限制性内切酶 Yeasen FuniCut™ 系列，使用通用缓冲液进行 5 分钟消化
几乎每个实验室都会用到分子克隆，限制性内切酶是分子克隆实验中不可或缺的一部分，但人们在进行限制性内切酶实验时也经常会遇到各种问题，常见的问题有：
- 限制性内切酶的种类很多，很难选择。
- 错误切割、随机切割或不完全酶切割。
- 消化速度较慢；可能需要一个小时甚至一整夜。
- 此外，多酶消化实验也需要选择多种酶消化bTo
为了帮助您更全面地了解限制性内切酶，下面将简要解释什么是限制性内切酶以及如何对各种内切酶进行分类，以回答第一个问题。
1. 什么是限制性内切酶？
2. 限制性内切酶命名法
3. 内切酶分类的限制
4.
1. 什么是限制性内切酶？
限制性内切酶是一类能够识别双链DNA分子中特定核苷酸序列并在特定位点切割DNA链中磷酸二酯键的酶。
不同的限制性内切酶会识别不同的DNA序列，它们可以在识别序列内部或者距离识别序列不远处切割DNA，从而产生不同的产物，如图1所示。BamHI形成粘性末端，KpnI形成3'粘性末端，EcoRV形成平末端。
图1. BamHI、KpnI、EcoRV消化示意图
2. 限制性内切酶命名法
属名、种名、菌株或血清型、发现顺序是限制性内切酶命名的主要因素。下表 1 以 BstEII 为例展示了命名指南：
表 1. 限制性内切酶命名法
| 缩写 | 姓名 | 含义 |
| 乙 | 芽孢杆菌 | 属名首字母 |
| 英石 | 嗜热脂肪乳杆菌 | 物种名称的前两个字母 |
| 埃 | 等 | 菌株名称的首字母 |
| 二 | 第二次发现 | 在这些细菌中发现的顺序 |
3.内切酶分类的限制
根据结构的复杂程度、作用方式及辅助因子的差异，限制性内切酶可分为四类，下表2总结了各类酶的特点及典型酶。
表 2. 几种限制性内切酶之间的差异
| 核酸内切酶类 | 特征 | 典型的酶种类 |
| I型 | 1. 识别和修改裂解。 2.能识别特定的DNA序列，且酶切位点距离识别位点无限远，可达数千个碱基。 3. 行动需要ATP。 | EcoB、EcoK 等 |
| II 型 | 1.仅具有识别切割功能。 2. 识别序列往往是一个较短的回文序列（约4–8 bp），限制性内切酶的特异性酶切位点通常就是所识别的序列。 3. 作用需要Mg2+。 4. 分子克隆中最常用的限制酶类型。 | HindIII、NotI 等。 |
| III型 | 1.认识与修改消化。 2.关于分离 将识别位点与消化位点分离。 3. 行动需要ATP。 | HinfIII 等人 |
| 类型IV | 1. 仅切割甲基化的 DNA 序列。 2. 识别位点与消化位点之间约有30 bp的距离。 | McrA、McrBC 等 |
如下表 3 所示，也可根据识别位点和消化位点的异同分为三组。
表 3.同裂酶、新裂酶和异尾酶的比较分析
|
| 同裂酶 | 新裂殖酵母 | 等尾目 |
| 识别序列 | 相同的 | 相同的 | 不同的 |
| 消化部位 | 相同的 | 不同的 | 相同的 |
| 典型代表 | AgeI 和 BshTI：均可识别并切割 5′-A↓CCGGT-3′ | SmaI (5′-CCC↓GGG-3′) 和 XmaI(5′-C↓CCGGG-3′) | BamHI (5'-G↓GATCC-3') 和 BglII (5'-A↓GATCT-3') |
鉴于目前市场上部分限制性内切酶仍需过夜酶切，且产品易发生酶切错误，
4. Yeasen FuniCut™ 快速限制性内切酶
图 2.
4.1 特点
- 消化速度快：5-15分钟即可完成消化，比常规消化实验缩短1-2小时以上。
- 通用缓冲液：任何内切酶组合都可以使用相同的缓冲液，从而使多酶裂解反应变得更简单。
- 酶消化效果：与N*相当，且适合其缓冲液。
- 直接电泳通过提供红色缓冲液并允许消化产物直接进行电泳，使过程更简单。
- 精确消化：即使经过一夜的消化，星形活性也非常小。
4.2 表演展示
4.2.1 在 FuniCut™ 缓冲液中，单次、双重和三重消化均需 5 分钟。
图 3. 使用 FuniCut 进行单、双、三重消化™ 缓冲液通常可以在 5 分钟内完成，例如使用 EcoRI+KpnI+SmaI 进行三重消化。
4.2.2 酶消化的效果与N*和T*相当，且与其缓冲液配合良好。
图 4. 与类似的 N*、T* 商品相比，
4.2.3 星号活性极低的过夜消化
图 5. 利用来自
4.2.4 高度冗余，能够处理一些剩余的基质。
图6. 利用FuniCut™快速限制性内切酶EcoR I、Eag I、XbaI、Sac I，分别以1 μg、1.5 μg质粒为底物，酶切5分钟，将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳。
表 4.产品和反应缓冲液兼容性
| 产品名称 | 猫＃ | 识别序列 | 温度 | 热失活温度 |
| T* 缓冲区 | N* 缓冲区 | Ta* 缓冲液 | 受保护碱基 (bp) | 响应 |
| FuniCut™ AscI (查询） | 15001ES50 | GG/CGCGCC | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 1 | 50吨 |
| FuniCut™ AvrII (查询） | 15002ES25 | 卡巴嗪 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 3 | 25吨 |
| FuniCut™ BamHI（查询） | 15003ES76 | 加航 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 3 | 500吨 |
| FuniCut™ BclI (查询） | 15004ES62 | 关税同盟 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 3 | 125吨 |
| FuniCut™ BsaI (查询） | 15005ES50 | GGTCTC(1/5) | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 不是 | 50吨 |
| FuniCut™ BstEII (查询） | 15006ES60 | G/GTNACC | 三十七 | 80 | 100 | 75 | 100 | 75 | 不是 | 100吨 |
| FuniCut™ ClaI (查询） | 15007ES50 | 超敏反应/CGAT | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 4 | 50吨 |
| FuniCut™ DpnII (查询） | 15008ES50 | /关贸总协定 | 三十七 | 80 | 100 | 75 | 100 | 75 | 不是 | 50吨 |
| FuniCut™ EagI (查询） | 15009ES25 | 碳/GGCCG | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 2 | 25吨 |
| FuniCut™ EcoRI (查询） | 15010ES78 | 豐富/亞太區 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 5 | 600吨 |
| FuniCut™ EcoRV (查询） | 15011ES70 | 关口/空中交通管制 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 5 | 200吨 |
| FuniCut™ HindIII (查询） | 15012ES76 | 腺癌/腺癌 | 三十七 | 80 | 100 | 75 | 100 | 100 | 3 | 500吨 |
