——更多基因分型，更少时间和更少试剂
PCR基因分型等实验通常需要从样本中纯化基因组DNA。当需要检测的样本较多时，纯化基因组DNA的过程耗时、重复且成本高昂。
智能 PCR：直接 PCR
图1 直接PCR扩增工作流程
A.直接法：取少量样本直接加入PCR Master Mix中进行PCR鉴定。技术优势
直接：无需耗时且昂贵的 DNA 纯化。
快速：10分钟完成模板制备，30分钟完成PCR反应。
简单：无需切割或研磨即可裂解样品，并且 PCR 混合物处于预混合形式，从而减少了移液步骤的数量。
节省：所用材料量少。
高通量：裂解反应可在96孔板中完成。
抗抑制：对各种动物、植物样品有耐受性。
Direct PCR Kit实验流程
该系列产品采用独特的蛋白酶裂解系统对样本进行裂解，裂解液可直接作为模板，搭配试剂盒提供的PCR Master Mix进行基因扩增。
图2 小鼠组织直接PCR实验流程
如图。3 植物组织直接PCR实验流程
直接 PCR 产品选择表
| 产品系列 | 小鼠直接PCR第二代 | |||
| 产品编号 | 10189ES | 10185ES | 10188ES | 10187ES |
| 规格 | 20 吨/50 吨/200 吨/500 吨 | 50吨/200吨 | 20 吨/50 吨/200 吨/500 吨 | 50吨/200吨 |
| 特征 | ||||
| 扩增子长度 | ≤5kb | ≤1kb | ≤8kb | ≤1kb |
| 延伸时间 (s/kb) | 3-20秒 | 30 秒 | ≤2kb：3-5秒 ≤8kb：10秒 | 60 秒 |
| 适用生物 | 小鼠、大鼠 | 小鼠、大鼠 | 人类、老鼠、山羊、鸡、猪等。 | 大米、玉米、烟草、油菜籽、小麦、大豆等。 |
| 适用组织/材料类型 | 老鼠尾巴、老鼠耳朵、脚趾（带肌肉）等器官 | 老鼠尾巴、老鼠耳朵、脚趾（带肌肉）等器官 | 含有常见抗凝剂（如 EDTA、肝素、柠檬酸盐）的新鲜血液、冷藏（冷冻）血液以及商用干血斑（如 Whatman903）® 和自由贸易协定® | 嫩叶、老叶、幼苗、嫩茎 |
| 示例用法 | 组织：5 毫克 鼠尾：1-5 毫米 | 组织：5-10 毫克 鼠尾：1-5 毫米 | 全血：0。5%-20% 沃特曼® 干血斑：1 mm2 | 叶：1-10毫米 种子：1-3毫米 |
| 基因组释放时间 | 5-10分钟 | 15 分钟 | 0-3分钟 | 0-10 分钟 |
| 产品最终结构 | 钝端 | 钝端 | 钝端 | 钝端 |
| 退火温度 | 温度-(2~5)℃ | 温度-(2~5)℃ | 温度-(1~2)℃ | 温度-(2~5)℃ |
| GC 裁剪范围 | 29-70％ | 30-70% | 30-75% | 40-65％ |
| 5'-3' 核酸外切酶活性 | 是的 | 是的 | 是的 | 是的 |
| 应用 | ||||
| 基因分型 | 是的 | 是的 | 是的 | 是的 |
| 多重PCR | 最多 5X |
| 最多 3-4 倍 |
|
| 直接样本扩增 | 是的 | 是的 | 是的 | 是的 |
| 其他功能 | ||||
| 电泳指示剂 | 无色 | 蓝色的 | 无色 | 蓝色的 |
| 热启动 | 是的 | 是的 | 是的 | 是的 |
| 预混/套装 | 套件（含混合料） | 套件（含混合料） | 套件（含混合液+缓冲液） | 套件（含混合料） |
产品优势
改良的Taq DNA聚合酶是直接PCR的保证：它对抑制剂有超强的耐受性。
