非洲猪瘟病毒 - 总主混合物/直接扩增 qPCR 解决方案

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染家猪或野猪引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病,发病率和死亡率可达100%,严重危害全球养猪业,造成难以估量的经济损失,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物疫病。

目前,非洲猪瘟尚无疫苗和有效治疗方法。通过实验室诊断方法快速准确地诊断非洲猪瘟对于防止疾病的传播至关重要。OIE建议将qPCR作为ASF常规诊断的主要工具。

Yeasen 是一家拥有丰富IVD原料研发经验的生产企业。面对非洲猪瘟, Yeasen 积极响应,配合客户制定了非洲猪瘟病毒从提取到检测的三套全流程解决方案。那么这三套解决方案到底是什么?又有哪些应用呢?继续阅读...

图 1. Yeasen 非洲猪瘟检测解决方案

解决方案 I:TaqMan Multiplex qPCR Master Mix(UDG plus)询问

Yeasen的 TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus) (Cat#13171) 是针对 ASFV 检测优化的 Master Mix,含有酶混合物、Mg2+、dNTP 和缓冲液。Master Mix 用于扩增步骤,通过添加引物和探针配置为预混溶液。Master Mix 的设计具有可有效抑制非特异性 PCR 扩增的因子,可将扩增效率提高至 4 重。

产品特性

👍UDG防污染系统,有效防范气溶胶污染风险

👍预混PCR溶液(master mix+引物+探针)在室温下长期稳定,大大简化了检测难度

👍扩增效率高、重复性好

👍适用于多平台、多系统

案例展示

👉预混PCR溶液的长期稳定性
使用Cat#13171配置可37℃放置7天的预混PCR溶液,在ASF质粒体系扩增中反复冻融15次,结果显示PCR溶液37℃放置7天后Ct值及灵敏度无明显变化,反复冻融15次后Ct值无明显变化。

图 2. Cat#13171 TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)(查询)用于ASF质粒体系扩增预混PCR液,具有长期稳定性。2A-37℃0天和7天的Ct值2B-37℃0天和7天的灵敏度2C-15次冻融后的稳定性

👉稳定且可重复的试剂
选取4个不同批次的Cat#13171进行20次ASFV质粒系统扩增实验,Ct值无明显差异,CV均小于1%。

图 3.重复性测试 Yeasen 猫号#13171

👉多平台多系统适用
Yeasen 使用Cat#13171分别在Bio-Rad CFX96、ABI Q5、Slan平台上扩增非洲猪瘟ASFV/ACT双质粒,可以看出 Yeasen Cat#13171适用于各种型号的仪器,数据可靠稳定。

图 4. Bio-Rad CFX96 实时 PCR 系统


图 5. ABI Q5 实时 PCR 系统

图 6. Slan 实时 PCR 系统

解决方案二:通用 TaqMan 多重 qPCR 预混液

Yeasen的 Universal TaqMan 多重 qPCR 主混合物(Cat#11211)经过深度优化,可使用抗体修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶和匹配的多重缓冲液高效扩增低浓度模板。该产品支持单管中最多 4 重 PCR 反应,是基因分型和多重 qPCR 分析的理想选择。

产品特性

👍对血液杂质耐受性强,可与 Yeasen 核酸提取试剂 Cat#13720 核酸释放试剂 V2,适用于直接 qPCR
👍超高灵敏度达3份/反应,大大提高检测准确率
👍预混PCR溶液(Master Mix+引物+探针)在室温下长期稳定,大大简化了检测难度

案例展示

👉对血液杂质耐受性强
与其他品牌的同类产品相比, Yeasen Cat#11211 对血液样本中的抑制剂具有更高的耐受性。结果表明 Yeasen Cat#11211 对 EDTA 和柠檬酸钠有很高的耐受性,并能承受 0.5% 的全血。

图 7. Cat#11211 通用 TaqMan 多重 qPCR 预混液 和不同品牌的主混合物用于 ASF qPCR 溶液,分别补充 3 mM EDTA(3A)、6 mM 柠檬酸钠(3B)、0.5% 血液(3C)。

👉超高灵敏度,每次反应可达 3 份

对不同品牌产品进行20次重复的ASFV质粒扩增实验,结果表明,ASFV质粒的检出率 Yeasen 产品较高。

图8. 不同品牌同类产品检测率对比(最终系统中有3份拷贝)

👉长期稳定性,常温下可稳定7天

ASFV/ACT双质粒系统PCR液在4℃、25℃、37℃条件下放置7天后仍能保持稳定性能,可见Ct值和荧光值均无明显变化。

图9. PCR溶液的稳定性

解决方案三: 等温扩增

Yeasen的产品支持等温扩增技术,有助于更快、更有效地进行 ASF 检测。 Cat# 14402 Hieff™ Bst Plus DNA 聚合酶(40 U/μL) 来源于嗜热土芽孢杆菌 DNA 聚合酶 I,缺乏 5'-3' 外切酶活性。本产品具有更强的5'-3'DNA聚合酶活性、链置换活性和dUTP耐受性,更适合抗污染的等温扩增反应,如LAMP、CPA等。

产品特性

👍扩增效率高

👍高产量扩增

👍dUTP 耐受性,可与 Cat#10303 尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (UDG/UNG) 结合使用(查询),热不稳定,1 U/μL,以防止气溶胶污染的风险

案例展示

👉进口品牌 N* 产品的更优质替代品

扩增过程使用来自 Yeasen 和N*公司样品,不同品牌样品的Ct值和荧光强度差异均无统计学意义。

图10. 不同品牌的扩增曲线

订购产品

Yeasen 在上述三种解决方案中,我们提供了多种用于检测ASFV的产品,下表列出了所述产品及相关产品,请根据您的需求选择合适的检测方法和最优产品。

类别

产品描述

产品名称

库存单位

萃取

磁珠提取

核酸释放试剂V2(查询

13720ES

qPCR 混合物

预混料稳定

Hieff Unicon™ TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)(查询

13171ES

高灵敏度

Hieff Unicon™ 通用 TaqMan 多重 qPCR 预混液

11211ES

酶及抗体

塔克

Hieff UNICON™ HotStart Direct Taq DNA 聚合酶(查询

10717ES

Taq抗体

Hieff™ 双阻断抗 Taq DNA 聚合酶抗体

31303ES

布施

Hieff™ Bst Plus DNA 聚合酶(40 U/μL)

14402ES

Hieff™ Bst Plus DNA 聚合酶(2000 U/μL)(查询

14403ES

联合发展集团

尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG),不耐热(查询

10303ES

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