使用传统的高保真酶进行PCR,难免会遇到一些棘手的问题,比如保真度不够,导致扩增片段测序后,目标碱基发生突变或缺失;扩增时间也比较长,有时扩增一个5kb的片段需要近2个小时。现在,小易推出一款快速高保真PCR,解决你的烦恼!——Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix(超快速高保真 PCR 预混液)。
这 2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR 预混液(含染料) 含有预加电泳指示剂,可直接使用PCR产物进行电泳,扩增产物为平末端,该高保真酶混合物具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性高等优点,反应体系中只需加入引物和模板即可,另外产品中还含有特异性保护剂,确保高保真PCR预混液经过反复冻融仍能保持稳定活性。
产品特性
- 高的 保真度: 低的 不匹配 速度, 和 一个 根据 不匹配 比率 的 231/300,000 在 高的 气相色谱 易发生突变 序列;
- 快速地 放大 速度: 扩大 速度 作为 快速地 作为 5 秒 每 千字节;
- 宽的 适用性: 有能力的 的 覆盖 基因 和 20-80% 气相色谱 内容, 容忍 老鼠 裂解物 和 20% 血;
- 好的 稳定: 能 是 存储 在 37°C 为了 7 天 没有 影响 产品 表现;
- 快速地 和 方便的: 简单地 添加 引物 和 模板 为了 放大, 來 和 加载中 染料 为了 直接的 电泳。
产品性能演示
高保真度,低失配率

以不同物种基因组为模板,选取6个GC含量丰富、碱基突变/缺失概率较高的片段进行扩增,将各PCR产物克隆至载体,每条序列挑取100个单克隆进行测序,确认碱基错配/突变情况,结果显示快速高保真PCR试剂盒(10164ES)的碱基错配/突变率优于国内外品牌试剂。
延长时间可达5秒/kb

使用快速高保真酶预混液(10164ES)和Product T,以5sec/kb的延伸速率从100ng人类基因组DNA模板中扩增出不同长度的片段(0.4~10kb),延伸所需时间为5sec/kb。结果表明快速高保真酶预混液(10164ES)可以以5sec/kb的延伸速率扩增10kb以内的片段。
可扩增不同GC含量的基因片段
使用快速高保真酶预混液(10164ES)从人类基因组DNA模板中扩增GC含量为23-76%的基因片段,延伸时间设置为5sec/kb。结果显示该产品具有良好的扩增特异性,能够扩增不同GC含量的片段。
能够扩增具有不同GC含量的基因片段
使用快速高保真酶预混液(10164ES)对不同样本的不同长度的片段进行扩增,延伸时间设定为5-10秒/千碱基,结果表明该产品具有良好的扩增特异性,且能兼容各种模板的不同片段的扩增。
注:1. 小鼠基因组 DNA 1 kb;2. 小鼠基因组 DNA 2 kb;3. 小鼠基因组 DNA 6 kb;4. 玉米基因组 DNA 1 kb;5. 水稻基因组 DNA 2 kb-A;6. 水稻基因组 DNA 2 kb-B;7. 人 293 细胞 cDNA 1 kb;8. 人 293 细胞 cDNA 2 kb;9. 人 293 细胞 cDNA 3 kb;10. 人 293 细胞 cDNA 12 kb;11. 大肠杆菌培养液 8 kb;12. 大肠杆菌培养液 16 kb;13. 水稻基因组 DNA 10 kb-A;14. 水稻基因组 DNA 10 kb-B;15. 水稻基因组 DNA 10 kb-C; 16.水稻基因组DNA 20 kb-A;17.水稻基因组DNA 20 kb-B;18.人血液直接扩增3 kb。
跨物种模板扩增检测率高
利用快速高保真酶预混液(10164ES)对拟南芥、油菜、马铃薯中0.5~10kb范围内不同GC含量的片段进行扩增,延伸时间为5sec/kb,结果表明快速高保真酶预混液(10164ES)可以保证扩增成功。
使用快速高保真酶预混液(10164ES)对拟南芥、油菜、果蝇、秀丽隐杆线虫、斑马鱼等5个基因组的随机序列进行扩增,片段大小为0.5~10kb,覆盖20~80%GC含量,延伸时间设置为5sec/kb。结果表明,快速高保真酶预混液(10164ES)具有较高的检出率。
稳定性好
使用已热加速在37℃下保存3天和7天的快速高保真酶预混液(10164ES),从100ng人类基因组DNA中扩增出3kb和5kb的DNA片段,延伸时间设定为5秒/kb,结果表明产品稳定性良好。
客户试用反馈
动物 基因组DNA-120bp-50%GC
客户评价:PCR过程快速,条带合适,可直接上样琼脂糖凝胶电泳。N牌的条带偏向上,可能是受其自身缓冲液的影响,由于没有添加上样缓冲液,该产品可以替代我目前实验方案中的高保真酶。
植物 cDNA-729bp-45.13%GC
客户评价:相比T品牌,克隆条带更清晰、更均匀,整个PCR过程更快,跑胶时无需额外添加染料,非常方便、省时。
微生物 gDNA-1158、1953bp-58.8%、52.9%GC
顾客评价:和V牌子相比,效果差不多,但是个人觉得更胜一筹。
植物 cDNA-2000bp-40%GC
客户评价:效果很好,条带清晰。
高保真 PCR 选择指南
产品定位 | 产品名称 | 猫# |
5s/kb,确保保真度和速度(使用 染料) | 10164ES | |
5s/kb,确保保真度和速度(无染料) | 2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR 预混液 | 10163ES |
83×Taq,高检测率(含染料) | 2×Hieff Canace™ Plus PCR Master Mix(含染料) | 10154ES |
83×Taq单酶+Buffer分离 | 10153ES |