糖基化修饰也备受关注。细胞与细胞、细胞与病原体之间的接触主要通过糖与蛋白质的相互作用完成，而糖基化决定了糖复合物的黏附性质。在IgG中，Fc区Asn297处保守的N连接糖基化对其活性也至关重要。此外，一些抗体还具有额外的N-糖链，它们与Fc区Asn297处的保守位点一起影响抗体的识别、半衰期和免疫应答。

蛋白质糖基化是一种复杂的翻译后修饰，涉及蛋白质特定位点糖链的连接。根据糖链的类型，糖蛋白分为N连接糖蛋白、O连接糖蛋白等；此外，蛋白质糖基化还受宿主细胞类型和发酵条件（如培养基、pH值、温度等）的影响。因此，糖蛋白的糖基化模式通常具有异质性，包括糖基化位点、糖基化程度以及糖链的具体结构，使糖链分析和结构表征工作极具挑战性。为获得最大量的糖链结构信息，糖链分析的主要策略是先从蛋白质中释放出糖链，然后再进行详细的分析和表征。在这一策略中，高效、准确、稳定的去糖基化方法至关重要。

目前，酶法被广泛用于去糖基化。

根据糖链类型，糖蛋白可分为N连接糖肽和O连接糖肽。对于N连接糖肽，常用的酶包括肽N-糖苷酶F（PNGase F）、内切糖苷酶H（Endo H）和内切糖苷酶S（Endo S）。PNGase F水解GlcNAc-Asn键，可去除高甘露糖、复杂和混合糖链。Endo H可切割N-糖链五糖核心内的糖苷键。Endo S可特异性地从天然IgG重链的壳二糖核心中切割N连接糖。

图 1. PNGase F、Endo H 和 Endo S 的切割位点。

其中，PNGase F 是去除几乎所有N-连接糖蛋白中的寡糖，可切割由天冬酰胺连接的高甘露糖、混合糖、复合糖蛋白，特异性地去除N连接糖链。切割位点为：最内层的N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）与天冬酰胺残基之间的酰胺键，同时将酶解后蛋白上的天冬酰胺转化为天冬氨酸。

当α1-6岩藻糖位于GlcNAc核心时，PNGase F也能切割；只有当α1-3岩藻糖位于GlcNAc核心（常见于植物和昆虫糖蛋白中）时，PNGase F才无法切割。

然而，常规PNGase F酶促反应需要数小时才能释放抗体的N-糖，并且由于偏好性糖释放，去糖基化不完全可能导致结果出现偏差，获得的糖分布可能不能代表治疗性抗体的正确组成。因此，尽快获得准确的N-糖谱对于抗体和抗体融合蛋白等生物治疗药物生产过程中的糖基化监测至关重要。

快速 PNGase F

Fast PNGase F 是一种优化的重组试剂，可在几分钟内快速彻底地对抗体、免疫球蛋白、融合蛋白和其他糖蛋白进行去糖基化。该酶可快速无偏好地去除所有 N-糖，可直接用于下游色谱或质谱分析。 Yeasen 快速PNGase F，N-糖苷酶F（快速版）简化了实验流程，减少了实验时间，同时保证了灵敏度和重复性。

产品特性：

快速地： 几分钟内完成并快速去糖基化。

高纯度： 无蛋白酶、糖苷酶污染，纯度≥95%。

非选择性： 快速且无偏好地去除所有 N-聚糖。

良好的兼容性： 直接用于下游色谱或质谱分析。

测试数据：

一步蛋白质去糖基化：

10 ug 底物/100 ug 抗体和 ddH2O 混合至总体积为 16 uL；
加入4 μL Fast PNGase F Buffer（5x），最终体积20 uL；
添加 1 μL Fast PNGase F。
在 50°C 下孵育 10 分钟。

图2.一步酶切对蛋白质底物（A）和抗体（B）的影响。

1：蛋白质标记物Cat#20350ES) 2：竞争物 + 底物或抗体 3：竞争物 + 底物或抗体 4： Yeasen 快速 PNGase F 5： Yeasen 快速PNGase F6：底物或抗体7： Yeasen Fast PNGase F 8：竞争对手

两步蛋白质去糖基化：

10 ug 底物/100 ug 抗体和 ddH2O 混合至总体积为 16 uL；
加入4 μL Fast PNGase F Buffer（5x），最终体积20 uL；
在 80°C 下孵育 2 分钟，冷却至室温。
添加 1 μL Fast PNGase F。
在 50°C 下孵育 10 分钟。

图3. 两步酶切效果对蛋白质底物（A）和抗体（B）的影响。

结论：

Yeasen Fast PNGase F在同等反应条件下，酶切效率与进口竞争对手相当或更高；
建议进行两步酶切，以确保更高的酶切效率。一些抗体（如Fab N-糖基化）需要预热步骤

以实现有效的去糖基化。

此外， Yeasen 同时还提供常规的PNGase F(Cat#20407ES，比活100000 U/mL)，以及其他类型的糖苷酶，如Endo H糖苷酶H(Cat#20414ES)、Endo S糖苷酶S(Cat#20413ES)。

购买指南

产品编号	20406ES	20407ES	20414ES	20413ES
产品名称	快速地 PNG酶F	PNG酶F	远藤	恩多
来源	酵母重组表达	酵母重组表达	酵母重组表达	大肠杆菌重组表达
具体活动	不适用	10万单位/毫升	100万单位/毫升	8000单位/毫克
切割位点	几乎所有的 N 连接聚糖	几乎所有的 N 连接聚糖	N-连接高甘露糖聚糖	在 IgG 重链的核心二糖结构内进行切割
消化时间	10 分钟	1-3小时	1-3小时	1 小时
糖基化	合适的	合适的	合适的	合适的
蛋白质结构	合适的	合适的	合适的	合适的

订购信息

产品名称	产品编号	规格
快速 PNGase F（无甘油）	20406ES20/50	20吨/50吨
PNG酶F	20407ES01/02	15000 单位 /75000 单位
远藤	20414ES92/97	10000单位 /50000单位
恩多	20413ES80/90	1000单位/5×1000单位