猴痘病毒检测整体解决方案 Yeasen

5月初英国报告首例猴痘确诊病例,并迅速在非流行国家和地区暴发。截至2022年9月21日,全球已有106个国家/地区确诊,累计63117例。9月16日,重庆确诊一例输入性猴痘病例,为中国大陆首例,引发社会关注。

Figure 1. 2022 Monkeypox Outbreak Global Map(From the CDC)

图 1. 2022 年猴痘疫情全球地图(来自 CDC)

1. 什么是猴痘?
2. 猴痘的历史
3. 传播方式
4. 体征和症状
5. 检测方法
6. 产品匹配
7. 产品订购

1. 什么是猴痘?

猴痘病毒是一种双链DNA病毒,全长约197kb,属于痘病毒科正痘病毒属(猴痘病毒)。猴痘病毒有两个分支(西非分支和刚果盆地分支)。其中西非分支病死率约3.6%,刚果盆地分支病死率可达10.6%。2022年5月以来在非流行区发现的猴痘病例样本,测序分析显示西非分支[1]

Figure 2. Monkeypox picture (picture from CCDC)

图2. 猴痘图片(图片来自CCDC)

2. 猴痘的历史

1958 年,在用于研究的猴子群中爆发了两次类似痘的疾病,人们发现了猴痘。尽管这种疾病被命名为“猴痘”,但其来源仍不清楚。不过,非洲啮齿动物和非人类灵长类动物(如猴子)可能携带病毒并感染人类[2]
1970 年记录了首例人类猴痘病例。在 2022 年疫情爆发之前,中非和西非的几个国家都报告了猴痘病例。此前,非洲以外几乎所有的猴痘病例都与国际旅行到该病常见国家或通过进口动物有关。这些病例发生在多个大洲[2]

3. 传播方式

它可以从动物传播给人类,从人传播给人类,以及从环境传播给人类。
现已明确猴痘可通过3种途径感染人类:一是由受感染的动物传染给人,病毒可能通过破损的皮肤、呼吸道或黏膜(眼、鼻或口)进入人体。二是通过人与人之间的密切接触传播,包括性交、接吻、拥抱或触摸患猴痘的身体部位,以及接触被病毒污染的衣物、床上用品、毛巾或餐具等也可能被感染的物品。三是通过呼吸道飞沫传播[3]

4. 体征和症状

主要临床表现为发热、皮疹、淋巴结肿大。
早期最常见的症状是发热、头痛、肌肉酸痛、淋巴结肿大等,发病后1~3天出现皮疹,典型皮疹首先出现在面部,逐渐蔓延至四肢等部位,皮疹多呈离心性。,面部及四肢皮疹较躯干多见,手掌、足底均可出现皮疹,皮疹数目从几个至数千个不等;还可累及口腔黏膜、消化道、生殖器、结膜、角膜等。
症状通常持续 14 至 21 天,患者通常会自行缓解。结痂脱落后可能会留下红斑或色素沉着,甚至留下疤痕。值得注意的是,结痂在脱落并在下面形成新的皮肤层之前仍具有传染性[3]

5. 检测方法

为有效防控猴痘疫情,防止病毒输入扩散,全球IVD企业积极响应。作为IVD检测试剂生产原料供应商, 和试剂溶液, Yeasen 提供完整的解决方案,帮助高效检测猴痘病毒。从核酸提取到试剂组分(酶试剂和假病毒),以及半成品试剂盒(引物探针、酶试剂和质粒对照), Yeasen 可以稳定地为您提供供货。

Figure 3. Virus detection method

图3. 病毒检测方法

5.1 方法优势

  • 操作高效便捷—一套试剂盒,包含所有组件,无需繁琐操作,一步添加
  • 检测灵敏度高—转基因抗体法热启动Taq酶,1拷贝/反应也能检测到
  • 试剂稳定性强—37℃保存1周,反复冻融后性能稳定
  • 预防UDG污染—系统中添加了dUTP/UDG系统,有效防止气溶胶污染的风险。
  • 适用于多种平台——适用于 Bio-Rad CFX96、ABI Q5 和 Slan

5.2 产品匹配

  • 核酸提取试剂:MolPure™ 磁性拭子病毒 DNA/RNA 试剂盒(Cat#18300ES)
  • 猴痘检测试剂: 猴痘病毒实时 qPCR 试剂盒(编号 13862ES/编号 13863ES)
  • 猴痘假病毒:猴痘病毒假病毒(Cat#12099ES/Cat#12100ES)

6. 产品推荐

6.1 猴痘病毒实时荧光定量PCR试剂盒(Cat#13862ES)

产品优势:
操作高效便捷
灵敏度高、特异性好
超强稳定性
重复性好

6.1.1案例展示:

  • 37℃超强热稳定性

将Cat#13862ES置于37℃条件下7天对MPXV进行扩增,结果显示37℃条件下7天对Ct值和荧光值无明显影响,热稳定性强。

Figure 4. Yeasen(Cat#13862ES)37℃ accelerated 7-day stability verification

图 4. Yeasen (Cat#13862ES) 37℃加速7天稳定​​性验证

  • 超强冻融稳定性

将Cat#13862ES在-20℃下冻融,可分别扩增MPXV 10倍、20倍、50倍。结果表明,在-20℃条件下冻融10次、20次、50次对Ct值和荧光值无明显影响,冻融稳定性强。

