- RT-qPCR 采用高效反向 转录酶

逆转录酶(RT 酶)是一种能够将 RNA 模板转化为互补 DNA(cDNA)的酶。逆转录酶在分子生物学研究中应用广泛,尤其在分子诊断领域发挥着不可或缺的作用。通过逆转录过程,病毒的 RNA 基因组可以转化为 cDNA,然后可以使用 qPCR 等技术进行扩增和检测。这一特性使 HIV、甲型流感和乙型流感等 RNA 病毒的准确诊断成为可能。

图1. 逆转录过程示意图

追求RT-qPCR分子诊断试剂更快速、更灵敏、更易操作成为当前发展的主要趋势。逆转录酶作为RT-qPCR过程中的关键原料之一,需要具备更快的逆转录速度、更高的合成产率、更好的耐热性。为了获得更适用于RT-qPCR的逆转录酶, Yeasen 开发了 Hifair商标 我在M-MLV基础上通过基因改造而来的系列逆转录酶,具有更低的RNase H活性、更高的热稳定性、更强的连续合成能力。

图 2. 逆转录作用示意图

海法逆转录酶

Yeasen 有各种Hifair商标 逆转录酶,可提供多种产品形式,包括酶和预混剂,可根据实际需求选择。下表列出了不同产品的特点和推荐应用 Yeasen 逆转录酶。

表 1 选择指南 希菲尔 逆转录酶

产品名称(产品编号

产品功能

建议应用

海法商标 三、逆转 转录酶 (11111ES)

热稳定性(高达 65°C),适用于复杂模板

RT-LAMP

海法商标 反向

转录酶 (11300ES)

兼容性强、速度快、合成产率高

一步到位 RT-PCR/定量PCR

注意:以上提到的所有酶均有高浓度或无甘油配方。

现在我们重点介绍一种用于 RT-qPCR 分子诊断试剂的逆转录酶:Hifair商标 V逆转录酶。该酶具有兼容性强、速度快、合成产量高的特点,可承受高达58°C的反应温度。特别适合于RT-qPCR分子诊断试剂的开发。

海菲尔性能演示V逆转录酶

1.可承受58℃反应温度,适合复杂RNA模板的逆转录

    图 3. Hifair 的逆转录酶商标 V 逆转录酶和品牌 T* 分别在 55℃和 58℃下孵育 30 分钟,检测残留酶活力。结果表明,Hifair商标 V逆转录酶在58℃孵育30分钟后仍能保持70%的活性,远远高于品牌T*。

    2.RT-qPCR检测率优于其他品牌和 t检测范围为1 pg-1 μg

    图4.以1 pg-1 μg(7个梯度)293T细胞总RNA为模板,采用Hifair进行逆转录商标 V 一步法RT-gDNA消化SuperMix for qPCR(Cat#11142),V*,T*。对获得的cDNA进行qPCR定量分析。结果表明11142ES的灵敏度可达1pg,优于其他品牌。

    逆转录酶突变体文库 Yeasen

    Yeasen 继续推动逆转录酶的进化 和 它的 ZymeEditor商标 平台目前我们已筛选出多种在不同应用领域表现优异的逆转录酶突变体,能够充分满足不同客户群体在多样化应用领域的需求。

    表 2 逆转录酶突变体选择指南Yeasen

    推荐产品

    产品分类

    产品名称

    目录编号

    高效PCR酶系列

    Hieff UNICON™ Hotstart E-Taq DNA 聚合酶,5 U/μL

    10726ES

    Hifair™ V 逆转录酶(200 U/μL)

    11300ES

    尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (UDG/UNG),1 U/μL

    14455ES

    小鼠 RNase 抑制剂 (40 U/µL)

    10603ES

    dNTP 混合物(各 25 mM)

    10125ES

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