逆转录是将 RNA 转化为互补 DNA (cDNA) 的过程,由逆转录酶介导。在退火引物存在的情况下,逆转录酶首先与 RNA 模板结合。逆转录酶的 RNA 依赖性 DNA 聚合酶活性通过从反应混合物中掺入 dNTP 来合成 cDNA。该过程导致形成 cDNA:RNA 混合链,这被称为第一链 cDNA 合成。

莫洛尼鼠白血病病毒(M-MLV)逆转录酶是分子生物学实验过程中常用的逆转录酶之一。为了获得更高的逆转录效率、更好的热稳定性以及更高的 cDNA 合成速率,原始逆转录酶通常经过基因改造。目前,市场上的逆转录试剂通常需要 15 至 30 分钟的反应时间,相对较长。当反应样本数量较大时,整体时间消耗会急剧增加。亿生现有的 5 分钟逆转录系列产品,只需 5 分钟即可完成逆转录过程,省时高效。

产品 定位

产品名称

猫#

快速、高效、高产的逆转录预混料

希菲尔™ AdvanceFast 1st Strand cDNA 合成 SuperMix 用于 qPCR

11156ES

快速、高效、高产的逆转录预混料(去除 gDNA)

希菲尔™ AdvanceFast 1st Strand cDNA 合成 SuperMix 用于 qPCR(DNA 消化器加)

11155ES

一步快速完成 gDNA 去除和逆转录预混

希菲尔™ AdvanceFast 一步法 RT-gDNA 消化 SuperMix,适用于 qPCR

11151ES

灵活引物选择快速逆转录试剂盒(带 gDNA 去除)

希菲尔™ AdvanceFast 第一链 cDNA 合成试剂盒(无染料)

11150ES

灵活引物选择快速逆转录试剂盒(含 gDNA 去除和追踪染料)

希菲尔™ AdvanceFast 第一链 cDNA 合成试剂盒

11149ES

精品推荐一

快速、高效、高产逆转录预混料(带 gDNA 去除)(目录号:11155ES)

来自不同模板的高逆转录产量

样本

293T 细胞

拟南芥

老鼠

鱼肝

11155ES

23.4↓

19.6↓

24.9↓

21.1↓

品牌A

24.9

21.3

27.5

21.3

品牌B

26.1

20.5

27.1

23.1

品牌C

25.7

19.8

27.3

21.9

品牌D

24.3

21.3

28.1

24.5

图。以人293T细胞、拟南芥、鼠肝、鱼肝的RNA模板进行逆转录。A、B、C、D品牌均为两步消化逆转录试剂,逆转录时间从15到20分钟不等。测试结果显示,Hifair 11155ES 5分钟逆转录试剂盒与其他品牌相比产量更高,Ct值更低。

精品推荐二

5 分钟一步消化和逆转录预混料(目录号:11151ES)

逆转录产量高

图。以人293T细胞RNA为模板,分别检测3个基因。A、B、C品牌均为一步法gDNA去除反转录试剂。检测结果显示,在1 μg、10 ng Total RNA的投入量下,11151ES试剂盒反转录产量优于其他品牌,且Ct值更小。

图. 以拟南芥RNA为模板,A、B、C品牌均为一步法gDNA去除反转录试剂,试验结果显示,在1 μg、10 ng Total RNA输入量下,11151ES试剂盒反转录产量优于其他品牌,且Ct值较小。

出色的灵敏度

图. 以人293T细胞RNA为模板,扩增30%GC、50%GC、60%GC、70%GC含量的基因,分别以100pg、1ng、10ng、100ng、1μg总RNA输入量进行逆转录,并进行荧光定量检测。结果表明,11151ES可适应100pg~1μg RNA输入量的逆转录。

精品推荐 T

5分钟快速逆转录试剂盒(猫号:11149/11150ES

高灵敏度,最低检测限可达 10 pg

图。以293T细胞总RNA为模板,用11149ES进行逆转录,并将得到的cDNA进行qPCR定量分析。结果表明,11149ES可以成功逆转录10 pg至1 μg范围内的RNA输入,保证准确的定量结果。

扩增性能好,最长扩增14kb片段

数字。以293T细胞总RNA为模板,用11149ES进行反转录,对得到的cDNA进行PCR检测。结果表明,11149ES可以合成1kb~14kb大小的cDNA片段,后续PCR具有一定的适用场景。如果需要直接反转录10kb以上的片段,建议延长反转录时间至20-30分钟,以保证最终片段的获得。

逆转录效率比较

RNA 输入量

Ct值

11149ES

品牌A

1微克

15.2

15.5

100 纳克

18.0

18.5

10 纳克

21

21.7

1 纳克

24.5

25.1

100 包

29.1

29.7

10 页

32.7

34.3

图。以293T细胞总RNA为模板,分别用11149ES和品牌A进行反转录,其中11149ES不经过gDNA去除步骤,将得到的cDNA进行qPCR定量分析。结果显示,品牌A反转录时间为13分钟,11149ES反转录时间为5分钟。不同产品定量分析发现,11149ES的Ct值小于或与竞争品牌相近,说明11149ES的5分钟反转录效率优于或与品牌A相当。

RNA 输入量

Ct值

11149ES

品牌B

1微克

16.2

17.4

100 纳克

19.0

20.5

10 纳克

22

23.8

1 纳克

二十六

27.9

100 包

31.4

33.2

10 页

32.9

35.6

数字。以293T细胞总RNA为模板,分别用11149ES和品牌B进行反转录,其中11149ES不经过gDNA去除步骤,将得到的cDNA进行qPCR定量分析,结果显示品牌B反转录时间为20分钟,11149ES反转录时间为5分钟。不同底物量定量分析发现11149ES的Ct值小于或与品牌B相近,说明11149ES的5分钟反转录效率优于或与品牌B相当。

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方法

产品 定位

产品名称

猫#

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11185ES

高敏通用定量预混剂(染料型)

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11184ES

逆转录

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