| FuniCut™ HpaI (查询） | 15013ES50 | 甘油三酸酯/AAC | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 50 | 1 | 50吨 |
| FuniCut™ KpnI (查询） | 15015ES70 | 甘油三酸酯/C | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 2 | 200吨 |
| FuniCut™ MluI (查询） | 15016ES60 | 丙烷/CGCGT | 三十七 | 80 | 100 | 75 | 100 | 100 | 3 | 100吨 |
| FuniCut™ NcoI (查询） | 15018ES30 | 卡塔格 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 3 | 30吨 |
| FuniCut™ NdeI (查询） | 15019ES70 | 腺苷酸/三磷酸 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 3 | 200吨 |
| FuniCut™ NheI (查询） | 15020ES30 | 加拿大航空 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 3 | 30吨 |
| FuniCut™ NotI (查询） | 15021ES50 | 气相色谱/GC | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 2 | 50吨 |
| FuniCut™ PstI (查询） | 15022ES76 | 中药材/G | 三十七 | 不 | 100 | 100 | 100 | 100 | 2 | 500吨 |
| FuniCut™ SacI (查询） | 15023ES60 | 盖格氏 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 3 | 100吨 |
| FuniCut™ SalI (查询） | 15024ES70 | 总经理 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 3 | 200吨 |
| FuniCut™ SbfI (查询） | 15025ES25 | 加拿大CCTGCA/GG | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 2 | 25吨 |
| FuniCut™ 小尺寸 (查询） | 15027ES60 | CCC/GGG | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 1 | 100吨 |
| FuniCut™ Spel (查询） | 15028ES50 | 雙方位 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 2 | 50吨 |
| FuniCut™ SphI (查询） | 15029ES50 | 中山大学 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 1 | 50吨 |
| FuniCut™ SspI (查询） | 15030ES56 | 航空运输/航空运输 | 三十七 | 80 | 100 | 50 | 100 | 100 | 2 | 60吨 |
| FuniCut™ StuI (查询） | 15031ES60 | 总骨密度/骨密度 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 1 | 100吨 |
| FuniCut™ TaqI (查询） | 15032ES70 | 聚酯/聚酯 | 65 | 不 | 100 | 100 | 100 | 100 | 4 | 200吨 |
| FuniCut™ XbaI (查询） | 15033ES76 | 雙重/加対応 | 三十七 | 80 | 100 | 50 | 100 | 100 | 2 | 500吨 |
| FuniCut™ XhoI (查询） | 15034ES76 | 中远海运集团 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 4 | 500吨 |
| FuniCut™ FspI (查询） | 15036ES50 | 气道/气道阻力 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 3 | 50吨 |
| FuniCut™ HinfI (查询） | 15038ES76 | 甘肃省 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 50 | 2 | 500吨 |
| FuniCut™ ApaLI (查询） | 15039ES70 | 政府/TGCAC | 三十七 | 80 | 100 | 75 | 100 | 100 | 4 | 200吨 |
| FuniCut™ NruI (查询） | 15040ES50 | 胶粘剂/胶粘剂 | 三十七 | 不 | 100 | 100 | 100 | 100 | 5 | 50吨 |
| FuniCut™ PacI (查询） | 15041ES25 | 氨酰/氨酰 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 2 | 25吨 |
| FuniCut™ PvuII (查询） | 15042ES70 | 冠状动脉造影/冠状动脉造影 | 三十七 | 不 | 100 | 100 | 100 | 100 | 4 | 200吨 |
| FuniCut™ SacII (查询） | 15043ES50 | 中碳/高碳 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 4 | 50吨 |
| FuniCut™ NsiI (查询） | 15044ES25 | 抗心律失常/ | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 3 | 25吨 |
| FuniCut™ Esp3I (BsmBI) (查询） | 15048ES30 | CGTCTC(1/5) | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 5 | 30吨 |
| FuniCut™ BglII (查询） | 15049ES60 | 关贸总协定 | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 50 | 2 | 100吨 |
| FuniCut™ BstBI (查询） | 15050ES60 | TT/CGAA | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 不是 | 100吨 |
| FuniCut™ MnlI (查询） | 15051ES50 | 加拿大癌症中心(7/6) | 三十七 | 80 | 100 | 100 | 100 | 100 | 2 | 50吨 |
CpG：受CpG甲基化的影响。
EK：受 EcoKI 甲基化的影响。
EB：受 EcoBI 甲基化的影响。
Dcm：受 Dcm 甲基化的影响。
Dam：受到 Dam 甲基化的影响。