使用未纯化样本作为模板时，会引入许多抑制PCR反应的成分，使用普通的PCR反应体系和Taq DNA聚合酶很难达到理想的结果，甚至无法进行PCR扩增。本系列试剂盒中的PCR Mix是经过配方优化的预混液，采用改良的Taq DNA聚合酶，增加了与模板DNA的结合能力，对常见的PCR抑制剂具有更高的耐受性，从而具有更广泛的模板适应性。
图4 Direct PCR Kit中的PCR Mix对杂质的耐受性较高。 采用相同量的模板，用不同的PCR Mixes进行PCR，并在体系中添加不同浓度的PCR反应抑制剂，比较不同条件下PCR产物的量。
是宜生 针对不同的样品开发了一系列的产品：
- 一、啮齿类特异性：小鼠组织直接 PCR 试剂盒 Plus (10189ES)
适用样本：小鼠组织（如小鼠尾巴、小鼠耳朵、小鼠脚趾等）
- 扩增效率高（长度、速度、GC 兼容性）
图5 小鼠组织直接PCR试剂盒Plus扩增不同组织裂解物。1：质粒；2：小鼠耳；3：小鼠尾；4：肝脏。裂解条件：70℃裂解10分钟，95℃灭活5分钟。目的片段为1 千字节, 2 千字节, 3 kb和6 kb，延伸时间分别设置为 3、5、10 和 20 秒/kb。M： 10510ES60 (
- 广泛的模板兼容性（10189ES）
图6 使用小鼠组织直接 PCR 试剂盒 Plus 直接裂解（70°C，10 分钟）并扩增人 293 细胞 （1）、唾液 （2）头皮组织 （3）所有样品均显示出清晰的目标条带，M：10510ES60（
- II. 多物种血液通用型：血液高级直接PCR试剂盒（10188ES）
- 扩增长度可达 8 kb
图7 使用Blood Advanced Direct PCR Kit从人全血中直接扩增不同长度的DNA片段。血液样本保存在-20℃，以EDTA为抗凝剂。血液模板浓度为10％，延伸时间设置为10秒/kb。M：10510ES60（
- 高耐受性
图8A： 使用Blood Advanced Direct PCR Kit从人EDTA抗凝全血中直接扩增2kb、GC含量71%的DNA片段，血液模板浓度0.5-50%梯度设置，延伸时间设置为10sec/kb。B： Blood Advanced Direct PCR Kit用于从小鼠EDTA抗凝全血中直接扩增GC含量为67%的2.2kb DNA片段。血液模板浓度设置为0.5-50%，延伸时间为10秒/kb。M:10510ES60 (
- III. 植物特异性类型：植物组织直接 PCR 试剂盒（10187ES）
- 已通过多种植物样本验证
图9 不同植物叶片组织直接扩增结果。M：100 bp DNA ladder。C：以相应植物的纯化基因组DNA为模板。1-2：以叶片组织裂解液为模板。循环数：30个循环。
客户案例
- 一、小鼠基因型鉴定
广州某生物公司：
图10 使用Mouse Direct PCR Kit (10189ES) 扩增小鼠尾部。目的基因：500 bp；裂解时间：10 min；PCR反应体系：25 μL，延伸时间：5 sec/kb。
- 二、水稻基因直接扩增
二十 大学
图11 使用Plant Direct PCR Kit（10187ES）扩增水稻相关基因。
R兴高采烈 磷产品
| 产品定位 | 产品名称 | 产品编号 | 产品规格 |
| 高品质琼脂糖 | 10208ES60/76 | 100克/500克 | |
| 核酸染色（紫外光下） | 10202ES76 | 500 μL | |
| PCR快速升级，可进行菌落PCR，适合复杂模板扩增 | 10167ES03/08 | 1毫升/5×1毫升 |