Figure 5. Yeasen(Cat#13862ES)-20℃ freeze-thaw stability verification

图 5. Yeasen(Cat#13862ES)-20℃冻融稳定性验证

  • 超高灵敏度,1 Copies/μL亦可检测

使用 Yeasen 用猴痘产品(Cat#13862ESES)1000拷贝/μL、100拷贝/μL、10拷贝/μL、1拷贝/μL、阴性空白(NTC)检测MPXV,可见单拷贝也能检测出来(Ct值在38左右),且48孔NTC检测重复性好,基线平稳,NTC峰呈阴性,无拖尾现象,灵敏度高,特异性强。

Figure 6. MPXV sensitivity detection

图 6. MPXV 灵敏度检测

Figure 7. MPXV specificity detection

图 7. MPXV 特异性检测

  • 试剂稳定且可重复

Yeasen 选用猴痘检测试剂盒(Cat#13862ESES),对低、中、高浓度阳性样品进行10次重复试验,结果显示,FAM通道中阳性样品的CV≤2%,空白对照无出峰、无拖尾现象,重复性良好。

Figure 8. Repeatability Test

图 8. 重复性测试

6.2 猴痘病毒实时 qPCR 试剂盒 (UDG Plus)(编号:13863ES)

产品优势:

1. 操作高效便捷
(2)灵敏度高、特异性好
3.超强稳定性
⑷ 重复性好
⑸ UDG污染防治

6.2.1案例展示:

  • 37℃超强热稳定性

将Cat#13863ES分别置于37℃条件下扩增MPXV 7天和14天,结果显示37℃条件下7天和14天后Ct值和荧光值均无明显影响,热稳定性强。

Figure 9. Yeasen(Cat#13863ES)37℃ accelerated 7-day, 14-day stability verification

图 9. Yeasen(Cat#13863ES) 37℃加速7天、14天稳定性验证

  • 超强冻融稳定性

Cat#13863ES在-20℃冻融50次扩增MPXV,结果显示-20℃冻融50次对Ct值和荧光值无明显影响,冻融稳定性强。

Figure 10. Yeasen(Cat#13863ES)-20℃ freeze-thaw stability verification

图 10. Yeasen(Cat#13863ES) -20℃冻融稳定性验证

  • 高灵敏度和特异性

使用 5 拷贝/μL 的 MPXV 和阴性空白 (NTC) 进行检测 Yeasen monkeypox产品(Cat#13863ESES)检测结果显示基线稳定,FAM检出率为100%,最低检测限为5拷贝/μL,且在NTC的48孔重复检测过程中,FAM及VIC通道基线稳定,NTC阴性峰无任何拖尾现象,具有较高的灵敏度和特异性。

Figure 11.MPXV Sensitivity detection

图11.MPXV灵敏度检测

Figure 12. MPXV specificity detection

图 12. MPXV 特异性检测

  • 试剂线性良好

将阳性模板从1×105拷贝/μL浓度稀释10倍, Yeasen 采用qPCR monkeypox kit(Cat#13863ES)重复检测2次,以起始拷贝数的对数为横坐标,Ct值为纵坐标,制作标准曲线,结果显示,猴痘基因FAM通道线性范围为10~1×105拷贝/μL,R2>0.99,具有良好的线性关系。

Figure 13. Linearity Test

图 13. 线性测试

  • 稳定且可重复的试剂

Yeasen 选用qPCR monkeypox kit (Cat#13863ES)对低、中、高浓度阳性进行10次重复试验,对阴性对照(NC)和空白对照(NTC)进行20次重复试验,结果显示:FAM通道阳性样本CV小于3%,阴性对照和空白对照无峰化、无拖尾现象;VIC通道NC的Ct值均小于35,CV小于0.3%,NTC无峰化、无拖尾现象,重复性良好。

Figure 14. Repeatability Test(FAM)

图 14. 重复性测试(FAM)

Figure 15. Repeatability Test(VIC)

图15.重复性测试(VIC)

7. 产品订购

Yeasen 生物科技(上海)有限公司成立于2014年,是一家从事工具酶原料及抗原抗体研发生产的高新技术企业,产品涵盖医药、食品安全检测、育种、司法等行业的分子诊断酶、蛋白、抗体等,致力于为生命科学领域的客户提供优质的产品和服务。猴痘病毒产品采购指南如下:

表 1.相关产品

产品类型

产品 描述

产品 姓名

商品编号

规格

成套工具

酵素混合物

猴痘病毒实时 qPCR 试剂盒(咨询)

13862ES03

24T

13862ES48

48吨

13862ES59

96T

猴痘病毒实时 qPCR 试剂盒

13863ES25

25吨

13863ES60

100吨

13863ES80

1000吨

假病毒

F3L 基因

猴痘病毒 F3L-假病毒 (咨询)

12099ES03

1 毫升

12099ES08

5 × 1 毫升

B6R 基因

猴痘病毒 B6R-假病毒 (查询)

12100ES03

1 毫升

12100ES08

5 × 1 毫升

参考

[1] 中国疾病预防控制中心:猴痘健康提示
[2] CDC:关于猴痘 | 猴痘 | 痘病毒 | CDC
[3]玉林晚报:大陆首例猴痘病例来源已查明!广西疾控紧急提醒

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